Southern blotting
Last reviewed: 31.05.2018
Έχουμε αυστηρές οδηγίες προμήθειας και παραπέμπουμε μόνο σε αξιόπιστους ιατρικούς ιστότοπους, ακαδημαϊκά ερευνητικά ιδρύματα και, όποτε είναι δυνατόν, σε ιατρικά αξιολογημένες μελέτες. Σημειώστε ότι οι αριθμοί σε παρενθέσεις ([1], [2] κ.λπ.) είναι σύνδεσμοι προς αυτές τις μελέτες με δυνατότητα κλικ.
Εάν πιστεύετε ότι κάποιο από το περιεχόμενό μας είναι ανακριβές, παρωχημένο ή αμφισβητήσιμο, επιλέξτε το και πατήστε Ctrl + Enter.
Η μέθοδος Southern blotting (που αναπτύχθηκε από τους E. Southern και R. Davis το 1975) είναι η κύρια μέθοδος που χρησιμοποιείται σήμερα για την αναγνώριση γονιδίων για μια συγκεκριμένη ασθένεια. Για να γίνει αυτό, το DNA εξάγεται από τα κύτταρα του ασθενούς και υποβάλλεται σε επεξεργασία με μία ή περισσότερες ενδονουκλεάσες περιορισμού. Τα θραύσματα που προκύπτουν υποβάλλονται σε ηλεκτροφόρηση, η οποία τους επιτρέπει να διαχωριστούν κατά μέγεθος (τα μικρότερα θραύσματα κινούνται ταχύτερα μέσω των πόρων του πηκτώματος). Τα θραύσματα στη συνέχεια μεταφέρονται (επανεκτυπώνονται) σε ένα φίλτρο νιτροκυτταρίνης, πάνω στο οποίο τοποθετείται ένας ραδιενεργά επισημασμένος ανιχνευτής. Ο ανιχνευτής συνδέεται μόνο με την συμπληρωματική αλληλουχία. Στη συνέχεια, χρησιμοποιώντας αυτοραδιογραφία, προσδιορίζεται η θέση του επιθυμητού θραύσματος γονιδιωματικού DNA στο ηλεκτροφερόγραμμα.
Ο υβριδισμός με έναν σημασμένο ανιχνευτή DNA παρασκευασμάτων DNA ή RNA που εφαρμόζεται στάγδην σε μια στερεά μήτρα χωρίς προκαταρκτικό περιορισμό και ηλεκτροφόρηση ονομάζεται υβριδισμός κουκκίδων ή σχισμών, ανάλογα με τη διαμόρφωση της κηλίδας DNA στο φίλτρο (στρογγυλή ή επιμήκης, αντίστοιχα).
[