Διάγνωση του έρπητα

Η διάγνωση του έρπητα βασίζεται στην συμπεριφορά του κλασικού ιικής αποβολής σε καλλιέργειες ευαίσθητες κυτταρικές, ανοσοφθορισμό και ορολογικές μεθόδους, διενέργεια κολποσκοπική μελέτες χρησιμοποιώντας σύγχρονες μοριακές-βιολογικές μεθόδους (PCR, dot-υβριδισμού), η οποία επιτρέπει να διαγνώσει όλη την ομάδα του ιού του έρπητα, συμπεριλαμβανομένων των HHV-6 και HHV-7 τύπους.

Μέθοδοι εργαστηριακής διάγνωσης ερπητικής μόλυνσης

Οι κύριες μέθοδοι που αποσκοπούν στην έκκριση του HSV ή στην ανίχνευση ιικών σωματιδίων ή / και των συστατικών τους	Βοηθητικές μέθοδοι με στόχο την ανίχνευση αντισωμάτων στον HSV σε βιολογικά υγρά του ανθρώπινου σώματος
Απομόνωση του HSV σε ευαίσθητες καλλιέργειες κυττάρων και ζώων Άμεση και ανοσοποιητική ηλεκτρονική μικροσκοπία Άμεσες και έμμεσες επιλογές ΜΧΣ IFA Μοριακές βιολογικές μέθοδοι Αντίδραση συγκόλλησης λατέξ	Αντίδραση εξουδετέρωσης RSK Προσδιορισμός αντισωμάτων σε μη δομικές πρωτεΐνες του HSV-1,2

Αποδεικνύεται ότι το 76% των ασθενών έχουν έρπητα των γεννητικών οργάνων (GH) που προκαλούνται από HSV-2, και σε τύπο 24% - HSV-1. Και η GG ως μονοένωση εμφανίστηκε μόνο στο 22% των ασθενών, σε 78% των περιπτώσεων ανιχνεύθηκαν μικροβιακές ενώσεις. Στο 46% των ασθενών, ανιχνεύθηκε παρασιτοκοκκύση που προκλήθηκε από δύο παθογόνα, συμπεριλαμβανομένων των χλαμυδιών που ανιχνεύθηκαν σε 40% των περιπτώσεων. Λιγότερο συχνά στα επιχρίσματα προσδιορίζεται gardnerelly, Trichomonas, gonococci.

Στο 27% των ασθενών, η παρασιτοκοκκίαση αντιπροσωπεύεται από τρεις και το 5,2% από τέσσερα παθογόνα. Και συχνότερα υπήρχε ένας συνδυασμός χλαμυδίων με τους μύκητες Gardnerella και Candida. Αυτά τα δεδομένα δικαιολογούν την ανάγκη για μια λεπτομερή βακτηριολογική εξέταση των ασθενών ΥΥ να προσδιορίσει τους συνδυασμούς παθογόνο παράγοντα, καθώς και σε βάθος μελέτη της παθογένεσης των μικτών μολύνσεων της ουρογεννητικής οδού, η οποία θα επέτρεπε μια διαφοροποιημένη συγκρότημα θεραπεία της λοίμωξης από HSV.

Υλικά που πρέπει να μελετηθούν για την απομόνωση του HSV ανάλογα με τον εντοπισμό των ερπητικών αλλοιώσεων

Εντοπισμός των βλαβών	Περιεχόμενο κυψελίδων	Κυτταρική απόξεση				SDC	Αναρροφήστε από τους βρόγχους	Bioptat	Αίμα
		1	2	3	4
Δέρμα	+								+
Μάτια			+						+
Τα γεννητικά όργανα				+					+
Anus	+				+				+
Στόμα	+	+							+
CNS	+					+		+	+
Ελαφρύ		+					+		+
Το ήπαρ								+	+
Συγγενής έρπης	+	+	+				+		+

Μέθοδοι εργαστηριακής διάγνωσης μόλυνσης από κυτταρομεγαλοϊό

Μέθοδοι	Χρόνος που απαιτείται για την επίτευξη αποτελεσμάτων	Σημειώσεις
ΒΙΡΟΥΣΟΛΟΓΙΚΑ
Ηλεκτρονική μικροσκοπία	3 ώρες	Πέταγμα
Η απομόνωση του ιού στην κυτταρική καλλιέργεια (CPD)	4-20 ημέρες	Τυπική, αργή
Ανοσοφθορίζουσα κηλίδωση πρώιμου ΑΗ με μονοκλωνικά αντισώματα	6 ώρες	Λιγότερο συγκεκριμένες
ΚΥΤΟΛΟΓΙΚΑ	2-3 ώρες	Λιγότερο συγκεκριμένες
SEOLOGICAL
RSK	2 ημέρες	Standart
Ssubsistence	1 ημέρα	Εργαζόμαστε
REEF	6 ώρες	Απλή, συγκεκριμένη
NFIF	6 ώρες	Συμπληρωμένο
RIMF	6 ώρες	Συμπληρωμένο
IFA (IgM, TO)	6 ώρες	Γρήγορα, απλά
Immunoblot	6 ώρες	Ακριβά
ΜΟΡΙΑΚΗ-ΒΙΟΛΟΓΙΚΗ
MG	5-7 ημέρες	Κόστος, χρονοβόρος
PCR	3 ώρες	Ακριβά

Μέθοδοι διάγνωσης του ιού έρπητα ζωστήρα

Διαγνωστικές μέθοδοι	Εργαστηριακές τεχνικές
ΕΜΜΕΣΕΣ
Κατανομή	Καλλιέργεια υφασμάτων, έμβρυα κοτόπουλου, εργαστηριακά ζώα, συν-καλλιέργεια με επιτρεπτά κύτταρα ή βοηθητικούς ιούς
Ταυτοποίηση των απομονώσεων	Αντίδραση εξουδετέρωσης, DSC, IF, IPPE, αντίδραση απομονωθέντων ιζημάτων, συγκόλληση, IF
Απευθείας
Κυτταρολογία	Σμέουρα: ανοσοφθορισμός χρώματος
ιστολογία	Παθομορφολογία του κυττάρου
Δομή	Εμβρυονική μικροσκοπία, ανοσοηλεκτρονική μικροσκοπία
Προσδιορισμός αντιγόνων	IF, PIÉF, RIM, IFA
Προσδιορισμός τοπικής παραγωγής αντισωμάτων	IgM, IgG, IgA: IFA, RIA
Μοριακές βιολογικές προσεγγίσεις	Μοριακός υβριδισμός, PCR

Εργαστηριακή διάγνωση λοίμωξης που προκαλείται από τον ιό του έρπητα ζωστήρα

Διαγνωστικά προβλήματα	Μέθοδοι	Αναμενόμενα αποτελέσματα
Οξεία πρωτογενής λοίμωξη	1	Ανίχνευση μετά από 2 ώρες
	2	Το επίπεδο των αντισωμάτων αυξάνεται αργά
	3	Παρουσιάστε 3 ημέρες μετά τη μόλυνση
Οξεία επανενεργοποιημένη μόλυνση	1	Ανίχνευση ULV σε 2 ώρες
	2	Το επίπεδο των αντισωμάτων αυξάνεται αργά
	4	Παρουσιάστε 4 ημέρες μετά την εμφάνιση των εξανθημάτων

1. τον προσδιορισμό στο υγρό των κυστιδίων του WIEF.
2. ορολογία: DSC, ELISA, με στόχο τον εντοπισμό
3. ορολογία: ELISA, με στόχο την ανίχνευση IgM.
4. ορολογία: ELISA, με στόχο την ανίχνευση IgA, IgM.

Μέθοδοι για την ένδειξη της ανοσολογικής απόκρισης μιας μόλυνσης λόγω του ιού του έρπητα ζωστήρα

Προσέγγιση	Μέθοδος
Ανίχνευση αυξημένου τίτλου αντισώματος στον δεύτερο ορό	RSK, RTGA, RPGA, αντίδραση εξουδετέρωσης IF, RIM, ELISA
Ανίχνευση IgG, IgA κατηγορίας ειδικών αντισωμάτων στο πρώτο δείγμα ορού	IFA, IF, RIM, συγκόλληση λατέξ

Ερμηνεία των αποτελεσμάτων της ορολογικής εξέτασης των ορών ασθενών σε λοιμώξεις από έρπητα έρπητα (ELISA)

Όνομα λοίμωξης / δείκτη	Μέση όρια για λοιμώξεις
	Αποτελέσματα ανάλυσης	Ερμηνεία
Κυτταρομεγαλία αντι-CMV IgG (1-20 E / ml) IgM αντι-CMV (100-300%)	Θετικό 1-6 Θετικό 6-10 Θετικό> 10 Αρνητικό Θετικό 100-300 Αρνητικό <90 Αμφίβολο 90-100	Μείωση Επιδείνωση της νόσου Οξεία φάση της νόσου Καμία λοίμωξη (ασθένεια) Οξεία φάση της νόσου Επαναλάβετε την ανάλυση μετά από 2-3 εβδομάδες
Έρπης απλοί 1,2 ορότυποι Αντι-HSV 1/2 σύνολο. (100-900%)	Θετικό 100-400 Θετικό 400-800 Θετικό> 800 Αρνητικό <100	Μείωση Επιδείνωση της νόσου Οξεία φάση της νόσου Καμία λοίμωξη (ασθένεια)

Ο πίνακας παρουσιάζει τις κύριες μεθόδους εργαστηριακής διάγνωσης λοιμώξεων από έρπητα, καθώς και τα συνιστώμενα βιολογικά υλικά που εξετάζονται για την απομόνωση του HSV, λαμβάνοντας υπόψη τον εντοπισμό ερπητικών αλλοιώσεων

Αξιόπιστη είναι η κατανομή του απλού έρπητα και του CMV μέσω της μόλυνσης των ευαίσθητων κυτταρικών καλλιεργειών. Έτσι, σε ιολογική εξέταση 26 ασθενών στην περίοδο υποτροπής, ο HSV απομονώθηκε σε ευαίσθητη κυτταροκαλλιέργεια Vero σε 23 περιπτώσεις (88,4%). Σε μολυσμένες καλλιέργειες, παρατηρήθηκε ένα πρότυπο κυτταροπαθητικής δράσης χαρακτηριστικής του HSV - ο σχηματισμός πολυπυρηνικών γιγαντιαίων κυττάρων ή η συσσώρευση στρογγυλεμένων και διευρυμένων κυττάρων με τη μορφή τσαμπιών. Σε 52,1% των περιπτώσεων, ήταν δυνατό να ανιχνευθούν εστίες της κυτταροπαθητικής επίδρασης του ιού κατά 16-24 ώρες μετά τη μόλυνση. Με 48-72 ώρες επώασης μολυσμένων καλλιεργειών, το ποσοστό των υλικών που προκαλούν ειδική καταστροφή των κυττάρων αυξήθηκε σε 87%. Και μόνο στο 13% των περιπτώσεων, τα θετικά αποτελέσματα ανιχνεύθηκαν 96 ώρες μετά τη μόλυνση και περισσότερο ή με επαναλαμβανόμενη διέλευση.

Μέθοδοι εργαστηριακής διάγνωσης γενικευμένης ερπητικής λοίμωξης

Οι κύριες μέθοδοι που αποσκοπούν στην ανίχνευση (απομόνωση) των ιού του έρπητα, των σωματιδίων τους και των συστατικών τους	Βοηθητικές μέθοδοι με στόχο την ανίχνευση αντισωμάτων ιού έρπητα σε βιολογικά υγρά, ανίχνευση ενζυματικών μετατοπίσεων στον ορό του αίματος
Απομόνωση του ιού έρπητα σε ευαίσθητες κυτταρικές καλλιέργειες και ζωικά μικροσκοπία Direct και το ανοσοποιητικό ηλεκτρονίων Μέθοδος άμεσης και έμμεσης ανοσοϋπεροξειδάσης πραγματοποιήσεις Άμεση και έμμεση επιλογές τεχνική φθορίζοντος αντισώματος επιλογές ELISA Ενσωματώσεις της μοριακής (DNA-DNA) υβριδοποίηση Αλυσωτή αντίδραση πολυμεράσης συγκόλληση latex Αντίδραση	Εξουδετέρωση συμπληρώματος αντίδραση στερεώσεως αντίδραση συγκόλλησης λατέξ Έμμεση φθορισμού μέθοδο αντισώματος πραγματοποίηση Έμμεση μέθοδος ανοσοϋπεροξειδάσης παραλλαγή Ενσωματώσεις ELISA Μέθοδος ανοσολογικής στύπωσης ακτινική στερέωση της Μεθόδου συμπληρώματος Προσδιορισμός των επιπέδων αλανίνης και ασπαρτική

Για τη διάγνωση μολυσματικής μονοπυρήνωσης (μόλυνση που προκαλείται από VEB), χρησιμοποιούνται ορολογικές μέθοδοι. Αντίδραση Paul-Bunnelya με ερυθροκύτταρα προβάτου, ο τίτλος του 1:28, Diagnostic and παραπάνω για ένα μόνο ορό μελέτη, ή 4-πλάσια αύξηση αντισώματος κατά την εξέταση ζεύγη ορούς. Χρησιμοποιήστε την αντίδραση Goff-Bauer με ένα εναιώρημα 4% τυποποιημένων ερυθρών αιμοσφαιρίων του αλόγου. Το αποτέλεσμα λαμβάνεται υπόψη μετά από 2 λεπτά, με μολυσματική μονοπυρήνωση η αντίδραση είναι ιδιαίτερα συγκεκριμένη.

Επί του παρόντος, αναπτύσσεται ένας ενζυμικός ανοσοπροσδιορισμός (ELISA) για τη διάγνωση μολυσματικής μονοπυρήνωσης. Στην περίπτωση αυτή, προσδιορίζονται αντισώματα IgG και IgM στον ορό του ασθενούς με επώαση αυτού με λεμφοβλάστες μολυσμένους με EBV, ακολουθούμενη από θεραπεία με φθορίζοντα αντισώματα. Στην οξεία περίοδο της ασθένειας, προσδιορίζονται αντισώματα κατά του ιικού καψιδικού αντιγόνου σε τίτλο 1: 160 και άνω.

Όταν χρησιμοποιείται ένα αριθμό εισαγόμενων εμπορικών συστημάτων δοκιμής σε IFA μπορεί να προσδιορίσει: αντισώματα προς μυρμήγκι αντισώματα φακέλου Egan ΕΒν σε πρώιμο αντιγόνο ΕΒν, συνολικής αντισώματος σε ένα πρώιμο αντιγόνο ΕΒν, προσδιορίζεται στην οξεία φάση της ασθένειας και στον πυρήνα και στο κυτταρόπλασμα, και η περιορισμένη αντίσωμα EBV νωρίς, προσδιορίζεται στην οξεία φάση της ασθένειας και στον πυρήνα και στο κυτταρόπλασμα των κυττάρων, που οριοθετούνται αντισώματα σε EBV πρώιμου αντιγόνου, που προσδιορίζεται στη μέση της νόσου μόνο στο κυτταρόπλασμα των κυττάρων, και αντισώματα προς πυρηνικού αντιγόνου ΕΒν. Χρησιμοποιώντας αυτά τα συστήματα δοκιμής επιτρέπει τη διαφορική διάγνωση ενός αριθμού ασθενειών που σχετίζονται με EBV.

Μετά θετική ELISA για τον εντοπισμό των αντισωμάτων EBV δώσει ανοσοκηλίδος επιβεβαιώνοντας απόκριση, οι οποίοι ανιχνεύουν την παρουσία αντισωμάτων για το διαχωρισμό πρωτεϊνών-δεικτών ΕΒν (ρ-πρωτεΐνες): Ρ23, Ρ54, ρ72 (η παρουσία της πρωτεΐνης υποδηλώνει την πιθανότητα αναπαραγωγής EBV), σελ 138. Said οι παραπάνω εργαστηριακές μέθοδοι χρησιμοποιούνται για τον έλεγχο της αποτελεσματικότητας της θεραπείας.

Η ευαισθησία των ιολογικών μεθόδων είναι 85-100%, η ειδικότητα είναι 100%, ο χρόνος μελέτης είναι 2-5 ημέρες. Συχνά στην πράξη, χρησιμοποιείται η μέθοδος άμεσου ανοσοφθορισμού (PIF) με πολυκλωνικά ή μονοκλωνικά αντισώματα εναντίον HSV-1 και HSV-2. μέθοδος PIF είναι αρκετά εύκολο να αναπαραχθούν στη ρουτίνα κλινικό εργαστήριο, δεν είναι ακριβό, μεγαλύτερη ευαισθησία 80%, ειδικότητα 90-95%. Με ανοσοφθορισμού μικροσκοπία αποκάλυψε την παρουσία κυτταροπλασματικά έγκλειστα, μορφολογικά χαρακτηριστικά, το ποσοστό των μολυσμένων κυττάρων στα επιχρίσματα, ξύνει ουρήθρας, τραχηλικού διαύλου, του τραχήλου, του ορθού.

Η μέθοδος UIF δίνει μια ιδέα των μορφολογικών ιδιοτήτων των κυττάρων και των αλλαγών στον εντοπισμό των αντιγόνων HSV. Εκτός από τις άμεσες ενδείξεις κυτταρικής βλάβης από ιούς έρπητα (ανίχνευση ειδικής φωταύγειας), υπάρχουν έμμεσες ενδείξεις ερπητικής μόλυνσης σύμφωνα με τα δεδομένα UIF:

• συσσωμάτωση της πυρηνικής ύλης, απολέπιση του καρυόλακμα,
• παρουσία των λεγόμενων. πυρήνες "τρύπες", όταν μόνο ένα καρυόλεμμα παραμένει από τον πυρήνα του κυττάρου.
• την παρουσία ενδοπυρηνικών εγκλεισμάτων - του μόσχου του Caudry.

Κατά τη ρύθμιση του UIF γιατρός λαμβάνει όχι μόνο την ποιότητα, αλλά και μια ποσοτική αξιολόγηση των μολυσμένων κυττάρων που έχουν χρησιμοποιηθεί για την αξιολόγηση της αποτελεσματικότητας της αντι-ιικής θεραπείας με ακυκλοβίρη (AC). Έτσι, 80 ασθενείς με απλό έρπη των γεννητικών οργάνων (GG) εξετάστηκαν με τη μέθοδο UIF σε δυναμική. Έχει αποδειχθεί ότι αν, πριν από τη θεραπεία με ακυκλοβίρη σε επιχρίσματα 88% των ασθενών είχαν ένα υψηλό ποσοστό των μολυσμένων κυττάρων (50-75% και άνω), μετά από μία πορεία της ακυκλοβίρης σε επιχρίσματα 44% των ασθενών με υγιή κύτταρα ανιχνεύθηκαν σε 31% των περιπτώσεων σημειώνονται μεμονωμένα μολυσμένα κύτταρα και Το 25% των ασθενών είχε έως και 10% των μολυσμένων κυττάρων.

Το περιεχόμενο των μολυσμένων κυττάρων σε επιχρίσματα (αντίδραση PIF) ασθενών με έρπη των γεννητικών οργάνων, που έλαβαν ακυκλοβίρη

Περίοδοι ασθένειας	Ποσοστό σε επιχρίσματα
	μολυσμένα κύτταρα					κανονικά κύτταρα
	Περισσότερο από το 75%	50-75%	40-50%	10%	Ενιαία κύτταρα σε n / sp
Υποτροπή (πριν από τη θεραπεία)	25%	63%	12%
	(20)	(50)	(10)
Μείωση (μετά από θεραπεία)				25%	31%	44%
				(20)	(25)	(35)

Χρησιμοποιώντας πολλά χρόνια αμοιβαίων κεφαλαίων και τη μέθοδο της dot-υβριδισμού παρατηρήθηκε σχεδόν το 100% της συμφωνίας μεταξύ των αποτελεσμάτων της μελέτης. Θα πρέπει να σημειωθεί ότι, προκειμένου να αυξηθεί η αξιοπιστία της διάγνωσης της GH, ιδιαίτερα σε περιπτώσεις όπου υπάρχει υποκλινική και malomanifestnyh μορφές έρπητα, συνιστάται η χρήση της μεθόδου της εργαστηριακής διάγνωσης 2-3, ιδιαίτερα κατά την εξέταση έγκυες γυναίκες, γυναίκες με μαιευτική ιστορία μειονεκτική θέση, τα άτομα με απροσδιόριστη γυναικολογικές διάγνωση.

Έτσι, για PCR διάγνωση των ιικών και βακτηριακών μολύνσεων της ουρογεννητικής οδού είναι αναγκαίο να αξιολογηθούν τα θετικά αποτελέσματα που λαμβάνονται με την ιστορία, την παρουσία (ή απουσία) συγκεκριμένων κλινικών συμπτωμάτων. Αν ανιχνευθεί με PCR η χλαμύδια, τότε σε αυτή την περίπτωση είναι δυνατόν να μιλήσουμε για λοίμωξη και να λύσουμε ανάλογα τα προβλήματα της θεραπείας. Σε περίπτωση ανίχνευσης μυκοπλασμάτων (ureaplasmas) είναι ευκαιριακά παθογόνα, για να επιβεβαιωθεί η διάγνωση είναι απαραίτητη για τη διεξαγωγή καλλιέργειας περαιτέρω μελέτες, t. Ε Crop υλικό από έναν ασθενή ευαίσθητο σε κυτταρικές καλλιέργειες. Μόνο όταν αποκτώνται θετικά αποτελέσματα στην ανάλυση καλλιέργειας, μπορούμε να μιλήσουμε για εργαστηριακή επιβεβαίωση της διάγνωσης της μυκοπλάσμωσης. Η ίδια μέθοδος θα καθορίσει την ευαισθησία των απομονωμένων μυκοπλασμάτων και συχνά χρησιμοποιούμενες μορφές δοσολογίας εάν είναι απαραίτητο (αντιβιοτικά, φθοροκινολόνες, κλπ).

Ίσως μια λοίμωξη ενός σταδίου με αρκετούς ιούς της οικογένειας Nepresviridae. Συχνά ανιχνεύσαμε λοίμωξη ενός ασθενούς με ιούς HSV-1, HSV-2 και CMV. Πολύ συχνότερα μολυνθέντες με διάφορους ιούς έρπητα ήταν ασθενείς με κλινικές και εργαστηριακές εκδηλώσεις δευτερογενούς IDS (ασθενείς με ογκοεμφυτευτική, ογκολογική, μολυσμένη με HIV). Έτσι, αποδεικνύεται ότι οι κλινικές και ανοσολογικές διαταραχές που προχωρούν με HIV λοίμωξη συνοδεύονται από αύξηση του αριθμού των ιών έρπητα που ανιχνεύονται με μοριακό υβριδισμό. Σε αυτό το προγνωστικά πιο σημαντικό μπορεί να θεωρηθεί μια σύνθετη ανίχνευση ενός σταδίου DNA των τύπων HSV-1, CMV και HHV-6.

[1], [2], [3]