Confocal μικροσκοπία κερατοειδούς διάρκειας ζωής

Η ομοεστιακή μικροσκοπία του κερατοειδούς είναι μία από τις σύγχρονες ερευνητικές μεθόδους, η οποία επιτρέπει την ενδοκοιλιακή παρακολούθηση του κερατοειδούς με απεικόνιση των ιστών σε κυτταρικό και μικροδομικό επίπεδο.

Αυτή η μέθοδος, λόγω του αρχικού σχεδιασμού του μικροσκοπίου και της υψηλής διακριτικής του ικανότητας, επιτρέπει την απεικόνιση ζωντανού κερατοειδικού ιστού, τη μέτρηση του πάχους καθεμίας από τις στιβάδες του και την αξιολόγηση του βαθμού των μορφολογικών διαταραχών.

Ο σκοπός της ομοεστιακής μικροσκοπίας κερατοειδούς

Να χαρακτηριστούν οι μορφολογικές αλλαγές του κερατοειδούς που εμφανίζονται σε διάφορες φλεγμονώδεις και δυστροφικές ασθένειες, καθώς και ως αποτέλεσμα χειρουργικών επεμβάσεων και έκθεσης σε CL.

Τα δεδομένα μορφολογικής εξέτασης είναι απαραίτητα για την αξιολόγηση της σοβαρότητας της παθολογικής διαδικασίας, της αποτελεσματικότητας της θεραπείας και για τον προσδιορισμό της τακτικής διαχείρισης του ασθενούς.

Ενδείξεις για τη διαδικασία

• Φλεγμονώδεις ασθένειες του κερατοειδούς ( κερατίτιδα ).
• Δυστροφικές παθήσεις του κερατοειδούς ( κερατόκωνος, δυστροφία Fuchs, κ.λπ.).
• Σύνδρομο ξηροφθαλμίας.
• Καταστάσεις μετά από χειρουργικές επεμβάσεις στον κερατοειδή (διεισδυτική μεταμόσχευση κερατοειδούς, κερατοδιαθλαστικές επεμβάσεις).
• Παθήσεις που σχετίζονται με τη χρήση φακών επαφής.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]

Παρασκευή

Αυτή η εξέταση μπορεί να πραγματοποιηθεί χωρίς τη χρήση αναισθητικών. Μια σταγόνα υγρού εμβάπτισης τοποθετείται στον αντικειμενικό φακό του ομοεστιακού μικροσκοπίου. Αυτό εξαλείφει την άμεση επαφή του φακού με τον κερατοειδή και ελαχιστοποιεί τον κίνδυνο βλάβης του επιθηλίου.

[ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]

Τεχνική συνεστιακή μικροσκοπία του κερατοειδούς

Η μελέτη πραγματοποιείται χρησιμοποιώντας ένα ομοεστιακό μικροσκόπιο ConfoScan 4 (Nider) με μεγέθυνση 500 φορές. Η συσκευή επιτρέπει την εξέταση του κερατοειδούς σε όλο το πάχος του.

Το μέγεθος της εξεταζόμενης περιοχής είναι 440×330 μm, το πάχος του στρώματος σάρωσης είναι 5 μm. Ο φακός με μια σταγόνα γέλης φέρεται στον κερατοειδή μέχρι να ακουμπήσει και τοποθετείται έτσι ώστε το πάχος του στρώματος υγρού εμβάπτισης να είναι 2 mm. Ο σχεδιασμός της συσκευής επιτρέπει την εξέταση του κερατοειδούς στην κεντρική ζώνη και στις παρακεντρικές περιοχές του.

Αντενδείξεις στη διαδικασία

Μια σχετική αντένδειξη είναι ο σοβαρός ερεθισμός των ματιών λόγω οξείας φλεγμονώδους διαδικασίας.

[ 10 ], [ 11 ]

Κανονική απόδοση

Φυσιολογική μορφολογική εικόνα του κερατοειδούς

Το πρόσθιο επιθήλιο αποτελείται από 5-6 στιβάδες κυττάρων. Το μέσο πάχος ολόκληρου του επιθηλίου είναι περίπου 50 µm. Σύμφωνα με τη μορφολογική δομή, διακρίνονται οι ακόλουθες στιβάδες (από μέσα προς τα έξω): βασικά, κύτταρα σε σχήμα σουβλιού και επιφανειακά.

• Το εσώτατο (βασικό) στρώμα αντιπροσωπεύεται από μικρά, πυκνά, κυλινδρικά κύτταρα χωρίς ορατό πυρήνα. Τα όρια των βασικών κυττάρων είναι καθαρά και φωτεινά.
• Το μεσαίο στρώμα αποτελείται από 2-3 στρώματα αγκαθωτών (φτερωτών) κυττάρων με βαθιές εγκολπώσεις στις οποίες είναι ενσωματωμένες οι εκβλαστήσεις γειτονικών κυττάρων. Μικροσκοπικά, τα όρια των κυττάρων είναι αρκετά σαφώς διακριτά και οι πυρήνες μπορεί να μην είναι καθορισμένοι ή να είναι ασαφείς.
• Το επιφανειακό στρώμα του επιθηλίου αντιπροσωπεύεται από ένα ή δύο στρώματα πολυγωνικών κυττάρων με σαφή όρια και ομοιογενή πυκνότητα. Οι πυρήνες είναι συνήθως φωτεινότεροι από το κυτταρόπλασμα, στο οποίο μπορεί επίσης να διακριθεί ένας περιπυρηνικός σκοτεινός δακτύλιος.

Μεταξύ των κυττάρων του επιφανειακού στρώματος, διακρίνονται τα σκούρα και τα ανοιχτόχρωμα κύτταρα. Η αυξημένη ανακλαστικότητα των επιθηλιακών κυττάρων υποδηλώνει μείωση του μεταβολικού τους ρυθμού και έναρξη απολέπισής τους.

Η μεμβράνη του Bowman είναι μια διαφανής δομή που δεν αντανακλά το φως, επομένως είναι συνήθως αδύνατο να την απεικονίσουμε με ομοεστιακή μικροσκοπία.

Το υποβασικό νευρικό πλέγμα βρίσκεται κάτω από τη μεμβράνη του Bowman. Κανονικά, οι νευρικές ίνες εμφανίζονται ως φωτεινές λωρίδες που εκτείνονται παράλληλα σε σκούρο φόντο, σε επαφή μεταξύ τους. Η ανακλαστικότητα (reflectivity) μπορεί να είναι ανομοιόμορφη κατά μήκος της ίνας.

Το στρώμα του κερατοειδούς καταλαμβάνει το 80 έως 90% του πάχους του κερατοειδούς και αποτελείται από κυτταρικά και εξωκυτταρικά συστατικά. Τα κύρια κυτταρικά στοιχεία του στρώματος είναι τα κερατοκύτταρα, τα οποία αποτελούν περίπου το 5% του όγκου.

Μια τυπική μικροσκοπική εικόνα του στρώματος περιλαμβάνει αρκετά φωτεινά ακανόνιστα οβάλ σωμάτια (πυρήνες κερατοκυττάρων) που βρίσκονται στο πάχος μιας διαφανούς σκούρας γκρι ή μαύρης μήτρας. Κανονικά, η απεικόνιση των εξωκυτταρικών δομών είναι αδύνατη λόγω της διαφάνειάς τους. Το στρώμα μπορεί να χωριστεί υπό όρους σε υποστιβάδες: πρόσθια (που βρίσκεται ακριβώς κάτω από τη μεμβράνη του Bowman και αποτελεί το 10% του πάχους του στρώματος), πρόσθια-μεσαία, μέση και οπίσθια.

Η μέση πυκνότητα των κερατοκυττάρων είναι υψηλότερη στο πρόσθιο στρώμα, μειώνοντας σταδιακά προς τα οπίσθια στρώματα. Η πυκνότητα των πρόσθιων στρωματικών κυττάρων είναι σχεδόν διπλάσια από αυτή των οπίσθιων στρωματικών κυττάρων (αν η πυκνότητα των πρόσθιων στρωματικών κυττάρων ληφθεί ως 100%, τότε η πυκνότητα των οπίσθιων στρωματικών κυττάρων θα είναι περίπου 53,7%). Στο πρόσθιο στρώμα, οι πυρήνες των κερατοκυττάρων έχουν στρογγυλεμένο σχήμα φασολιού, ενώ στο οπίσθιο στρώμα είναι οβάλ και πιο επιμήκεις.

Οι πυρήνες των κερατοκυττάρων μπορεί να διαφέρουν σε φωτεινότητα. Η διαφορετική ικανότητα ανάκλασης του φωτός εξαρτάται από την μεταβολική τους κατάσταση. Τα φωτεινότερα κύτταρα θεωρούνται ενεργοποιημένα κερατοκύτταρα (κύτταρα "στρες"), των οποίων η δραστηριότητα στοχεύει στη διατήρηση της εσωτερικής ομοιόστασης του κερατοειδούς. Στο φυσιολογικό και στο οπτικό πεδίο, εντοπίζονται μεμονωμένα ενεργοποιημένα κύτταρα.

Οι νευρικές ίνες στο πρόσθιο στρώμα του κερατοειδούς απεικονίζονται ως φωτεινές ομοιογενείς ζώνες, που συχνά σχηματίζουν διακλαδώσεις.

Η μεμβράνη του Descemet είναι κανονικά διαφανής και δεν απεικονίζεται με ομοεστιακή μικροσκοπία.

Το οπίσθιο επιθήλιο είναι μια μονοστιβάδα εξαγωνικών ή πολυγωνικών επίπεδων κυττάρων με ομοιόμορφα ανοιχτόχρωμη επιφάνεια σε φόντο σαφών σκοτεινών μεσοκυττάριων ορίων.

Η συσκευή έχει τη δυνατότητα να υπολογίζει χειροκίνητα ή αυτόματα την πυκνότητα των κυψελών, την επιφάνεια τους και τον συντελεστή μεταβλητότητας.

Παθολογικές αλλαγές στη δομή του κερατοειδούς

Ο κερατόκωνος χαρακτηρίζεται από σημαντικές αλλαγές στο πρόσθιο επιθήλιο και το στρώμα του κερατοειδούς.

[ 12 ], [ 13 ], [ 14 ], [ 15 ], [ 16 ], [ 17 ], [ 18 ], [ 19 ], [ 20 ]