13c Δοκιμή ουρεάσης: προετοιμασία, αποτελέσματα, θετικά, αρνητικά

Από την ανακάλυψη του βακτηρίου Helicobacter pylori που σχετίζεται με τη χρόνια γαστρίτιδα και τα γαστρικά και δωδεκαδακτυλικά έλκη, έχουν αναπτυχθεί διαγνωστικές μέθοδοι, συμπεριλαμβανομένης της δοκιμασίας ουρεάσης, η οποία επιτρέπει την ανίχνευση αυτών των μικροοργανισμών σε έναν συγκεκριμένο ασθενή, επιβεβαιώνοντας τη συμμετοχή τους στην ανάπτυξη γαστρεντερικών παθήσεων και συνταγογραφώντας αποτελεσματική θεραπεία.

Ένζυμο ουρεάσης ως βιοδείκτης λοίμωξης από Helicobacter

Τα βακτήρια H. pylori προστατεύονται από το όξινο περιβάλλον στον αυλό του στομάχου με δύο τρόπους. Πρώτον, καταστρέφοντας τον βλεννογόνο με τα μαστίγιά τους, οι μικροοργανισμοί φτάνουν στα κατώτερα στρώματά του, μέχρι τα επιθηλιακά κύτταρα, όπου το pH είναι υψηλότερο (δηλαδή, η οξύτητα είναι χαμηλότερη). Δεύτερον, τα βακτήρια εξουδετερώνουν το οξύ συνθέτοντας μεγάλες ποσότητες του καταλυτικά δραστικού υψηλού μοριακού μεταλλοενζύμου ουρεάση ή ουρία αμιδοϋδρολάση.

Η χρήση ουρεάσης στη διάγνωση του Helicobacter είναι δυνατή όχι μόνο λόγω της κυτταροπλασματικής δραστηριότητας αυτού του ενζύμου, αλλά και λόγω της εξωτερικής αλληλεπίδρασης με τα κύτταρα ξενιστή.

Υπό τη δράση της ουρεάσης, συμβαίνει η διάσπαση της γαστρικής ουρίας σε υδρονιτρίδιο (αμμωνία) και διοξείδιο του άνθρακα (διοξείδιο του άνθρακα). Αντιδρούν με το υδροχλωρικό οξύ στο γαστρικό υγρό και δημιουργούν μια ζώνη ουδέτερης οξύτητας γύρω από το H. pylori, ενώ παράλληλα υποστηρίζουν τον μεταβολισμό των βακτηριακών κυττάρων.

Αυτός είναι ο λόγος για τον οποίο η ουρεάση είναι ο σημαντικότερος παράγοντας στον αποικισμό του H. pylori στον ανθρώπινο γαστρικό βλεννογόνο και η ανίχνευση της ουρεολυτικής δράσης θεωρείται βιοδείκτης της λοιμογόνου δράσης αυτού του βακτηρίου, τον οποίο οι γαστρεντερολόγοι - με τη διεξαγωγή μιας δοκιμασίας ουρεάσης - χρησιμοποιούν για τη διάγνωση της λοίμωξης από Helicobacter, καθώς και για την παρακολούθηση των αποτελεσμάτων της φαρμακευτικής καταστροφής (εξάλειψης) των βακτηρίων.

Η διάγνωση του H. pylori περιλαμβάνει επεμβατικές και μη επεμβατικές εξετάσεις – ανάλογα με το αν απαιτείται ενδοσκοπική εξέταση του στομάχου (ινωδογαστροδωδεκαδακτυλοσκόπηση) ή όχι. Η επεμβατική εξέταση είναι η ταχεία εξέταση ουρεάσης ή η ταχεία εξέταση ουρεάσης (RUT-test), η οποία απαιτεί τη λήψη δειγμάτων ιστού (βιοψία). Η δοκιμασία αναπνοής με ουρία 13C (13C-UBT) είναι η πιο κοινή μη επεμβατική εξέταση.

Πρέπει να σημειωθεί ότι η μη επεμβατική διάγνωση του H.pylori μπορεί να πραγματοποιηθεί χρησιμοποιώντας εξέταση αίματος για αντισώματα (ειδικότητα στο επίπεδο του 75%, ευαισθησία - 84%), ELISA ούρων (με ευαισθησία 96% και ειδικότητα 79%) και ένα πρόγραμμα για βακτηριακά αντιγόνα. Περισσότερες πληροφορίες - Λοίμωξη από Helicobacter pylori: αντισώματα κατά του Helicobacter pylori στο αίμα

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ]

Ενδείξεις για τη διαδικασία δοκιμή ουρεάσης

Ο αποικισμός του γαστρικού βλεννογόνου από το H. pylori από μόνος του δεν αποτελεί ασθένεια· αποτελεί παράγοντα αυξημένου βακτηριακού φορτίου στο σώμα, ο οποίος υπό ορισμένες συνθήκες μπορεί να πυροδοτήσει την ανάπτυξη μιας σειράς παθολογιών του στομάχου και του ανώτερου γαστρεντερικού σωλήνα.

Οι ενδείξεις για τη διάγνωση της λοίμωξης από Helicobacter, και συγκεκριμένα η εξέταση ουρεάσης, σχετίζονται με γαστρίτιδα με αυξημένη οξύτητα, γαστρίτιδα άντρου και ατροφική γαστρίτιδα, δωδεκαδακτυλίτιδα, γαστρικό έλκος και έλκος δωδεκαδακτύλου, γαστρικό λέμφωμα MALT. Μετά από ενδοσκοπική εκτομή καρκίνου του στομάχου σε πρώιμο στάδιο, μπορεί να πραγματοποιηθεί ιστολογική εξέταση σε συνδυασμό με ταχεία εξέταση ουρεάσης - FGDS με εξέταση ουρεάσης.

Οι γαστρεντερολόγοι μπορούν να συνταγογραφήσουν μια δοκιμασία ουρεάσης εάν οι ασθενείς παραπονιούνται για αίσθημα βαρύτητας και δυσφορίας στην επιγαστρική περιοχή, συχνή καούρα μετά το φαγητό, ξινό ή σάπιο ρέψιμο, πικρία στο στόμα, ναυτία, εντερικές διαταραχές, πόνο ή κράμπες στο στομάχι.

[ 8 ], [ 9 ]

Παρασκευή

Η προετοιμασία για την αναπνοή με ουρία 13C συνίσταται στη διακοπή από τον ασθενή: της λήψης αντιβιοτικών 4 εβδομάδες πριν από την εξέταση, και των ΜΣΑΦ, αναστολέων αντλίας πρωτονίων (που μειώνουν την οξύτητα του στομάχου) και αντιόξινων ή προσροφητικών που χρησιμοποιούνται για την καούρα - τουλάχιστον δύο εβδομάδες πριν. Η λήψη οποιωνδήποτε φαρμάκων θα πρέπει να διακόπτεται πέντε έως έξι ημέρες, καθώς και η κατανάλωση αλκοόλ και το κάπνισμα - τρεις ημέρες πριν από την εξέταση.

Συνιστάται επίσης να αποφεύγετε την κατανάλωση οσπρίων για περίπου μία εβδομάδα πριν από τη δοκιμή, καθώς τα φασόλια, τα μπιζέλια, οι φακές, η σόγια και τα φασόλια περιέχουν ουρεάση (η οποία προστατεύει τα φυτά από ασθένειες και έντομα).

Το βράδυ πριν από την εξέταση, ένα αργό, βαρύ δείπνο αντενδείκνυται. την ημέρα της εξέτασης, θα πρέπει να κάνετε κανονική στοματική υγιεινή και μιάμιση ώρα πριν από την εξέταση, δεν πρέπει να πίνετε τίποτα ή να χρησιμοποιείτε τσίχλα.

[ 10 ], [ 11 ], [ 12 ], [ 13 ], [ 14 ]

Τεχνική δοκιμή ουρεάσης

Τεχνική υλοποίησης:

• Αρχικά, λαμβάνεται ένα βασικό δείγμα αναπνοής - μια εκπνοή γίνεται σε ένα μαλακό πλαστικό δοχείο (και σφραγίζεται ερμητικά).
• το υγρό με προσθήκη 13C-ουρίας λαμβάνεται από το στόμα.
• Μετά από 25-30 λεπτά, ένα δεύτερο δείγμα εκπνεόμενου αέρα λαμβάνεται σε ένα άλλο δοχείο.

Τα δείγματα που λαμβάνονται με αυτόν τον τρόπο αναλύονται σε φασματόμετρο μάζας με διαχωρισμό των ισοτόπων σε ένα δεύτερο δείγμα και προσδιορισμό της συγκέντρωσής τους. Η διαφορά μεταξύ των τιμών στο δεύτερο και το πρώτο δείγμα εκφράζεται ως δέλτα (δ) σε σύγκριση με το βασικό επίπεδο. Οι φυσιολογικές τιμές, δηλαδή οι αρνητικές τιμές του επισημασμένου ατόμου 13C σε μη μολυσμένους ασθενείς, κυμαίνονται από 0,15-0,46%, και οι θετικές τιμές παρουσία λοίμωξης είναι 1,2-9,5% με ρυθμό υδρόλυσης ουρίας μεγαλύτερο από 12-14 μg/min.

Με απλά λόγια: η ανίχνευση διοξειδίου του άνθρακα με σήμανση 13C στον εκπνεόμενο αέρα υποδεικνύει ότι η ουρία έχει υδρολυθεί από το ένζυμο ουρεάσης H. pylori, γεγονός που, στην πραγματικότητα, επιβεβαιώνει το γεγονός της παρουσίας της στο στομάχι.

Δοκιμασία αναπνοής για το H. pylori

Η εξέταση 13C-UBT ή εξέταση αναπνοής ουρίας 13C για το Helicobacter pylori είναι μία από τις πιο σημαντικές μη επεμβατικές μεθόδους για την ανίχνευση αυτής της λοίμωξης: με 100% ευαισθησία και 98% ειδικότητα, ο κίνδυνος ψευδώς θετικών και ψευδώς αρνητικών αποτελεσμάτων σε σύγκριση με την ιστολογική εξέταση και τον έλεγχο αντισωμάτων στο αίμα είναι 2,3% χαμηλότερος.

Η ανάλυση βασίζεται στην υδρόλυση υγρής ουρίας που χορηγείται από το στόμα και είναι επισημασμένη με ένα άτομο άνθρακα (σταθερό μη ραδιενεργό ισότοπο) 13C (50-75 mg 13C-ουρίας αραιωμένης σε 100 ml υγρού) από ουρεάση H. pylori.

Η ουρία που έχει επισημανθεί με ισοτοπικό δείκτη υφίσταται υδρόλυση στο στομάχι με την απελευθέρωση αμμωνίας και διοξειδίου του άνθρακα που περιέχει επισημασμένα άτομα, τα οποία διαχέονται στο αίμα και απεκκρίνονται από τους πνεύμονες κατά την αναπνοή. Το επισημασμένο διοξείδιο του άνθρακα καταγράφεται από μια αναλυτική συσκευή - έναν φασματόμετρο μάζας, η λειτουργία του οποίου βασίζεται σε μη διασπορά φασματοσκοπία επιλεκτικής ισοτόπων ή σε έναν φασματοσκοπικό αναλυτή υπερύθρου.

Ταχεία δοκιμή ουρεάσης

Η ταχεία δοκιμή ουρεάσης (RUT) πραγματοποιείται κατά την ενδοσκοπική εξέταση του στομάχου και του δωδεκαδακτύλου - χρησιμοποιώντας σύγχρονα ενδοινοσκόπια - και ταυτόχρονη συλλογή δειγμάτων βιοψίας. Το βιοϋλικό υποτίθεται ότι λαμβάνεται από το άντρο του στομάχου. Έτσι, η ινωδογαστροδεδενοσκόπηση ή FGDS με δοκιμή ουρεάσης είναι μια επεμβατική διαγνωστική μέθοδος.

Η ληφθείσα βιοψία βυθίζεται πλήρως σε ένα παρασκευασμένο τυποποιημένο μέσο που περιέχει άγαρ-γέλη, ουρία, δείκτη οξεοβασικής φαινολοσουλφοφθαλεΐνης και έναν βακτηριοστατικό παράγοντα (που προστίθεται για την πρόληψη της ανάπτυξης μολυσματικών μικροοργανισμών και ψευδώς θετικών αποτελεσμάτων).

Εάν υπάρχουν βακτήρια H. pylori στο δείγμα ιστού του στομάχου, η ουρεάση που παράγουν θα υδρολύσει την ουρία και θα αυξήσει το pH, το οποίο είναι σαφώς ορατό καθώς ο δείκτης αλλάζει από κίτρινο σε πορτοκαλί (σε pH 6,8) και μωβ (σε pH> 8). Το 75% των θετικών εξετάσεων αλλάζουν χρώμα εντός 120-180 λεπτών και όσο πιο γρήγορα αλλάζει χρώμα ο δείκτης, τόσο μεγαλύτερος είναι ο αριθμός των βακτηρίων. Αλλά οι εξετάσεις που φαίνονται αρνητικές διατηρούνται για 24 ώρες.

Θετικό τεστ ταχείας ουρεάσης, τι σημαίνει; Ένα θετικό τεστ RUT – ο δείκτης γίνεται κόκκινος – σημαίνει ότι το δείγμα βιοψίας που τοποθετείται στο μέσο άγαρ περιέχει τουλάχιστον 105 βακτήρια H. pylori, αν και η συγκέντρωσή τους είναι συνήθως υψηλότερη.

Η ευαισθησία των διαφόρων τροποποιήσεων των δοκιμών κυμαίνεται από 90-98% και η ειδικότητα από 97-99%.

Όπως σημειώνουν οι γαστρεντερολόγοι, εάν το συμπέρασμα του ασθενούς υποδεικνύει έντονα θετικό τεστ ουρεάσης (τρεις σταυροί), αυτό σημαίνει: pH> 8 και ο δείκτης άλλαξε χρώμα σε λιγότερο από 60 λεπτά από τη στιγμή της εμβάπτισης της βιοψίας, γεγονός που υποδηλώνει μεγάλο αριθμό H.pylori και υψηλό επίπεδο έκφρασης ουρεάσης. Ο κατά προσέγγιση αριθμός των βακτηρίων μπορεί να μετρηθεί κατά την ιστολογική εξέταση της βιοψίας υπό μικροσκόπιο και εάν υπερβαίνει τα 40-50 στην οπτικοποιημένη περιοχή, το επίπεδο μόλυνσης θεωρείται υψηλό.

Η δοκιμασία αναπνοής με ουρία 13C σπάνια δίνει ψευδώς θετικά αποτελέσματα και σε ασθενείς με υποψία γαστρικού ή δωδεκαδακτυλικού έλκους, ένα θετικό αποτέλεσμα θεωρείται ότι επιβεβαιώνει τη διάγνωση, ενώ ένα αρνητικό αποτέλεσμα θα πρέπει να επιβεβαιωθεί με εγκεφαλογράφημα (EGD) με δοκιμασία ουρίας.