Ιατρικός εμπειρογνώμονας του άρθρου
Νέες δημοσιεύσεις
PCR ως μέθοδος διάγνωσης γενετικών ασθενειών
Τελευταία επισκόπηση: 23.04.2024
Όλα τα περιεχόμενα του iLive ελέγχονται ιατρικά ή ελέγχονται για να διασφαλιστεί η όσο το δυνατόν ακριβέστερη ακρίβεια.
Έχουμε αυστηρές κατευθυντήριες γραμμές προμήθειας και συνδέουμε μόνο με αξιόπιστους δικτυακούς τόπους πολυμέσων, ακαδημαϊκά ερευνητικά ιδρύματα και, όπου είναι δυνατόν, ιατρικά επισκοπικά μελέτες. Σημειώστε ότι οι αριθμοί στις παρενθέσεις ([1], [2], κλπ.) Είναι σύνδεσμοι με τις οποίες μπορείτε να κάνετε κλικ σε αυτές τις μελέτες.
Εάν πιστεύετε ότι κάποιο από το περιεχόμενό μας είναι ανακριβές, παρωχημένο ή αμφισβητήσιμο, παρακαλώ επιλέξτε το και πατήστε Ctrl + Enter.
Η PCR είναι ένα νέο επίτευγμα στη μοριακή γενετική, που χρησιμοποιείται για την ενίσχυση του DNA και επιτρέπει στο συγκεκριμένο τμήμα του DNA (δηλαδή οποιοδήποτε γονίδιο που μας ενδιαφέρει) να αναπαραχθεί γρήγορα in vitro περισσότερο από 200.000 φορές. Για να γίνει η αντίδραση, αρκεί να έχουμε το υλικό DNA ενός κυττάρου. η ποσότητα του DNA που ενισχύεται με PCR είναι τόσο μεγάλη ώστε αυτό το DNA μπορεί απλά να χρωματίζεται (χρησιμοποιώντας ραδιενεργούς ανιχνευτές μετά την ηλεκτροφόρηση που δεν απαιτείται). Προϋπόθεση για τη διεξαγωγή της PCR είναι η γνώση της νουκλεοτιδικής αλληλουχίας της ενισχυμένης περιοχής DNA για τη σωστή επιλογή των τεχνητά συντεθειμένων εκκινητών.
Επί του παρόντος, η PCR είναι μια διαδικασία που λαμβάνει χώρα σε ένα μονό σωλήνα και αποτελείται από επαναλαμβανόμενες κύκλους ενίσχυσης (αναπαραγωγή, αντιγραφή) των ειδικών αλληλουχιών DNA προκειμένου να ληφθεί ένα αρκετά μεγάλο αριθμό αντιγράφων που μπορούν να ταυτοποιηθούν με ηλεκτροφόρηση. Ένα βασικό συστατικό της αντίδρασης - «εναρκτήρες» - συνθετικά ολιγονουκλεοτίδια που αποτελούνται από 20-30 βάσεων συμπληρωματικών «Sites» (περιοχές) ανόπτηση (σύνδεση) με τον προσδιορίσιμο τμήμα του DNA εκμαγείου.
Η διαδικασία PCR διεξάγεται αυτόματα σε προγραμματιζόμενο θερμοστάτη - θερμοκυκλοφορητή (θερμοκυκλοποιητής). Ο κύκλος τριών βημάτων, ο οποίος έχει σαν αποτέλεσμα αντίγραφα του αναγνωρίσιμου τμήματος του DNA προτύπου, επαναλαμβάνεται 30 έως 50 φορές σύμφωνα με το προκαθορισμένο πρόγραμμα του θερμικού κυκλοποιητή. Στον πρώτο κύκλο, τα ολιγοπράγματα υβριδοποιούνται με το αρχικό ϋΝΑ εκμαγείου και στη συνέχεια (σε επόμενους κύκλους) και με τα νέα συντιθέμενα ϋΝΑ μόρια καθώς αυτά συσσωρεύονται στο μίγμα αντίδρασης. Στην τελευταία περίπτωση, η σύνθεση του DNA δεν τελειώνει λόγω των αλλαγών της θερμοκρασίας, και μετά την επίτευξη του ενισχυμένου συνοριακή περιοχή DNA πολυμεράση, η οποία καθορίζει το μέγεθος της νεοσυντιθέμενο DNA περιοχής με ακρίβεια ένα νουκλεοτίδιο.
Ως μέθοδος ανίχνευσης των λαμβανομένων μορίων ϋΝΑ, χρησιμοποιείται ηλεκτροφόρηση, μέσω της οποίας το ενισχυμένο υλικό διαιρείται σύμφωνα με το μέγεθος των αμπλικονίων (προϊόντα ενίσχυσης).
Με τη βοήθεια της PCR, είναι δυνατόν να διερευνηθούν άμεσα οι θέσεις εντοπισμού υποψιών μεταλλάξεων ή πολυμορφικών θέσεων και επίσης να μελετηθεί η παρουσία οποιωνδήποτε άλλων ειδικών χαρακτηριστικών του DNA.
[