Ιατρικός εμπειρογνώμονας του άρθρου
Νέες δημοσιεύσεις
Η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR) στη διάγνωση λοιμωδών νοσημάτων
Τελευταία επισκόπηση: 05.07.2025
Όλα τα περιεχόμενα του iLive ελέγχονται ιατρικά ή ελέγχονται για να διασφαλιστεί η όσο το δυνατόν ακριβέστερη ακρίβεια.
Έχουμε αυστηρές κατευθυντήριες γραμμές προμήθειας και συνδέουμε μόνο με αξιόπιστους δικτυακούς τόπους πολυμέσων, ακαδημαϊκά ερευνητικά ιδρύματα και, όπου είναι δυνατόν, ιατρικά επισκοπικά μελέτες. Σημειώστε ότι οι αριθμοί στις παρενθέσεις ([1], [2], κλπ.) Είναι σύνδεσμοι με τις οποίες μπορείτε να κάνετε κλικ σε αυτές τις μελέτες.
Εάν πιστεύετε ότι κάποιο από το περιεχόμενό μας είναι ανακριβές, παρωχημένο ή αμφισβητήσιμο, παρακαλώ επιλέξτε το και πατήστε Ctrl + Enter.
Η PCR είναι μία από τις διαγνωστικές μεθόδους DNA που επιτρέπει την αύξηση του αριθμού των αντιγράφων του ανιχνευμένου τμήματος του γονιδιώματος (DNA) βακτηρίων ή ιών κατά εκατομμύρια φορές χρησιμοποιώντας το ένζυμο DNA πολυμεράση. Το εξεταζόμενο τμήμα νουκλεϊκού οξέος που είναι ειδικό για ένα δεδομένο γονιδίωμα πολλαπλασιάζεται (ενισχύεται) πολλές φορές, γεγονός που επιτρέπει την ταυτοποίησή του. Πρώτον, το μόριο DNA των βακτηρίων ή των ιών διαιρείται σε δύο αλυσίδες με θέρμανση, στη συνέχεια, παρουσία συντιθέμενων εκκινητών DNA (η αλληλουχία νουκλεοτιδίων είναι ειδική για το γονιδίωμα που προσδιορίζεται), συνδέονται με συμπληρωματικά τμήματα DNA και η δεύτερη αλυσίδα νουκλεϊκού οξέος συντίθεται μετά από κάθε εκκινητή παρουσία θερμοσταθερής DNA πολυμεράσης. Λαμβάνονται δύο μόρια DNA. Η διαδικασία επαναλαμβάνεται πολλές φορές. Ένα μόριο DNA, δηλαδή ένα σωματίδιο βακτηρίου ή ιού, είναι αρκετό για τη διάγνωση. Η εισαγωγή ενός επιπλέον σταδίου στην αντίδραση - σύνθεση DNA σε ένα μόριο RNA χρησιμοποιώντας το ένζυμο αντίστροφη μεταγραφάση - κατέστησε δυνατή τη δοκιμή ιών RNA, όπως ο ιός HCV. Η PCR είναι μια διαδικασία τριών σταδίων που επαναλαμβάνεται κυκλικά: μετουσίωση, ανόπτηση εκκινητή, σύνθεση DNA (πολυμερισμός). Η συντιθέμενη ποσότητα DNA ταυτοποιείται με ELISA ή ηλεκτροφόρηση.
Η PCR μπορεί να χρησιμοποιήσει διάφορα βιολογικά υλικά - ορό ή πλάσμα αίματος, ουρηθρικό ξέσμα, βιοψία, πλευριτικό υγρό, εγκεφαλονωτιαίο υγρό κ.λπ. Η PCR χρησιμοποιείται κυρίως για τη διάγνωση λοιμωδών νοσημάτων όπως η ιογενής ηπατίτιδα Β, η ιογενής ηπατίτιδα C, η ιογενής ηπατίτιδα D, η λοίμωξη από CMV, οι σεξουαλικώς μεταδιδόμενες λοιμώξεις (γονόρροια, χλαμύδια, μυκόπλασμα, λοιμώξεις από ουρεόπλασμα), η φυματίωση, η λοίμωξη από HIV κ.λπ.
Το πλεονέκτημα της PCR στη διάγνωση μολυσματικών ασθενειών έναντι άλλων ερευνητικών μεθόδων είναι το εξής:
- ο μολυσματικός παράγοντας μπορεί να ανιχνευθεί σε οποιοδήποτε βιολογικό περιβάλλον του σώματος, συμπεριλαμβανομένου του υλικού που λαμβάνεται κατά τη διάρκεια βιοψίας·
- είναι δυνατή η διάγνωση μολυσματικών ασθενειών στα πρώτα στάδια της νόσου.
- είναι δυνατή η ποσοτική αξιολόγηση των αποτελεσμάτων της έρευνας (πόσοι ιοί ή βακτήρια περιέχονται στο υπό μελέτη υλικό).
- υψηλή ευαισθησία της μεθόδου. Για παράδειγμα, η ευαισθησία της PCR για την ανίχνευση DNA του ιού της ηπατίτιδας Β στο αίμα είναι 0,001 pg/ml (περίπου 4×102 αντίγραφα /ml), ενώ η ευαισθησία της μεθόδου υβριδισμού DNA με χρήση διακλαδισμένων ανιχνευτών είναι 2,1 pg/ml (περίπου 7×105 αντίγραφα /ml).
[