Ανοσοφαινότυπος των αιμοβλαστώσεων

Σημαντική πρόοδος στην αιματολογική έρευνα τα τελευταία χρόνια συνδέεται με τη χρήση σύγχρονων ανοσολογικών μεθόδων και αυτοματοποιημένων μέσων ανάλυσης και διαλογής κυττάρων περιφερικού αίματος και μυελού των οστών - κυτταρομετρητές ροής. Οι παραδοσιακές μορφολογικές και κυτταροχημικές μελέτες των κυττάρων υποστρώματος ασθενειών (αίμα, ερυθρός μυελός των οστών, λεμφαδένες, σπλήνας κ.λπ.) σε πολλές περιπτώσεις, ειδικά σε λεμφοϋπερπλαστικές ασθένειες, δεν μας επιτρέπουν να εντοπίσουμε την πλήρη ποικιλία παραλλαγών μεταξύ μορφολογικά παρόμοιων μορφών και να διαπιστώσουμε την πηγή προέλευσης του παθολογικού κλώνου. Αυτά τα προβλήματα μπορούν να λυθούν μόνο με τη μελέτη των ανοσολογικών χαρακτηριστικών των κυττάρων. Κάθε στάδιο διαφοροποίησης των αιμοποιητικών κυττάρων αντιστοιχεί στο δικό του σύνολο αντιγόνων, τα οποία σύμφωνα με τη διεθνή ταξινόμηση ονομάζονται διαφοροποίηση και χωρίζονται σε συστάδες διαφοροποίησης, που ονομάζονται CD.

Στις νεοπλασματικές αλλοιώσεις, ένα μπλοκάρισμα διαφοροποίησης μπορεί να συμβεί σε οποιοδήποτε στάδιο της φυσιολογικής κυτταρικής ανάπτυξης, με αποτέλεσμα τον σχηματισμό ενός κλώνου παθολογικών κυττάρων που καθορίζουν το υπόστρωμα της νόσου και έχουν τα ίδια ανοσολογικά (ή φαινοτυπικά) χαρακτηριστικά. Με τη διεξαγωγή μελετών αυτών των δεικτών σε κύτταρα, είναι δυνατόν να προσδιοριστεί σε ποια μορφή και παραλλαγή της νόσου αντιστοιχούν, δηλαδή, με βάση τον ανοσολογικό φαινότυπο των κυττάρων, να διεξαχθεί διαφορική διάγνωση, η οποία είναι πιο δύσκολη στις λεμφοϋπερπλαστικές ασθένειες, επειδή το κύριο κύτταρο του παθολογικού υποστρώματος της νόσου είναι μορφολογικά σχεδόν πανομοιότυπα κύτταρα.

Η φαινοτυπική ανάλυση επιτρέπει τη χρήση μονοκλωνικών αντισωμάτων για την ταυτοποίηση βλαστικών και ώριμων αιμοσφαιρίων της μυελο-, μονο-, λεμφοκυτταρικής σειράς με την παρουσία αντιγόνων διαφοροποίησης (υποδοχέων) στο κυτταρικό τοίχωμα. Η ενότητα "Αξιολόγηση της ανοσολογικής κατάστασης του σώματος" περιγράφει εν μέρει τα χαρακτηριστικά και τη διαγνωστική αξία της μελέτης των κυτταρικών δεικτών. παρακάτω είναι μια σύντομη περιγραφή των δεικτών αντιγόνου των κυττάρων σε σχέση με τη διάγνωση των αιμοβλαστώσεων. Τα ακόλουθα αντιγόνα (δείκτες) μπορούν να ανιχνευθούν στις μεμβράνες των αιμοσφαιρίων και του ερυθρού μυελού των οστών.

• Η CD2 είναι μια μονομερής διαμεμβρανική γλυκοπρωτεΐνη. Βρίσκεται στην επιφάνεια όλων των Τ-λεμφοκυττάρων που κυκλοφορούν στο αίμα και σε ορισμένα ΝΚ-λεμφοκύτταρα. Η CD2 εμπλέκεται στη διαδικασία εναλλακτικής ενεργοποίησης των Τ-λεμφοκυττάρων. Η ανίχνευση της CD2 με τη χρήση μονοκλωνικών αντισωμάτων στην κλινική πράξη χρησιμοποιείται για τον φαινοτυπικό προσδιορισμό της οξείας λευχαιμίας των Τ-κυττάρων, των λεμφωμάτων, των χρόνιων φλεγμονωδών και των ανοσοανεπάρκειων.
• Το CD3 είναι ένα πρωτεϊνικό σύμπλεγμα που σχετίζεται με τον αντιγονο-ειδικό υποδοχέα Τ-κυττάρων και αποτελεί τον κύριο λειτουργικό δείκτη των Τ-λεμφοκυττάρων. Διευκολύνει τη μεταφορά του σήματος ενεργοποίησης από τη μεμβράνη στο κυτταρόπλασμα του κυττάρου. Ο προσδιορισμός του CD3 ενδείκνυται για τη διάγνωση οξείας λευχαιμίας Τ-κυττάρων, λεμφωμάτων (το CD3 δεν εκφράζεται σε μη Τ-κυτταρικά λεμφοειδή νεοπλάσματα) και ανοσοανεπάρκειων.
• Το CD4 είναι μια διαμεμβρανική γλυκοπρωτεΐνη που εκφράζεται από έναν υποπληθυσμό Τ-βοηθητικών (επαγωγέων), οι οποίοι αποτελούν το 45% των λεμφοκυττάρων του περιφερικού αίματος. Στα πρώιμα στάδια ανάπτυξης των λεμφοκυττάρων στον θύμο αδένα, τα αντιγόνα CD4, καθώς και το CD8, εκφράζονται από όλα τα φλοιώδη λεμφοκύτταρα. Τα μυελικά θυμοκύτταρα, ο φαινότυπος των οποίων είναι παρόμοιος με τα ώριμα CD4+ Τ-κύτταρα του περιφερικού αίματος (Τ-βοηθητικοί), εκφράζουν ήδη υποδοχείς CD4 ή CD8. Στο περιφερικό αίμα, έως και 5% των κυττάρων φέρουν δείκτες CD4 και CD8. Μικρή έκφραση του CD4 είναι δυνατή σε ορισμένα κύτταρα της μονοκυτταρικής σειράς. Το CD4 εκφράζεται στις περισσότερες περιπτώσεις λεμφωμάτων Τ-κυττάρων, συμπεριλαμβανομένης της μυκητιάσεων fungoides, καθώς και στη λευχαιμία Τ-κυττάρων που σχετίζεται με τον HTLV (HTLV - ανθρώπινος Τ-λεμφοτρόπος ιός).
• Η CD5 είναι μια γλυκοπρωτεΐνη μονής αλυσίδας που υπάρχει σε όλα τα ώριμα Τ λεμφοκύτταρα και στα περισσότερα θυμοκύτταρα και εκφράζεται ασθενώς από τα Β λεμφοκύτταρα. Η CD5 ανιχνεύεται σε νεοπλασματικά κύτταρα της χρόνιας λεμφοκυτταρικής λευχαιμίας Β-κυττάρων και του κεντροκυτταρικού λεμφώματος. Σε άλλους τύπους κακοήθων λεμφικών νοσημάτων - θυλακιώδες λέμφωμα, λευχαιμία τριχωτών κυττάρων, λέμφωμα μεγάλων κυττάρων - η CD5 δεν εκφράζεται.
• Το CD7 είναι μια πρωτεΐνη μονής αλυσίδας, ο πρώτος δείκτης διαφοροποίησης των Τ-κυττάρων. Εκφράζεται από τα προ-Τ-λεμφοκύτταρα ακόμη και πριν από τη μετανάστευσή τους στον θύμο αδένα. Το CD7 ανιχνεύεται στα περισσότερα ΝΚ κύτταρα, ενώ ασθενής έκφραση παρατηρείται στα μονοκύτταρα. Τα Β-λεμφοκύτταρα και τα κοκκιοκύτταρα δεν περιέχουν αυτό το αντιγόνο. Ο προσδιορισμός του CD7 χρησιμοποιείται για τη διάγνωση λεμφωμάτων, λεμφοβλαστικής λευχαιμίας Τ-κυττάρων παιδικής ηλικίας.
• Το CD8 είναι μια πρωτεΐνη που αποτελείται από δύο πολυπεπτιδικές αλυσίδες συνδεδεμένες με δισουλφιδικές γέφυρες. Εκφράζεται από έναν υποπληθυσμό κυτταροτοξικών και κατασταλτικών Τ λεμφοκυττάρων, τα οποία αποτελούν το 20-35% των λεμφοκυττάρων του περιφερικού αίματος. Αυτό το αντιγόνο εκφράζεται επίσης από NK λεμφοκύτταρα, φλοιώδη θυμοκύτταρα, 30% των μυελικών θυμοκυττάρων και έναν υποπληθυσμό ερυθρών κυττάρων μυελού των οστών. Το CD8 μελετάται για την ποσοτικοποίηση της περιεκτικότητας σε Τ καταστολείς (βλ. την ενότητα «Καταστολείς Τ λεμφοκύτταρα στο αίμα» παραπάνω).

• Η CD10 είναι μια ενδοπεπτιδάση που σχετίζεται με την κυτταρική μεμβράνη. Η CD10 εκφράζεται από νεαρές μορφές Β λεμφοκυττάρων και από έναν υποπληθυσμό φλοιωδών λεμφοκυττάρων. Η CD10 εκφράζεται από όλα τα κύτταρα ALL.
• Το CD11c εκφράζεται στην κυτταρική μεμβράνη από μακροφάγα, μονοκύτταρα, κοκκιοκύτταρα, κύτταρα ΝΚ και κύτταρα λευχαιμίας τριχωτών κυττάρων.
• Η CD13 είναι μια γλυκοπρωτεΐνη που εκφράζεται από κύτταρα της μυελομονοκυτταρικής γενεαλογίας (προγονικά κύτταρα, ουδετερόφιλα, βασεόφιλα, ηωσινόφιλα, μονοκύτταρα και κύτταρα μυελοειδούς λευχαιμίας). Απουσιάζει από τα Τ και Β λεμφοκύτταρα, τα ερυθροκύτταρα και τα αιμοπετάλια.
• Το CD14 είναι μια γλυκοπρωτεΐνη επιφανειακής μεμβράνης. Εκφράζεται κυρίως από μονοκύτταρα και μακροφάγα. Το CD14 ανιχνεύεται σε περισσότερο από 95% των μονοκυττάρων στο περιφερικό αίμα και στον μυελό των οστών. Ισχυρή έκφραση του CD14 παρατηρείται στην οξεία μυελοβλαστική λευχαιμία. Αυτό το αντιγόνο δεν εκφράζεται στην οξεία και χρόνια λεμφοβλαστική λευχαιμία.
• Το CD15 είναι ένας ολιγοσακχαρίτης. Συμμετέχει στη φαγοκυττάρωση και τη χημειοταξία. Αυτό το αντιγόνο υπάρχει στην επιφάνεια των ώριμων κοκκιοκυττάρων και των κυττάρων Berezovsky-Sternberg. Η έκφραση του αντιγόνου CD15 ανιχνεύεται στη νόσο Hodgkin. Στα μη-Hodgkin λεμφώματα, το CD15 δεν ανιχνεύεται στις περισσότερες περιπτώσεις.
• Το CD16 εκφράζεται στην επιφάνεια των κοκκιοκυττάρων, των μονοκυττάρων, των μακροφάγων και των κυττάρων ΝΚ. Όλα τα λεμφοκύτταρα που εκφράζουν αυτό το αντιγόνο έχουν την ικανότητα για κυτταρική κυτταροτοξικότητα που εξαρτάται από αντισώματα. Το CD16 προσδιορίζεται κατά την τυποποίηση των χρόνιων μυελοκυτταρικών λευχαιμιών, για τον χαρακτηρισμό των κυττάρων ΝΚ.
• Η CD19 είναι μια γλυκοπρωτεΐνη που υπάρχει σε όλα τα περιφερικά Β λεμφοκύτταρα και σε όλους τους προδρόμους των Β-κυττάρων. Απουσιάζει από τα πλασματοκύτταρα. Είναι ο πρώτος δείκτης των Β κυττάρων και παίζει σημαντικό ρόλο στη ρύθμιση της ενεργοποίησης και του πολλαπλασιασμού των Β κυττάρων. Η CD19 εκφράζεται σε όλα τα νεοπλασματικά κύτταρα της οξείας λευχαιμίας Β-κυττάρων και υπάρχει επίσης σε ορισμένες μορφές οξείας μονοβλαστικής λευχαιμίας.
• Το CD20 είναι μια μη γλυκοζυλιωμένη πρωτεΐνη. Στην οντογένεση των Β-λεμφοκυττάρων, το αντιγόνο CD20 εμφανίζεται μετά το CD19 στο στάδιο της προ-Β-κυτταρικής διαφοροποίησης των λεμφοκυττάρων. Απουσιάζει από την πλασματική μεμβράνη των πλασματοκυττάρων. Εκφράζεται στην ΟΛΛ, στη χρόνια λεμφοκυτταρική λευχαιμία Β-κυττάρων, στη λευχαιμία τριχωτών κυττάρων, στο λέμφωμα Burkitt και πολύ σπάνια στην οξεία μονοβλαστική λευχαιμία.
• Η CD21 είναι μια γλυκοπρωτεΐνη που υπάρχει σε σημαντικές ποσότητες στα Β-λεμφοκύτταρα των λεμφοειδών οργάνων και σε μικρές ποσότητες στα Β-κύτταρα του περιφερικού αίματος. Η CD21 είναι ένας υποδοχέας για τον ιό Epstein-Barr.
• Το CD22 είναι μια πρωτεΐνη που αποτελείται από δύο πολυπεπτιδικές αλυσίδες. Εκφράζεται στη μεμβράνη των περισσότερων Β λεμφοκυττάρων, συμπεριλαμβανομένων των προδρόμων κυττάρων (προλεμφοκύτταρα). Το αντιγόνο δεν εκφράζεται στα Β λεμφοκύτταρα (πλασματοκύτταρα) μετά την ενεργοποίησή τους. Η πιο έντονη έκφραση του CD22 ανιχνεύεται στα κύτταρα της λευχαιμίας εκ τριχωτών κυττάρων, ενώ ασθενής - στη μυελογενή λευχαιμία και την μη Τ-κυττάρων ΟΛΛ.
• Η CD23 είναι μια γλυκοπρωτεΐνη που εκφράζεται σε πολύ μεγαλύτερο βαθμό από ενεργοποιημένα Β λεμφοκύτταρα του περιφερικού αίματος. Η CD23 προκαλεί την IgE-εξαρτώμενη κυτταροτοξικότητα και τη φαγοκυττάρωση από μακροφάγα και ηωσινόφιλα.
• Το CD25 είναι μια γλυκοπρωτεΐνη μονής αλυσίδας που αναγνωρίζεται ως υποδοχέας χαμηλής συγγένειας για την IL-2. Αυτός ο υποδοχέας εκφράζεται σε ενεργοποιημένα Τ λεμφοκύτταρα και, σε μικρότερη πυκνότητα, σε ενεργοποιημένα Β κύτταρα. Στο περιφερικό αίμα υγιών ατόμων, το αντιγόνο υπάρχει σε περισσότερο από 5% των λεμφοειδών κυττάρων.
• Το CD29 είναι ένας υποδοχέας φιμπρονεκτίνης. Κατανέμεται ευρέως στους ιστούς και εκφράζεται από τα λευκοκύτταρα. Η ανίχνευση CD29 σε κύτταρα περιφερικού αίματος χρησιμοποιείται για την τυποποίηση ενός υποπληθυσμού Τ κυττάρων με φαινότυπο CD4+CD29+, τα οποία ονομάζονται βοηθητικά κύτταρα τύπου 2 (Th2). Αυτά τα κύτταρα συμμετέχουν στην χυμική ανοσολογική απόκριση παράγοντας λεμφοκίνες.
• Το CD33 είναι μια διαμεμβρανική γλυκοπρωτεΐνη. Βρίσκεται στην επιφάνεια των κυττάρων της μυελοειδούς και μονοκυτταρικής σειράς. Βρίσκεται στην επιφάνεια των μονοκυττάρων και, σε μικρότερο βαθμό, των κοκκιοκυττάρων στο περιφερικό αίμα. Περίπου το 30% των ερυθρών κυττάρων του μυελού των οστών εκφράζουν CD33, συμπεριλαμβανομένων των μυελοβλαστών, των προμυελοκυττάρων και των μυελοκυττάρων. Το αντιγόνο απουσιάζει από τις μεμβράνες των πολυδύναμων βλαστικών κυττάρων. Ο προσδιορισμός του CD33 χρησιμοποιείται για τον χαρακτηρισμό κυττάρων σε λευχαιμίες μυελοειδούς προέλευσης. Τα λευχαιμικά κύτταρα λεμφοειδούς και ερυθροειδούς προέλευσης δεν εκφράζουν CD33.
• Το CD34 είναι μια φωσφογλυκοπρωτεΐνη που εκφράζεται από αιμοποιητικά προγονικά κύτταρα, συμπεριλαμβανομένων των μονοδύναμων βλαστικών κυττάρων. Η πιο έντονη έκφραση του Ag παρατηρείται σε πρώιμα προγονικά κύτταρα. Καθώς τα κύτταρα ωριμάζουν, η έκφραση του δείκτη μειώνεται. Το CD34 βρίσκεται επίσης σε ενδοθηλιακά κύτταρα. Ο προσδιορισμός του CD34 χρησιμοποιείται για τον χαρακτηρισμό κυττάρων σε οξείες μυελοβλαστικές και λεμφοβλαστικές λευχαιμίες. Στις χρόνιες λεμφοκυτταρικές λευχαιμίες και λεμφώματα, η έκφραση του αντιγόνου CD34 δεν ανιχνεύεται.

• Το CD41a εκφράζεται από τα αιμοπετάλια και τα μεγακαρυοκύτταρα. Μονοκλωνικά αντισώματα για την ανίχνευση του CD41a χρησιμοποιούνται για τη διάγνωση της μεγακαρυοβλαστικής λευχαιμίας. Στη θρομβασθένεια του Glanzmann, η έκφραση αυτού του αντιγόνου απουσιάζει ή καταστέλλεται σημαντικά.
• Η CD42b είναι μια μεμβρανική γλυκοπρωτεΐνη που αποτελείται από δύο πολυπεπτιδικές αλυσίδες. Ο δείκτης ανιχνεύεται στην επιφάνεια των αιμοπεταλίων και των μεγακαρυοκυττάρων. Στην κλινική πρακτική, η ανίχνευση της CD42b χρησιμοποιείται για τη διάγνωση της θρομβοκυτταροπάθειας - συνδρόμου Bernard-Soulier.
• Το CD45RA ανήκει στην κατηγορία των διαμεμβρανικών γλυκοπρωτεϊνών. Είναι ένα κοινό λευκοκυπαρικό αντιγόνο. Εκφράζεται στην κυτταρική μεμβράνη των Β λεμφοκυττάρων, σε μικρότερο βαθμό στα Τ λεμφοκύτταρα και σε ώριμα μυελικά θυμοκύτταρα. Ο δείκτης δεν εκφράζεται από τα κοκκιοκύτταρα.
• Το CD45RO είναι μια ισομορφή χαμηλού μοριακού βάρους του CD45RA, ενός κοινού αντιγόνου λευκοκυττάρων. Ανιχνεύεται σε Τ κύτταρα (Τ λεμφοκύτταρα μνήμης), έναν υποπληθυσμό Β λεμφοκυττάρων, μονοκυττάρων και μακροφάγων. Τα μονοκλωνικά αντισώματα έναντι του CD45RO αλληλεπιδρούν με τα περισσότερα θυμοκύτταρα, έναν υποπληθυσμό CD4+ και CD8+ Τ λεμφοκυττάρων ηρεμίας, και ώριμα ενεργοποιημένα Τ κύτταρα. Κύτταρα μυελομονοκυτταρικής προέλευσης, κοκκιοκύτταρα και μονοκύτταρα φέρουν επίσης αυτό το αντιγόνο. Ανιχνεύεται σε κεντροβλαστικά και ανοσοβλαστικά λεμφώματα.
• Το CD46 είναι ένα Ο-γλυκοζυλιωμένο διμερές. Κατανέμεται ευρέως στους ιστούς και εκφράζεται από Τ και Β λεμφοκύτταρα, μονοκύτταρα, κοκκιοκύτταρα, κύτταρα ΝΚ, αιμοπετάλια, ενδοθηλιακά κύτταρα, ινοβλάστες, αλλά απουσιάζει από την επιφάνεια των ερυθρών αιμοσφαιρίων. Το CD46 παρέχει προστασία στους ιστούς από το συμπλήρωμα.
• Το CD61 είναι ένα αντιγόνο αιμοπεταλίων. Εκφράζεται σε αιμοπετάλια του περιφερικού αίματος και του ερυθρού μυελού των οστών, καθώς και σε μεγακαρυοκύτταρα και μεγακαρυοβλάστες. Ο προσδιορισμός του χρησιμοποιείται ως δείκτης στην οξεία μεγακαρυοβλαστική λευχαιμία. Η έκφραση αντιγόνου απουσιάζει ή καταστέλλεται σε ασθενείς με θρομβασθένεια Glanzmann.
• Το CD95, που ονομάζεται επίσης Fas ή APO-1, είναι μια διαμεμβρανική γλυκοπρωτεΐνη, μέλος της οικογένειας υποδοχέων του παράγοντα νέκρωσης όγκων. Εκφράζεται σε σημαντικές ποσότητες στα Τ λεμφοκύτταρα (CD4+ και CD8+) στο περιφερικό αίμα και, σε μικρότερο βαθμό, στα Β λεμφοκύτταρα και στα κύτταρα NK. Αυτό το αντιγόνο εκφράζεται επίσης σε κοκκιοκύτταρα, μονοκύτταρα, κύτταρα ιστών και νεοπλασματικά κύτταρα. Η σύνδεση του CD95 με τον συνδέτη Fas (CD95L) προκαλεί απόπτωση στα κύτταρα.
• Το CD95L, ή ο συνδέτης Fas, είναι μια πρωτεΐνη μεμβράνης που ανήκει στην οικογένεια υποδοχέων του παράγοντα νέκρωσης όγκων. Αυτό το αντιγόνο εκφράζεται από κυτταροτοξικά Τ λεμφοκύτταρα, κύτταρα NK και πολύ συχνά από καρκινικά κύτταρα. Είναι ο κύριος επαγωγέας της απόπτωσης στα κύτταρα.
• Το HLA-DR είναι ένας μονομορφικός προσδιοριστής μορίων τάξης II του ανθρώπινου συμπλέγματος μείζονος ιστοσυμβατότητας (HLA). Ο δείκτης εκφράζεται σε κύτταρα Langerhans, δενδριτικά κύτταρα λεμφοειδών οργάνων, ορισμένους τύπους μακροφάγων, Β λεμφοκύτταρα, ενεργοποιημένα Τ κύτταρα και θυμικά επιθηλιακά κύτταρα. Η μελέτη αυτού του δείκτη χρησιμοποιείται για τον ποσοτικό προσδιορισμό ενεργοποιημένων Τ λεμφοκυττάρων με φαινότυπο CD3+ HLA-DR+.

Χρησιμοποιώντας μια διαφορετική επιλογή μονοκλωνικών αντισωμάτων έναντι δεικτών, είναι δυνατό να δημιουργηθεί ένα φαινοτυπικό πορτρέτο κυττάρων που είναι χαρακτηριστικό μιας δεδομένης μορφής λευχαιμίας.

Εκτός από τη χρήση μεθόδων ανοσοφαινοτυπίας για τη διάγνωση και τη διαφορική διάγνωση των αιμοβλαστώσεων, η χρήση τους στη διαδικασία θεραπείας για την αξιολόγηση της κατάστασης της ύφεσης και του υπολειμματικού πληθυσμού των λευχαιμικών κυττάρων έχει αποδειχθεί ιδιαίτερα σημαντική. Γνωρίζοντας το φαινοτυπικό "πορτρέτο" των βλαστικών κυττάρων κατά την περίοδο της διάγνωσης, αυτοί οι δείκτες καθιστούν δυνατή την ανίχνευση κυττάρων του λευχαιμικού κλώνου κατά την περίοδο της ύφεσης και, με την αύξηση του αριθμού τους, την πρόβλεψη της ανάπτυξης μιας υποτροπής πολύ πριν (1-4 μήνες) από την εμφάνιση των κλινικών και μορφολογικών συμπτωμάτων της.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]