Ιατρικός εμπειρογνώμονας του άρθρου
Νέες δημοσιεύσεις
Η PCR ως μέθοδος διάγνωσης γενετικών ασθενειών
Τελευταία επισκόπηση: 04.07.2025
Όλα τα περιεχόμενα του iLive ελέγχονται ιατρικά ή ελέγχονται για να διασφαλιστεί η όσο το δυνατόν ακριβέστερη ακρίβεια.
Έχουμε αυστηρές κατευθυντήριες γραμμές προμήθειας και συνδέουμε μόνο με αξιόπιστους δικτυακούς τόπους πολυμέσων, ακαδημαϊκά ερευνητικά ιδρύματα και, όπου είναι δυνατόν, ιατρικά επισκοπικά μελέτες. Σημειώστε ότι οι αριθμοί στις παρενθέσεις ([1], [2], κλπ.) Είναι σύνδεσμοι με τις οποίες μπορείτε να κάνετε κλικ σε αυτές τις μελέτες.
Εάν πιστεύετε ότι κάποιο από το περιεχόμενό μας είναι ανακριβές, παρωχημένο ή αμφισβητήσιμο, παρακαλώ επιλέξτε το και πατήστε Ctrl + Enter.
Η PCR είναι ένα νέο επίτευγμα της μοριακής γενετικής, που χρησιμοποιείται για την ενίσχυση του DNA και επιτρέπει τον ταχύ πολλαπλασιασμό in vitro μιας συγκεκριμένης περιοχής του DNA (δηλαδή οποιουδήποτε γονιδίου ενδιαφέροντος) περισσότερες από 200.000 φορές. Για να πραγματοποιηθεί η αντίδραση, αρκεί να υπάρχει υλικό DNA από ένα κύτταρο. Η ποσότητα του DNA που ενισχύεται με PCR είναι τόσο μεγάλη που αυτό το DNA μπορεί απλώς να χρωματιστεί (δεν απαιτείται η χρήση ραδιενεργών ανιχνευτών μετά την ηλεκτροφόρηση). Προϋπόθεση για την εκτέλεση της PCR είναι η γνώση της νουκλεοτιδικής αλληλουχίας της ενισχυμένης περιοχής του DNA για τη σωστή επιλογή τεχνητά συντεθειμένων εκκινητών.
Επί του παρόντος, η PCR είναι μια διαδικασία ενός σωλήνα που αποτελείται από επαναλαμβανόμενους κύκλους ενίσχυσης (αναπαραγωγή, αντιγραφή) μιας συγκεκριμένης αλληλουχίας μορίου DNA, προκειμένου να ληφθεί ένας επαρκώς μεγάλος αριθμός αντιγράφων που μπορούν να ταυτοποιηθούν με ηλεκτροφόρηση. Ένα από τα βασικά συστατικά της αντίδρασης είναι οι "εκκινητές" - συνθετικά ολιγονουκλεοτίδια που αποτελούνται από 20-30 βάσεις συμπληρωματικές προς τις "θέσεις" (περιοχές) ανόπτησης (προσκόλλησης) στην ταυτοποιημένη περιοχή του DNA της μήτρας.
Η PCR πραγματοποιείται αυτόματα σε έναν προγραμματιζόμενο θερμοστάτη - έναν θερμικό κυκλοποιητή (ενισχυτή). Ο κύκλος τριών σταδίων, ο οποίος έχει ως αποτέλεσμα ακριβή αντίγραφα του ταυτοποιημένου τμήματος του DNA μήτρας, επαναλαμβάνεται 30-50 φορές σύμφωνα με το καθορισμένο πρόγραμμα θερμικού κυκλοποιητή. Στον πρώτο κύκλο, οι ολιγοεκκινητές υβριδίζονται με το αρχικό DNA μήτρας και στη συνέχεια (σε επόμενους κύκλους) με νεοσυντιθέμενα μόρια DNA καθώς συσσωρεύονται στο μείγμα αντίδρασης. Στην τελευταία περίπτωση, η σύνθεση DNA τερματίζεται όχι ως αποτέλεσμα αλλαγής της θερμοκρασίας, αλλά με την επίτευξη του ορίου DNA πολυμεράσης του ενισχυμένου τμήματος, το οποίο καθορίζει το μέγεθος του νεοσυντιθέμενου τμήματος DNA με ακρίβεια ενός νουκλεοτιδίου.
Η ηλεκτροφόρηση χρησιμοποιείται ως μέθοδος για την ανίχνευση των ληφθέντων μορίων DNA, με τη βοήθεια της οποίας το ενισχυμένο υλικό διαχωρίζεται ανάλογα με το μέγεθος των αμπλικονίων (προϊόντα ενίσχυσης).
Η PCR μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την άμεση εξέταση των θέσεων ύποπτων μεταλλάξεων ή πολυμορφικών θέσεων, καθώς και για τη μελέτη της παρουσίας οποιωνδήποτε άλλων συγκεκριμένων χαρακτηριστικών του DNA.
[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]