Αιματοποιητικά βλαστοκύτταρα

Τα αιμοποιητικά βλαστικά κύτταρα (HSCs) ως μεσεγχυματικά προγονικά κύτταρα χαρακτηρίζονται από πολυδυναμικότητα και οδηγούν σε κυτταρικές σειρές, πεπερασμένα στοιχεία τα οποία σχηματίζουν τα κύτταρα του αίματος και μερικές εξειδικευμένα κύτταρα των ιστών του ανοσοποιητικού συστήματος.

Η υπόθεση της ύπαρξης ενός κοινού προγόνου όλων των κυττάρων του αίματος, όπως επίσης και ο όρος «βλαστοκύτταρο», που ανήκει Α Maximov (1909) Το δυναμικό σχηματισμό κυτταρικής μάζας από GSK τεράστιο -. Bone βλαστικά κύτταρα μυελού παράγουν την 10η ημέρα τα κύτταρα που συνθέτουν αιμοσφαιρίων του ίδιου του περιφερειακού. η ύπαρξη των αιμοποιητικών βλαστικών κυττάρων ιδρύθηκε το 1961 σε πειράματα σχετικά με την ανάκτηση της αιματοποιήσεως σε ποντικούς που λαμβάνουν μια θανατηφόρα δόση της έκθεσης σε ακτινοβολία που καταστρέφει τα βλαστικά κύτταρα του μυελού των οστών. Pos δηλαδή μεταμόσχευση συγγενικά κύτταρα μυελού των οστών, έτσι θανατηφόρα ακτινοβολημένα ζώα διακριτές εστίες της αιμοποίησης ανιχνεύθηκαν στο σπλήνα των αποδεκτών των οποίων η πηγή - ενιαία κλωνογόνων προγονικών κυττάρων.

Στη συνέχεια, αποδείχθηκε η ικανότητα των αιματοποιητικών βλαστοκυττάρων να αυτο-υποστηρίξουν, η οποία παρέχει τη λειτουργία της αιματοποίησης κατά την οντογένεση. Στη διαδικασία της εμβρυϊκής ανάπτυξης, οι HSC χαρακτηρίζονται από υψηλή μεταναστευτική δραστηριότητα, η οποία είναι απαραίτητη για τη μετάβασή τους στις θέσεις των αιμοποιητικών οργάνων. Αυτή η ιδιότητα των HSC διατηρείται επίσης στην οντογένεση - λόγω της σταθερής μετανάστευσης τους, λαμβάνει χώρα μόνιμη ανανέωση της ομάδας ανοσοκαταστροφικών κυττάρων. Η ικανότητα της GSK μετανάστευσης, διείσδυση μέσω των φραγμών αίματος-ιστού, εμφύτευση σε ανάπτυξη των ιστών και κλωνογονικές παρείχε τη βάση για κύτταρα μεταμόσχευση μυελού των οστών σε έναν αριθμό νόσων που σχετίζονται με διαταραχές του αιμοποιητικού συστήματος.

Όπως όλες οι πηγές βλαστικών κυττάρων, αιμοποιητικών βλαστικών κυττάρων είναι παρόντες στη θέση σας (ο μυελός των οστών) σε πολύ μικρές ποσότητες, γεγονός που οδηγεί σε ορισμένες δυσκολίες στην κατανομή τους. Οι ανοσοφαινοτυπικών ανθρώπινα HSCs χαρακτηρίζονται ως κύτταρα CD34 + ΝΚ ικανό μεταναστεύουν στην κυκλοφορία του αίματος και αποικίζουν όργανα του ανοσοποιητικού συστήματος ή για να ανασυστήσουν το στρώμα μυελού των οστών. Είναι απαραίτητο να κατανοήσουμε σαφώς ότι η GSK δεν είναι τα πλέον ανώριμα κύτταρα του μυελού των οστών, και προέρχονται από προδρόμους, οι οποίες περιλαμβάνουν dormantnye ινοβλαστών SB34-αρνητικά κύτταρα. Διαπιστώθηκε ότι τα κύτταρα με το φαινότυπο της CD34 είναι σε θέση να εισέλθουν στην κυκλοφορία του αίματος, όπου αλλάζουν φαινότυπο τους στο CD34 +, αλλά η παλιννόστηση στο μυελό των οστών κάτω από την επίδραση του μικροπεριβάλλοντος ξαναγίνει στοιχεία βλαστικών κυττάρων CD34-αρνητικό. Σε κατάσταση ηρεμίας ~ CD34-κύτταρα δεν αποκρίνονται με παρακρινείς ρυθμιστικά σήματα στρώμα (παράγοντες ανάπτυξης, κυτοκίνες). Ωστόσο, σε καταστάσεις που απαιτούν ένταση ενίσχυσης αιμοποιητικών αρχέγονων κυττάρων με το CD34 φαινότυπο ανταποκρίνονται σε σήματα διαφοροποιήσεως σχηματίσουν τόσο αιμοποιητικών και μεσεγχυματικών προγονικών κυττάρων. Αιματοποίηση πραγματοποιείται με άμεση επαφή με GSK κυτταρικά στοιχεία του στρώματος του μυελού των οστών παρουσίασε ένα σύνθετο δίκτυο των μακροφάγων, δικτυωτό ενδοθηλιακά κύτταρα, οστεοβλάστες, στρωματικά ινοβλάστες και εξωκυτταρική μήτρα. Οστών πλαισίου στρώματος του μυελού - όχι μόνο μια μήτρα ή «σκελετός» για αιματοποιητικό ιστό, που μεταφέρει πρόστιμο ρύθμιση της αιμοποίησης λόγω παρακρινή ρυθμιστικά σήματα των αυξητικών παραγόντων, κυτοκινών και χημειοκινών, και επίσης παρέχει συγκολλητικές αλληλεπιδράσεις απαραίτητη για το σχηματισμό των κυττάρων του αίματος.

Έτσι, η βάση του ενημερώνεται συνεχώς αιματοποιητικού συστήματος βρίσκεται το πολυδύναμων (από την άποψη της αιματοποίησης) αιμοποιητικών αρχέγονων κυττάρων ικανών μακροπρόθεσμων αυτο-ανανέωση. Κατά τη διαδικασία της διάπραξης, οι HSC υποβάλλονται σε πρωτογενή διαφοροποίηση και σχηματίζουν κλώνους κυττάρων που διαφέρουν στα κυτταρομορφικά και ανοσοφαινοτυπικά χαρακτηριστικά τους. Ο διαδοχικός σχηματισμός πρωτόγονων και δεσμευμένων προγονικών κυττάρων ολοκληρώνεται με το σχηματισμό μορφολογικά αναγνωρίσιμων κυττάρων προγόνων διαφόρων αιματοποιητικών γραμμών. Το αποτέλεσμα της επακόλουθα στάδια πολύπλοκη διαδικασία πολλαπλών σταδίων είναι η ωρίμανση των αιμοποιητικών κυττάρων και απόδοση ώριμη να σχηματίζονται στοιχεία περιφερικού αίματος - ερυθροκύτταρα, λευκοκύτταρα, λεμφοκύτταρα και αιμοπετάλια.

[1], [2], [3],

Πηγές αιματοποιητικών βλαστικών κυττάρων

Τα αιμοποιητικά βλαστικά κύτταρα θεωρείται η πιο μελετηθεί πηγή βλαστικών, το οποίο οφείλεται σε μεγάλο βαθμό τη χρήση τους στην κλινική της μεταμόσχευσης μυελού των οστών. Με την πρώτη ματιά, είναι γνωστά πολλά για αυτά τα κύτταρα. Σε κάποιο βαθμό αυτό είναι αλήθεια, δεδομένου ότι οι ενδιάμεσες και ώριμες απογόνους GSK - η πιο προσιτή κυτταρικά στοιχεία, καθένα από τα οποία (ερυθροκύτταρα, λευκοκύτταρα, λεμφοκύτταρα, μονοκύτταρα / μακροφάγα και αιμοπετάλια) είναι εκτενώς μελετημένους σε όλα τα επίπεδα - από το φως στο Ηλεκτρονικής Μικροσκοπίας, από βιοχημικά και ανοσοφαινοτυπικά χαρακτηριστικά πριν από την ταυτοποίηση με ανάλυση PCR. Ωστόσο, η παρακολούθηση διεξάγεται με μορφολογικές, υπερδομικές, βιοχημικές, ανοσοφαινοτυπικών, και βιοφυσικών παραμέτρων του γονιδιωματικού GSK δεν έχει αποφέρει απαντήσεις σε πολλά προβληματικά ζητήματα, η λύση των οποίων είναι απαραίτητη για την ανάπτυξη της μεταμόσχευσης κυττάρων. Δεν είναι ακόμη εγκατεστημένος μηχανισμούς σταθεροποίησης GSK σε λανθάνουσα κατάσταση, ενεργοποιούνται, εισέλθουν στο στάδιο της συμμετρικής ή ασύμμετρης διαίρεσης, και το σημαντικότερο - από δέσμευση για την εκπαίδευση ως λειτουργικώς διαφορετικά κύτταρα του αίματος, ερυθροκύτταρα, λευκοκύτταρα, λεμφοκύτταρα, και αιμοπετάλια.

Η παρουσία στα κύτταρα του μυελού των οστών με το φαινότυπο του CD34, τα οποία είναι οι πρόγονοι των δύο μεσεγχυματικών και αιμοποιητικών βλαστικών κυττάρων έθεσε το ζήτημα της ύπαρξης του το νωρίτερο κοντά στο CD34-αρνητικά κύτταρα στη διαφοροποίηση προγονικών κυττάρων και αιμοποιητικών γραμμή στρωματικών. μέθοδος παρατεταμένη καλλιέργεια ελήφθη με την λεγόμενη μακροχρόνια καλλιέργεια «έναρξη της έρευνας«κύτταρα (μακροχρόνια καλλιέργεια-κίνηση κυττάρων - LTC-IC). Η διάρκεια ζωής τέτοιων προγονικών κυττάρων σε δραστικότητα του στρώματος του μυελού των οστών βασίζεται σε έναν συνδυασμό αυξητικών παραγόντων σχηματισμού αποικιών είναι περισσότερο από 5 εβδομάδες, ενώ η βιωσιμότητα των δεσμευμένων μονάδων σχηματισμού αποικιών (CFU) στην καλλιέργεια του μόνο 3 εβδομάδων. Πιστεύεται σήμερα ότι η LTC-IC - λειτουργικό ανάλογο GCW ως repopulyatsionnom σε υψηλό δυναμικό των περίπου 20% LTC-IC χαρακτηρίζονται από ένα φαινότυπο CD34 + CD38- και επιδεικνύουν μία υψηλή ικανότητα για αυτο-ανανέωση. Τέτοια κύτταρα που βρίσκονται στο ανθρώπινο μυελό των οστών με τη συχνότητα των 1:50 000. Ωστόσο, θα πρέπει να αναγνωριστεί limfoidoinitsiiruyuschie-μυελοειδή κύτταρα πλησιέστερα προς το HSC που λαμβάνονται κάτω από συνθήκες μακροχρόνιας (15 εβδομάδες) της καλλιέργειας. Τέτοια κύτταρα χαρακτηρίζονται ως LTC, μεταξύ των κυττάρων ανθρώπινου μυελού των οστών βρίσκονται σε 10 φορές μικρότερη από τη LTC-IC, και σχηματίζεται σαν ένα μυελοειδών κυτταρικών γραμμών και λεμφοειδείς αιμοποιητικών βλαστικών.

Αν και αιματοποιητικά βλαστικά κύτταρα επισήμανση με μονοκλωνικά αντισώματα, ακολουθούμενη από αναγνώριση των ανοσοφαινοτυπικών είναι η κύρια μέθοδος για την ταυτοποίηση και την επιλεκτική διαλογή αιμοποιητικών βλαστικών κυττάρων με τη δυνητική κλινική χρήση αποκλειστικών GSK έτσι περιορισμένη. Αντισώματα αποκλεισμού υποδοχέα CD34 ή άλλα αντιγόνα τον προσωπικό κατά τη διάρκεια της διαλογής ανοσοθετικών αναπόφευκτα μεταβάλλει τις ιδιότητες των κυττάρων που απομονώνονται με αυτήν. Περισσότερο προτιμώμενη είναι η ανοσο-αρνητική έκκριση του HSC σε μαγνητικές στήλες. Ωστόσο, στην περίπτωση αυτή, διαλογή συνήθως χρησιμοποιείται μονοκλωνικών αντισωμάτων, πάνω σε μεταλλικό υποστήριγμα. Επίσης, σημαντικό, τόσο η μέθοδος της κατανομής των GSK βασίζονται σε φαινοτυπικές, παρά λειτουργικά χαρακτηριστικά. Ως εκ τούτου, πολλοί ερευνητές προτιμούν να χρησιμοποιούν την ανάλυση των κλωνογόνων παραμέτρων GSK, η οποία επιτρέπει το μέγεθος και τη σύνθεση των αποικιών για να προσδιοριστεί ο βαθμός ωριμότητας και την κατεύθυνση της διαφοροποίησης των προγονικών κυττάρων. Είναι γνωστό ότι κατά τη διαδικασία της διάπραξη του αριθμού των κυττάρων και τον αριθμό των τύπων στις αποικίες μειώνεται. Τα αιμοποιητικά αρχέγονα κύτταρα και η κόρη κυττάρου του στις αρχές, που ονομάζεται «κοκκιοκυττάρων-ερυθροκυττάρων μονάδα μονοκυττάρων-megakariotsitokolonieobrazuyuschaya» (SFU-GEMM), δημιουργούν μεγάλες αποικίες μία καλλιέργεια multilinear που περιέχουν, αντιστοίχως, κοκκιοκύτταρα, ερυθροκύτταρα, μονοκύτταρα και μεγακαρυοκύτταρα. Βρίσκεται κάτω από τη μονάδα γραμμής κοκκιοκυττάρων-συγγενικής monotsitokolonieobrazuyuschaya δέσμευση (SFU-GM) παράγει αποικίες κοκκιοκυττάρων και μακροφάγων, και κοκκιοκυτταρική μονάδες σχηματισμού αποικιών (SFU-G) - μόνο μικρές αποικίες των ώριμων κοκκιοκυττάρων. Πρόωρη ερυθροκυττάρων προκατόχου - μονάδα burstoobrazuyuschaya των ερυθρών αιμοσφαιρίων (SFU-Ε) - είναι μια πηγή μεγάλων και πιο ώριμο μονάδα σχηματισμού αποικίας ερυθροκυττάρων (SFU-Ε) - μικρές αποικίες ερυθροκυττάρων. Στο γενικό πληθυσμό, με την ανάπτυξη των κυττάρων σε ημιστερεό μέσο μπορεί να εντοπίσει κύτταρα που σχηματίζουν έξι τύπους μυελοειδών αποικιών: SFU-GEMM, GM-SFU, SFU-G, M-SFU, VFU-E και E-SFU).

Ωστόσο, εκτός από τα αιματοποιητικά παράγωγα, οποιοδήποτε υλικό-πηγές για τον διαχωρισμό του HSC περιέχει ένα σημαντικό αριθμό συναφών κυττάρων. Σε σχέση με αυτό, είναι απαραίτητος ένας προκαταρκτικός καθαρισμός του μοσχεύματος, πρώτα από όλα, των ενεργών κυττάρων του ανοσοποιητικού συστήματος του δότη. Συνήθως χρησιμοποιείται ανοσοποίηση βασιζόμενη στην έκφραση λεμφοκυττάρων ειδικών αντιγόνων για αυτό, πράγμα που καθιστά δυνατή την απομόνωσή τους και την απομάκρυνσή τους χρησιμοποιώντας μονοκλωνικά αντισώματα. Επιπλέον, μια τεχνική immunorozetochnaya Τ-λεμφοκυττάρων εξαντλημένο μεταμόσχευση μυελού των οστών, η οποία βασίζεται στο σχηματισμό συμπλοκών των CD4 + λεμφοκυττάρων και ειδικά μονοκλωνικά αντισώματα απομακρύνεται αποτελεσματικά με τη χρήση της αφαίρεσης. Αυτή η τεχνική παρέχει ένα κεκαθαρμένο κυτταρικό υλικό με 40-60% αιματοποιητικά βλαστοκύτταρα.

Η αύξηση του αριθμού των προγονικών κυττάρων λόγω της απομάκρυνσης των ώριμων κυττάρων του αίματος από ένα προϊόν λευκαφαίρεσης επιτυγχάνεται με φυγοκέντρηση αντιρροή ακολουθούμενη από διήθηση (με την παρουσία του χηλικοποιητή - κιτρικό τρινάτριο) μέσω μιας στήλης που περιέχει ίνες νάιλον επικαλυμμένες με ανθρώπινη ανοσοσφαιρίνη. Η συνεπής εφαρμογή αυτών των δύο τεχνικών εξασφαλίζει πλήρη καθαρισμό του μοσχεύματος από αιμοπετάλια, 89% από ερυθροκύτταρα και 91% από λευκά αιμοσφαίρια. Λόγω της σημαντικής μείωσης των απωλειών HSC, το επίπεδο των κυττάρων CD34 + στη συνολική κυτταρική μάζα μπορεί να αυξηθεί στο 50%.

Για τα λειτουργικά χαρακτηριστικά των απομονωμένων αιματοποιητικών βλαστοκυττάρων, χρησιμοποιείται η ικανότητά τους να δημιουργούν αποικίες ώριμων στοιχείων αίματος σε καλλιέργεια. Η ανάλυση των σχηματισμένων αποικιών καθιστά δυνατή την ταυτοποίηση και τον ποσοτικό προσδιορισμό των τύπων προγονικών κυττάρων, το βαθμό συμμόρφωσής τους, καθώς και την καθιέρωση της κατεύθυνσης της διαφοροποίησής τους. Κλωνογονική ενεργότητα προσδιορίζεται σε ημιστερεό μέσο, μεθυλοκυτταρίνη, άγαρ, πηκτές πλάσματος ή ινώδους, δραστικότητα κυτταρική μετανάστευση μείωση, την πρόληψη προσάρτησης τους στην επιφάνεια από γυαλί ή πλαστικό. Υπό βέλτιστες συνθήκες καλλιέργειας, κλώνοι από ένα μόνο κύτταρο αναπτύσσονται εντός 7-18 ημερών. Εάν υπάρχουν λιγότερα από 50 κύτταρα στον κλώνο, ταυτοποιείται ως ενιαία συστάδα αν ο αριθμός των κυττάρων ξεπεράσει τα 50 - ως αποικία. Προσδιορίζεται ο αριθμός των κυττάρων ικανών να σχηματίσουν μια αποικία (μονάδες που σχηματίζουν αποικίες - CFU ή κύτταρα που σχηματίζουν αποικίες - COCs). Θα πρέπει να σημειωθεί ότι οι παράμετροι και CFU COC δεν αντιστοιχεί στον αριθμό των HSC στο κυτταρικό εναιώρημα, αν και συσχετίζεται με ότι τονίζει και πάλι την ανάγκη για την ταυτοποίηση του λειτουργικού (σχηματισμού αποικιών) δραστηριότητα των HSCs in vitro.

Μεταξύ των κυττάρων του μυελού των οστών, αιματοποιητικά βλαστοκύτταρα έχουν το υψηλότερο δυναμικό πολλαπλασιασμού, λόγω του οποίου σχηματίζονται οι μεγαλύτερες αποικίες σε καλλιέργεια. Με τον αριθμό των αποικιών αυτών, προτείνεται να προσδιοριστεί έμμεσα ο αριθμός των βλαστικών κυττάρων. Μετά το σχηματισμό αποικιών in vitro που υπερβαίνουν 0,5 mm σε διάμετρο και με τον αριθμό των κυττάρων 1000, οι συγγραφείς έχουν δοκιμαστεί η σταθερότητα των εν λόγω κυττάρων σε υποθανατηφόρες δόσεις της 5-φθοροουρακίλης και εξετάστηκαν την ικανότητά τους να ανασυστήσουν πληθυσμιακά τον μυελό των οστών θανατηφόρα ακτινοβοληθέντων ζώων. Σύμφωνα με αυτές τις παραμέτρους, τα απομονωμένα κύτταρα δεν διέφεραν πολύ από την HSC και έλαβαν το σύμβολο συντομογραφίας HPP-CFC - κύτταρα που σχηματίζουν αποικίες με υψηλό πολλαπλασιαστικό δυναμικό.

Η αναζήτηση της δυνατότητας μιας πιο ποιοτικής επιλογής αιματοποιητικών βλαστοκυττάρων συνεχίζεται. Ωστόσο, τα αιμοποιητικά βλαστικά κύτταρα είναι μορφολογικά παρόμοια με τα λεμφοκύτταρα και είναι σχετικά ομοιόμορφη συγκέντρωση των κυττάρων με σχεδόν στρογγυλό πυρήνες, χρωματίνη και σωματιδιακών slabobazofilnoy μικρή ποσότητα κυτοπλάσματος. Ο ακριβής αριθμός είναι επίσης δύσκολο να προσδιοριστεί. Υποτίθεται ότι η GSK στον μυελό των οστών ενός ατόμου εμφανίζεται με συχνότητα 1 ανά 106 κύτταρα που περιέχουν πυρήνα.

Προσδιορισμός των αιματοποιητικών βλαστικών κυττάρων

Για να βελτιωθεί η αναγνώριση των αιμοποιητικών βλαστικών κυττάρων διεξάγεται διαδοχικά ή ταυτόχρονα (σε ένα πολυκαναλικό tere σορβιτάνη) έρευνα membrannosvyazannyh φάσμα αντιγόνων, στην οποία η GSK φαινότυπο CD34 + CD38 θα πρέπει να συνδυάζεται με την έλλειψη δεικτών διαφοροποίησης γραμμική, ιδιαίτερα αντιγόνα των ανοσοϊκανά κύτταρα όπως CD4, και επιφάνεια ανοσοσφαιρίνες γλυκοφορίνη.

Πρακτικά όλα τα σχήματα φαινοτυπίας αιματοποιητικών βλαστικών κυττάρων περιλαμβάνουν τον προσδιορισμό του αντιγόνου CD34. Αυτή η γλυκοπρωτεΐνη με μοριακό βάρος περίπου 110 kDa, που μεταφέρουν διάφορες θέσεις γλυκοζυλίωσης εκφράζεται στην κυτταρική μεμβράνη του πλάσματος μετά την ενεργοποίηση του γονιδίου εντοπίζεται στο χρωμόσωμα 1. Η λειτουργία του μορίου CD34 συνδέεται με την αλληλεπίδραση των πρώιμων αιμοποιητικών προδρόμων κυττάρων με την στρωματική βάση του μυελού των οστών. Ωστόσο, θα πρέπει να υπενθυμίσουμε ότι η παρουσία του αντιγόνου CD34 επί της κυτταρικής επιφάνειας επιτρέπει μόνο να κάνει μια προκαταρκτική αξιολόγηση του περιεχομένου της GSK στο κυτταρικό εναιώρημα, όπως αυτή εκφράζεται, και άλλα αιμοποιητικά προγονικά κύτταρα και στρωματικά κύτταρα του μυελού των οστών και των ενδοθηλιακών κυττάρων.

Κατά τη διάρκεια της διαφοροποίησης αιμοποιητικών προγονικών κυττάρων, η έκφραση CD34 μειώνεται μόνιμα. Ερυθροκύτταρα, κοκκιοκύτταρα και μονοκύτταρα προγονικά κύτταρα είτε εκφράζουν ασθενώς το CD34 αντιγόνο, είτε απουσιάζουν στην επιφάνεια τους καθόλου (φαινότυπο CD34). Στην επιφανειακή μεμβράνη διαφοροποιημένων κυττάρων του μυελού των οστών και των ώριμων κυττάρων του αίματος, το αντιγόνο CD34 δεν ανιχνεύεται.

Θα πρέπει να σημειωθεί ότι όχι μόνο στη δυναμική της διαφοροποίησης των αιμοποιητικών προγονικών κυττάρων μειώνει το επίπεδο έκφρασης της CD34, αλλά παράλληλα προοδευτικά αυξημένη έκφραση του αντιγόνου CD38 - αναπόσπαστο μεμβρανική γλυκοπρωτεΐνη με μοριακό βάρος 46 kDa που έχει NAD-glikogidrolaznoy και δραστικότητα κυκλάσης ADP-ριβοζυλ, υποδεικνύοντας εμπλοκή της στη μεταφορά και σύνθεση ADP-ριβόζης. Έτσι, είναι δυνατόν σε διπλό έλεγχο του βαθμού δέσμευσης των αιμοποιητικών προγονικών κυττάρων. Πληθυσμός των κυττάρων με τον φαινότυπο CD34 + CD38 +, από κύτταρα του μυελού των οστών CD34-θετικά 90 έως 99% περιλαμβάνει τα προγονικά κύτταρα με περιορισμένη πολλαπλασιαστικό δυναμικό και διαφοροποίηση, ενώ με τον φαινότυπο κυττάρων CD34 + CD38 μπορεί να διεκδικήσει το ρόλο της GSK.

Πράγματι, ο πληθυσμός των κυττάρων του μυελού των οστών, που περιγράφεται από τον τύπο CD34 + CD38-, περιέχει ένα σχετικά μεγάλο αριθμό των πρωτόγονων αρχέγονων κυττάρων ικανών να διαφοροποιούνται σε μυελοειδή και λεμφοειδή γραμμές. Στο πλαίσιο της μακροχρόνιας καλλιέργειας με την φαινότυπο των κυττάρων CD34 + CD38- καταφέρνουν να πάρει όλα τα ώριμα κύτταρα του αίματος: ουδετερόφιλα, ηωσινόφιλα, βασεόφιλα, μονοκύτταρα, μεγακαρυοκύτταρα, ερυθροκύτταρα και λεμφοκύτταρα.

Σχετικά πρόσφατα διαπίστωσε ότι CD34-θετικά κύτταρα εκφράζουν δύο περισσότερα δείκτη - AC133 και CD90 (Thy-1), τα οποία χρησιμοποιούνται επίσης για την ταυτοποίηση αιματοποιητικά βλαστικά κύτταρα. αντιγόνο Thy-1 είναι συν-εκφράζεται με τον υποδοχέα CD117 (c-kit) για CD34 + κύτταρα του μυελού των οστών, μυελό και το περιφερικό αίμα. Αυτό fosfatidilinozitolsvyazyvayuschy επιφάνεια γλυκοπρωτεΐνη με ένα μοριακό βάρος των 25-35 kDa η οποία εμπλέκεται σε διεργασίες κυτταρικής προσκόλλησης. Μερικοί συγγραφείς πιστεύουν ότι το αντιγόνο Thy-1 είναι ο δείκτης των πιο ανώριμων CD34-θετικών κυττάρων. Αντιγραφόμενα κύτταρα με το φαινότυπο των CD34 + Thy-1 + να προκαλέσει μακροπρόθεσμες καλλιεργημένων γραμμών για να σχηματίσουν θυγατρικά κύτταρα. Προτείνεται ότι το αντιγόνο Thy-1 αποκλείει τα ρυθμιστικά σήματα που προκαλούν τη διακοπή της κυτταρικής διαίρεσης. Παρά το γεγονός ότι τα κύτταρα CD34 + TU1 + είναι ικανά να αυτο-ανανέωση και τη δημιουργία μακροπρόθεσμης καλλιεργημένων γραμμών, φαινότυπος τους δεν μπορούν να αφορούν αποκλειστικά τη HSC, όπως Thy-1 + περιεχόμενο στο συνολικό βάρος των στοιχείων κυττάρων CD34-θετικού είναι περίπου 50%, υπερβαίνοντας κατά πολύ το τον αριθμό των αιματοποιητικών κυττάρων.

Περισσότερο ελπιδοφόρα για την ταυτοποίηση των αιμοποιητικών βλαστοκυττάρων είναι το AC133, ένας δείκτης αντιγόνου αιματοποιητικών προγονικών κυττάρων, η έκφραση των οποίων ανιχνεύθηκε αρχικά σε εμβρυϊκά ηπατικά κύτταρα. Το AC133 είναι μια διαμεμβρανική γλυκοπρωτεΐνη που εμφανίζεται στην επιφάνεια της κυτταρικής μεμβράνης στα πρώτα στάδια της ωρίμανσης της GSK - είναι πιθανό ότι ακόμη και νωρίτερα από το αντιγόνο CD34. Στις μελέτες των Α. Petrenko και V. Grishchenko (2003), βρέθηκε ότι το AC133 εκφράζει μέχρι και 30% των CD34-θετικών κυττάρων του εμβρυϊκού ήπατος.

Έτσι, το ιδανικό προφίλ φαινοτυπική των αιμοποιητικών βλαστικών κυττάρων από έννοιες σήμερα, το άθροισμα των κυττάρων περιγράμματος, στα κυκλώματα που πρέπει να είναι παρόντες CD34 αντιγόνα διαμόρφωση, AC133 και Thy-1, αλλά δεν υπάρχει θέση για προβολές CD38 μοριακό, HLA-DR και δείκτες γραμμική διαφοροποίηση ΣΔΣ , CD3, CD4, CD8, CD10, CD14, CD16, CD19, CD20.

GSK πορτρέτο διακύμανση φαινοτυπικής μπορεί να είναι ένας συνδυασμός των CD34 + CD45RalowCD71low, δεδομένου ότι οι ιδιότητες των κυττάρων που περιγράφονται από τον τύπο αυτό δεν διαφέρουν από τις λειτουργικές παραμέτρους των κυττάρων με τον φαινότυπο CD34 + CD38. Επιπλέον, τα ανθρώπινα HSC μπορούν να ταυτοποιηθούν με φαινοτυπική σημάδια CD34 + Thy-l + CD38Iow / «c-kit / χαμηλή - μόνο 30 από αυτά τα κύτταρα να αποκαταστήσει πλήρως την αιμοποίηση σε θανάσιμα ακτινοβοληθέντες ποντικούς.

Από την ανάλυση των γενικών φαινοτυπικά χαρακτηριστικά των κυττάρων του μυελού των οστών που ξεκίνησε στην πραγματικότητα 40 χρόνια εντατικής έρευνας GSK ταυτόχρονα ικανό τόσο αυτο-ανανέωσης και διαφοροποίησης σε άλλα κυτταρικά στοιχεία, επιτρέποντας να δικαιολογήσει τη χρήση της μεταμόσχευσης μυελού των οστών για τη θεραπεία διαφόρων παθολογιών του αιμοποιητικού συστήματος. Πρόσφατα ανακαλυφθέντα νέα είδη βλαστικών κυττάρων δεν έχουν χρησιμοποιηθεί ευρέως στην κλινική πρακτική. Ωστόσο, τα βλαστικά κύτταρα από τον ομφάλιο λώρο (λώρου) στο αίμα και εμβρυϊκό ήπαρ μπορεί να επεκτείνει σημαντικά τη μεταμόσχευση κυττάρων όχι μόνο στην αιματολογία, αλλά και σε άλλους τομείς της ιατρικής, όπως διαφορετικό από HSC του μυελού των οστών ως ποσοτική απόδοση και ποιοτικά χαρακτηριστικά.

Μετατόπιση κυτταρική μάζα αιμοποιητικών βλαστικών αναγκαία για μεταμόσχευση λαμβάνονται γενικά από το μυελό των οστών, το περιφερικό και το καλώδιο του αίματος, καθώς και εμβρυϊκών ήπατος. Επιπλέον, αιμοποιητικά προγονικά κύτταρα μπορούν να ληφθούν με in vitro πολλαπλασιασμό των ESC και την επακόλουθη διαφοροποίηση τους σε αιμοποιητικά στοχευμένες κυτταρικών στοιχείων. Α Petrenko, Β Grishchenko (2003) πολύ σωστά επισημαίνουν σημαντικές διαφορές ανοσολογικές ιδιότητες και την ικανότητα να αποκαταστήσει την αιμοποίηση GSK διαφορετικής προέλευσης, λόγω της άνισης λόγος που περιέχονται στις πηγές τους πολυδύναμων νωρίς και αργότερα δεσμευτεί προγόνους. Επιπλέον, αιμοποιητικά βλαστικά κύτταρα, που προέρχονται από διάφορες πηγές βλαστικών, χαρακτηριζόμενη από ποσοτική και ποιοτική πολύ διαφορετικές ενώσεις μη-αιμοποιητικών κυττάρων.

Μια παραδοσιακή πηγή αιμοποιητικών βλαστοκυττάρων είναι ο μυελός των οστών. Ένα εναιώρημα κυττάρων μυελού των οστών λαμβάνεται από το κοιλιακό οστό ή το στέρνο με έκπλυση υπό τοπική αναισθησία. Το ούτως λαμβανόμενο εναιώρημα είναι ετερογενές και περιέχει ένα μείγμα HSC, στοιχεία στρωματικών κυττάρων, δεσμευμένα προγονικά κύτταρα των μυελοειδών και λεμφοειδών γραμμών, καθώς και ώριμα στοιχεία αίματος. Ο αριθμός των κυττάρων με τους φαινοτύπους CD34 + και CD34 + CD38 μεταξύ μονοπύρηνων κυττάρων μυελού των οστών είναι 0,5 έως 3,6 και 0 έως 0,5%, αντίστοιχα. Το περιφερικό αίμα μετά την επαγόμενη από G-CSF κινητοποίηση του HSC περιέχει 0,4-1,6% CD34 + και 0-0,4% CD34 + CD38.

Ένα υψηλότερο ποσοστό των κυττάρων με CD34 + CD38 ανοσοφαινότυπο και αίματος CD34 + μυελού - και 0-0,6 OD-2.6%, και το μέγιστο αριθμό τους ανιχνεύεται μεταξύ αιματοποιητικών κυττάρων εμβρυϊκού ήπατος - και 2,3 0,2-12,5 -35,8%, αντίστοιχα.

Ωστόσο, η ποιότητα του υλικού μοσχεύματος εξαρτάται όχι μόνο από την ποσότητα που περιέχεται σ 'αυτό των CD34 + κυττάρων, αλλά και στην λειτουργική δραστηριότητα τους, η οποία μπορεί να εκτιμηθεί από το επίπεδο του σχηματισμού αποικίας ίη νίνο (ανασύσταση του πληθυσμού μυελού σε θανάσιμα ακτινοβολημένα ζώα) και in vitro - της ανάπτυξης των αποικιών σε ημιστερεό μέσο . Διαπιστώθηκε ότι η αποικία σχηματισμού και πολλαπλασιαστική δραστηριότητα των αιμοποιητικών προγονικών κυττάρων με τον φαινότυπο CD34 + CD38 HLA-DR, που απομονώθηκε από εμβρυϊκό ήπαρ, εμβρυϊκό μυελό των οστών και αίματος ομφάλιου λώρου, και υπερβαίνει κατά πολύ την πολλαπλασιαστική ικανότητα των αιμοποιητικών σχηματισμού αποικιών κυττάρων του μυελού των οστών και το περιφερικό αίμα ενός ενήλικα. Ποσοτική και ποιοτική ανάλυση των GSK διαφορετικής προέλευσης απεκάλυψε σημαντικές διαφορές της σχετικής περιεκτικότητας τους στο κυτταρικό εναιώρημα, και τη λειτουργικότητα. Ο μέγιστος αριθμός των CD34 + κυττάρων (24,6%) που παρατηρήθηκαν σε υλικά μοσχεύματος που προέρχονται από εμβρυϊκό μυελό των οστών. Ο μυελός των οστών ενός ενήλικου ανθρώπου περιέχει 2,1% των κυττάρων θετικών για το CD34. Μεταξύ των μονοπύρηνων κυττάρων του περιφερικού αίματος ενήλικα ανθρώπου μόνο 0,5% έχουν ένα φαινότυπο CD34 +, ενώ το αίμα λώρου ποσό τους φθάνει το 2%. Έτσι ικανότητα σχηματισμού των CD34 + κυττάρων από εμβρυϊκό μυελό των οστών κατά 2,7 φορές αποικιών υπερβαίνει την ικανότητα των κλωνική ανάπτυξη των αιμοποιητικών μυελού των οστών των ενήλικων ανθρώπινων κυττάρων και κυττάρων αίματος ομφάλιου λώρου σχηματίζουν σημαντικά μεγαλύτερες αποικίες από αιματοποιητικά στοιχεία απομονώθηκαν από περιφερικό αίμα ενηλίκων: 65,5 έως 40 και , 8 αποικίες / 105 κύτταρα, αντίστοιχα.

Οι διαφορές στην πολλαπλασιαστική δραστηριότητα και την ικανότητα σχηματισμού αποικιών των αιμοποιητικών αρχέγονων κυττάρων που συνδέεται όχι μόνο με ποικίλους βαθμούς ωριμότητας, αλλά και με το φυσικό τους μικροπεριβάλλον. Είναι γνωστό ότι η ένταση του πολλαπλασιασμού και της διαφοροποίησης των βλαστοκυττάρων ταχύτητα που καθορίζεται από το ολοκλήρωμα ρυθμιστική επίδραση των πολλών συστατικών του συστήματος από αυξητικούς παράγοντες και κυτοκίνες που παράγονται από αμφότερα τα βλαστικά κύτταρα και τα κυτταρικά στοιχεία του matrix-στρωματικών μικροπεριβάλλον. Χρησιμοποιώντας τα καθαρισμένα κυτταρικούς πληθυσμούς και μέσα απαλλαγμένα ορού με σκοπό την κυτταρικής καλλιέργειας δίνοντας χαρακτηρίζεται από αυξητικούς παράγοντες οι οποίοι έχουν μία διεγερτική και ανασταλτικά αποτελέσματα για τα βλαστικά κύτταρα των διαφόρων επιπέδων, προγονικά κύτταρα και τα κύτταρα των δεσμευτεί σε μια συγκεκριμένη γραμμική κατεύθυνση. Τα αποτελέσματα αυτών των μελετών αποδεικνύουν ότι HSCs που προέρχονται από πηγές με διαφορετικά επίπεδα οντογενετικής ανάπτυξης, διαφέρουν τόσο φαινοτυπικά και λειτουργικά. Για την GSK, παραμένοντας σε προγενέστερα στάδια οντογένεσης, που χαρακτηρίζεται από υψηλό δυναμικό για αυτο-αναπαραγωγή και υψηλή πολλαπλασιαστική δραστηριότητα. Αυτά τα κύτταρα διακρίνονται από ένα μεγαλύτερο μήκος τελομερούς και υποβάλλονται σε δέσμευση με το σχηματισμό όλων των αιματοποιητικών κυτταρικών σειρών. Η αντίδραση του ανοσοποιητικού συστήματος να GSK καθυστερημένη εμβρυϊκής προέλευσης, δεδομένου ότι αυτά τα κύτταρα εκφράζουν ασθενώς μόριο HLA. Υπάρχει σαφής διαβάθμιση της σχετικής περιεκτικότητας των HSCs και την ικανότητά τους να αυτο-ανανέωση και ο αριθμός των γραμμών που σχηματίζουν τύπους δέσμευσης: CD34 + κύτταρα εμβρυϊκού ήπατος> CD34 + κύτταρα του αίματος του ομφάλιου λώρου> CD34 + κύτταρα του μυελού των οστών. Είναι σημαντικό ότι αυτές οι διαφορές δεν είναι μοναδικές για ενδο και neo postanatalnomu πρώιμη περίοδο της ανθρώπινης ανάπτυξης, αλλά και σε ολόκληρη την οντογένεση - πολλαπλασιαστικών και δραστηριότητα σχηματισμού αποικιών των HSCs που προέρχονται από μυελό των οστών ή περιφερικό αίμα ενός ενήλικα, αντιστρόφως ανάλογη με την ηλικία του δότη.