Αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR) στη διάγνωση μολυσματικών ασθενειών

PCR - μία από τις μεθόδους για διαγνωστική DNA επιτρέπει την αύξηση του αριθμού των αντιγράφων ενός ανιχνεύσιμου τμήματος του γονιδιώματος (DNA) των βακτηρίων ή ιών είναι ένα εκατομμύριο φορές χρησιμοποιώντας ένα ένζυμο πολυμεράσης DNA. Μια δοκιμή για αυτό το συγκεκριμένο τμήμα γονιδιωματικού νουκλεϊκού οξέος επανειλημμένα πολλαπλασιάζεται (ενισχύεται) που επιτρέπει τον προσδιορισμό της. Πρώτον, ένα μόριο DNA των βακτηρίων ή ιών με θέρμανση χωρίζεται σε δύο αλυσίδες, στη συνέχεια, με την παρουσία των συντιθέμενων εκκινητών DNA (αλληλουχία νουκλεοτιδίων ειδικά για το καθορισμένο γονιδιωματικό) είναι να τους πρόσδεση με συμπληρωματικές επιμηκύνσεις DNA, συντίθεται ο δεύτερος κλώνος του νουκλεϊνικού οξέος μετά από κάθε εκκινητήρος παρουσία μίας θερμοσταθερής ϋΝΑ πολυμεράσης . Αποδεικνύεται τα δύο μόρια DNA. Η διαδικασία επαναλαμβάνεται πολλές φορές. Για τη διάγνωση, μόνο ένα μόριο DNA, δηλ ένα βακτήριο ή σωματίδιο ιού. Αντίδραση ένα επιπλέον βήμα - η σύνθεση του DNA επί του μορίου RNA χρησιμοποιώντας το ένζυμο αντίστροφη μεταγραφάση - επέτρεψε να δοκιμάσει RNA ιούς όπως ο ιός HCV. PCR - διαδικασία τριών σταδίων, επαναλαμβανόμενοι κύκλοι μετουσίωσης, ανόπτησης εκκινητών, σύνθεση του DNA (πολυμερισμός). Η ποσότητα του DNA που συντέθηκε προσδιορίστηκε με ELISA ή ηλεκτροφόρηση.

PCR μπορεί να χρησιμοποιηθεί σε διαφορετικές βιολογικό υλικό - ορός ή το πλάσμα του αίματος, απόξεση της ουρήθρας, βιοψία, πλευρικό υγρό, εγκεφαλονωτιαίο υγρό, κλπ Η πρώτη PCR χρησιμοποιήθηκε για την διάγνωση μολυσματικών ασθενειών όπως η ιογενής ηπατίτιδα Β, ιογενή ηπατίτιδα C, ιογενή ηπατίτιδα D, λοίμωξη CMV, λοιμώδη σεξουαλικά μεταδιδόμενη μόλυνση (γονόρροια, diynaya σκουπίδια, μυκόπλασμα, λοίμωξη ουρεόπλασμα), φυματίωση, HIV -infektsiya κ.λπ.

Το πλεονέκτημα της PCR στη διάγνωση λοιμωδών νοσημάτων σε σχέση με άλλες μεθόδους έρευνας είναι το εξής:

• ο αιτιολογικός παράγοντας της λοίμωξης μπορεί να βρεθεί σε οποιοδήποτε βιολογικό περιβάλλον του σώματος, συμπεριλαμβανομένου του υλικού που λαμβάνεται με βιοψία.
• Είναι δυνατή η διάγνωση μολυσματικών ασθενειών στα πρώτα στάδια της νόσου.
• Είναι δυνατή μια ποσοτική αξιολόγηση των αποτελεσμάτων της έρευνας (πόσοι ιοί ή βακτηρίδια περιέχονται στο υπό έρευνα υλικό).
• υψηλή ευαισθησία της μεθόδου · π.χ., η ευαισθησία της PCR για ανίχνευση του DNA του ιού της ηπατίτιδας Β στο αίμα είναι 0,001 pg / ml (περίπου 4 × 10 ² αντίγραφα / ml), ενώ η ευαισθησία μιας μεθόδου υβριδοποίησης DNA χρησιμοποιώντας διακλαδισμένη ανιχνευτών - 2,1 pg / ml (περίπου 7 × 10 ⁵ αντίγραφα / ml).

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7], [8]