Πρωτεΐνη Bence-Jones

Τα ούρα ενός υγιούς ατόμου δεν περιέχουν πρωτεΐνη Bence-Jones, η οποία αντιπροσωπεύεται από ελαφριές αλυσίδες ανοσοσφαιρινών που ανιχνεύονται ως αποτέλεσμα του σχηματισμού κακοήθων όγκων.

Οι εργαστηριακές εξετάσεις για την παρουσία συγκεκριμένων πρωτεϊνών χαμηλού μοριακού βάρους είναι απαραίτητες για τη διάγνωση μιας σειράς παθολογικών καταστάσεων (συχνότερα προβλήματα με το β-ανοσοποιητικό σύστημα), καθώς και για τον προσδιορισμό της αποτελεσματικότητας της θεραπείας που χρησιμοποιείται.

Σε περίσσεια, η πρωτεΐνη Bence-Jones παράγεται από τα πλασματοκύτταρα, κινείται με την κυκλοφορία του αίματος και αποβάλλεται μέσω της ούρησης. Αυτή η τελευταία ιδιότητα των πρωτεϊνικών σωμάτων επιτρέπει σε κάποιον να υποψιαστεί τις ακόλουθες ασθένειες κατά την εξέταση ούρων:

• μυέλωμα;
• οστεοσάρκωμα;
• πλασματοκύτωμα;
• χρόνια λεμφοκυτταρική λευχαιμία;
• λεμφογρονουλωμάτωση;
• πρωτοπαθής αμυλοείδωση;
• μακροσφαιριναιμία;
• ιδιοπαθής μονοκλωνική γαμμαπάθεια.

Η σύνδεση μεταξύ της απελευθέρωσης μιας συγκεκριμένης πρωτεΐνης και της επακόλουθης νεφρικής δυσλειτουργίας που προκαλείται από την τοξική επίδραση των πρωτεϊνικών σωμάτων στις επιθηλιακές δομές των νεφρικών σωληναρίων, η οποία με τη σειρά της προκαλεί το φαινόμενο της δυστροφίας, του συνδρόμου Fanconi και της νεφρικής αμυλοείδωσης, έχει επιβεβαιωθεί κλινικά.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]

Πρωτεΐνη Bence Jones στα ούρα

Η παρουσία πρωτεΐνης στα ούρα ονομάζεται πρωτεϊνουρία. Ως προνεφρική πρωτεϊνουρία νοείται η παρουσία τεράστιας ποσότητας πρωτεΐνης χαμηλού μοριακού βάρους στα ούρα. Σε αυτή την περίπτωση, δεν υπάρχει βλάβη στο νεφρικό φίλτρο και τα νεφρικά σωληνάρια και η φυσιολογική νεφρική λειτουργία δεν είναι σε θέση να εξασφαλίσει την επαναπορρόφηση των πρωτεϊνικών σωμάτων. Η εξωνεφρική (ψευδής) πρωτεϊνουρία, δηλαδή η εμφάνιση χωρίς διαταραχή της νεφρικής λειτουργίας, υποδηλώνει την παρουσία μολυσματικής ή κακοήθους διαδικασίας στο σώμα. Η πρωτεϊνουρία παρατηρείται στο 60-90% των περιπτώσεων ασθενών με μυέλωμα. Περίπου το 20% των παθολογικών καταστάσεων είναι μυέλωμα Bence-Jones.

Η πρωτεΐνη Bence-Jones στα ούρα διαφοροποιείται λόγω χυμικών μετατοπίσεων στο β-ανοσοποιητικό σύστημα. Η εμφάνιση πρωτεϊνικών σωμάτων σχετίζεται με μυελωματική παθολογία, παραπρωτεϊναιμικές αιμοβλαστώσεις, ενδοθηλίωση, μακροσφαιριναιμία Waldenstrom, λεμφική λευχαιμία, οστεοσαρκώματα. Η ανίχνευση της πρωτεΐνης Bence-Jones στα ούρα είναι ένα σημαντικό διαγνωστικό και προγνωστικό βήμα. Λόγω του χαμηλού μοριακού βάρους της, η πρωτεΐνη Bence-Jones απεκκρίνεται στα ούρα, προκαλώντας βλάβη στο επιθήλιο των νεφρικών σωληναρίων, γεγονός που είναι γεμάτο με την ανάπτυξη νεφρικής ανεπάρκειας, η οποία μπορεί να οδηγήσει σε θάνατο. Η έγκαιρη ταξινόμηση της πρωτεΐνης ανάλογα με τον τύπο είναι επίσης σημαντική: η λ-πρωτεΐνη έχει μεγαλύτερη νεφροτοξική δράση από την κ.

[ 10 ], [ 11 ], [ 12 ], [ 13 ], [ 14 ]

Δοκιμασία πρωτεΐνης Bence Jones

Η παρουσία πρωτεϊνικών σωμάτων εκτός από τον ορό στα ούρα υποδηλώνει λεμφική λευχαιμία, οστεοσάρκωμα ή μυέλωμα (καρκινικές αποφύσεις του μυελού των οστών). Η πρωτεΐνη Bence-Jones, όταν το διήθημα ούρων θερμαίνεται στους 45-60º C, καθιζάνει ως θολό ίζημα που καθιζάνει στα τοιχώματα του δοκιμαστικού σωλήνα. Μια περαιτέρω αύξηση της θερμοκρασίας σε τιμές βρασμού διαλύει τη διαχωρισμένη θολότητα.

Η ποσοτική δοκιμασία για την πρωτεΐνη Bence Jones εκτελείται ως εξής:

• χρησιμοποιώντας μέρος νερού και μέρος νιτρικού οξέος ως αντιδραστήριο·
• τοποθέτηση νιτρικού οξέος (0,5-1 ml) σε δοκιμαστικό σωλήνα με στρώσεις από το ίδιο επίπεδο ούρων που εξετάζονται·
• αξιολόγηση του αποτελέσματος μετά από 2 λεπτά (η εμφάνιση ενός λεπτού δακτυλίου στο όριο του υγρού μέσου υποδηλώνει την παρουσία πρωτεϊνικών σωμάτων 0,033%).

Η παρατήρηση ενός νηματοειδούς δακτυλίου απαιτεί αραίωση των ούρων με νερό σε αναλογία 1:1, η εμφάνιση ενός παχύρρευστου δακτυλίου υποδηλώνει την ανάγκη ανάμειξης μέρους των ούρων με τρία μέρη νερού, και στην περίπτωση ενός συμπαγούς δακτυλίου, ένα μέρος των ούρων αραιώνεται με επτά μέρη νερού. Επιπλέον, η αραίωση συνεχίζεται μέχρι να εμφανιστεί το χαρακτηριστικό ίζημα στο 2-3ο λεπτό της δοκιμής.

Η ποσότητα πρωτεΐνης που περιέχεται υπολογίζεται πολλαπλασιάζοντας το 0,033% με την τιμή αραίωσης. Για παράδειγμα, τα ούρα αραιώθηκαν 10 φορές, ο δακτύλιος των πρωτεϊνικών σωμάτων εμφανίστηκε στο τέλος του 3ου λεπτού της μελέτης, και στη συνέχεια το ποσοστό συμπερίληψης πρωτεΐνης υπολογίζεται ως εξής: 0,033x10=0,33.

Εάν δεν υπάρχει ίζημα, αξιολογείται ο βαθμός θολότητας - έντονα, ασθενή ή μόλις διακριτά ίχνη θολότητας.

[ 15 ], [ 16 ], [ 17 ], [ 18 ], [ 19 ]

Έκκριση πρωτεΐνης Bence Jones

Ανάλογα με τον τύπο της εκκρινόμενης ανοσοσφαιρίνης, γίνεται διάκριση μεταξύ:

• παθολογίες ελαφριάς αλυσίδας (έκκριση πρωτεΐνης Bence Jones)·
• σπειραματοπάθεια (έκκριση άλλων ανοσοσφαιρινών).

Είναι επίσης πιθανοί διάφοροι συνδυασμοί νεφρικής βλάβης. Όπως δείχνει η πρακτική, η νεφροπάθεια είναι συνέπεια λεμφοϋπερπλαστικής παθολογίας (πολλαπλό μυέλωμα, χρόνια λεμφοκυτταρική λευχαιμία, νόσος Waldenstrom, κ.λπ.).

Όταν απελευθερώνονται στην κυκλοφορία του αίματος, όπως όλες οι πρωτεΐνες με μοριακό βάρος έως 40 kDa, οι ελαφριές αλυσίδες παρακάμπτουν το νεφρικό φίλτρο και στη συνέχεια διασπώνται σε ολιγοπεπτίδια και αμινοξέα μέσω των λυσοσωμάτων. Η περίσσεια ελαφριών αλυσίδων προκαλεί δυσλειτουργία της αντίδρασης καταβολισμού και πιθανή απελευθέρωση λυσοσωμικών ενζύμων, η οποία συνεπάγεται νέκρωση του σωληναριακού ιστού. Τα πρωτεϊνικά σώματα οδηγούν σε αδυναμία επαναπορρόφησης και όταν οι μονοκλωνικές ελαφριές αλυσίδες συνδυάζονται με την πρωτεΐνη Tamm-Horsfall, σχηματίζονται πρωτεϊνικοί κύλινδροι στα άπω σωληνάρια.

Πρωτεΐνη Bence Jones στη νόσο του μυελώματος

Το πολλαπλό μυέλωμα είναι μια παθολογική κατάσταση στην οποία το σώμα παράγει ελαφριές αλυσίδες ανοσοσφαιρίνης αντί για πλήρεις. Η διάγνωση της νόσου και η παρακολούθηση της κατάστασης πραγματοποιούνται με εργαστηριακές εξετάσεις ούρων, οι οποίες δείχνουν την ποσοτική περιεκτικότητα σε πρωτεϊνικά σώματα. Ο προσδιορισμός του υποτύπου του μυελώματος βασίζεται στην ανάλυση του ορού του αίματος. Τα κλινικά σημεία της νόσου περιλαμβάνουν: σύνδρομο οστικού πόνου, δυσλειτουργία ούρησης, αιματώματα άγνωστης προέλευσης, κατακράτηση υγρών στο σώμα.

Η πρωτεΐνη Bence Jones στο μυέλωμα ανιχνεύεται με βάση τυπικές εξετάσεις που δείχνουν την ποσοτική περιεκτικότητα των πρωτεϊνικών σωμάτων και αξιολογούν τον βαθμό της νεφρικής βλάβης. Η ταυτοποίηση της πρωτεΐνης στα ούρα εξηγεί τη βλάβη στο επιθήλιο με σκλήρυνση του νεφρικού στρώματος, η οποία με την πάροδο του χρόνου σχηματίζει νεφρική ανεπάρκεια - μια κοινή αιτία θανάτου ως αποτέλεσμα της βλάβης από μυέλωμα (η πρωτεΐνη Bence Jones φράζει πλήρως τα σωληνάρια, εμποδίζοντας την ούρηση).

Στατιστικά στοιχεία δείχνουν ότι το μυέλωμα διαφοροποιείται σε άνδρες άνω των 60 ετών, με ιστορικό γενετικής προδιάθεσης, που πάσχουν από παχυσαρκία και ανοσοκαταστολή, καθώς και που έχουν εκτεθεί σε τοξικές και ραδιενεργές ουσίες.

[ 20 ], [ 21 ], [ 22 ], [ 23 ], [ 24 ]

Προσδιορισμός της πρωτεΐνης Bence Jones

Για τη διαφοροποίηση μιας συγκεκριμένης πρωτεΐνης, διεξάγεται εργαστηριακή μελέτη του μέσου μέρους των πρωινών ούρων (απαιτείται όγκος τουλάχιστον 50 ml). Η παρουσία πρωτεΐνης Bence-Jones με τον προσδιορισμό του ποσοτικού συστατικού είναι δυνατή με τη μέθοδο ανοσοστερέωσης. Ο διαχωρισμός των πρωτεϊνών γίνεται με ηλεκτροφόρηση με επακόλουθη ανοσοστερέωση χρησιμοποιώντας ειδικούς ορούς. Κατά τη σύνδεση της πρωτεΐνης με αντισώματα ελαφρών και βαρέων αλυσίδων ανοσοσφαιρινών, σχηματίζονται ανοσοσύμπλοκα, τα οποία αξιολογούνται με χρώση.

Πρέπει να σημειωθεί ότι ακόμη και η ελάχιστη συγκέντρωση πρωτεΐνης ανιχνεύεται λόγω της αντίδρασης καθίζησης σε σουλφοσαλικυλικό οξύ. Η πρωτεΐνη Bence-Jones προσδιορίζεται συνδυάζοντας φιλτραρισμένα ούρα (4 ml) με ρυθμιστικό διάλυμα οξικού άλατος (1 ml). Η επακόλουθη θέρμανση στους 60º C σε υδατόλουτρο και η παραμονή για 15 λεπτά με ένα θετικό δείγμα παράγει ένα χαρακτηριστικό ίζημα. Αυτή η μέθοδος θεωρείται η πιο αξιόπιστη. Ένα υπερβολικά όξινο ή αλκαλικό περιβάλλον και η χαμηλή σχετική πυκνότητα ούρων μπορούν να επηρεάσουν αρνητικά τα αποτελέσματα της ανάλυσης.

Οι ερευνητικές μέθοδοι στις οποίες η πρωτεΐνη Bence-Jones διαλύεται με θέρμανση στους 100º C ή καθιζάνει ξανά κατά την ψύξη είναι αναξιόπιστες, καθώς δεν έχουν όλα τα πρωτεϊνικά στοιχεία τα αντίστοιχα χαρακτηριστικά. Ωστόσο, η χρήση δείκτη χαρτιού είναι εντελώς ακατάλληλη για την ανίχνευση πρωτεΐνης Bence-Jones.

[ 25 ], [ 26 ], [ 27 ], [ 28 ], [ 29 ], [ 30 ]