Βιταμίνη Α στο αίμα

Τιμές αναφοράς (φυσιολογικό) επίπεδα της βιταμίνης Α (ρετινόλη) στον ορό του αίματος: παιδιά 1-6 ετών - 0,7-1,5 mol / L, 7-12 - 0,91-1,71 mmol / l, 13 -19 έτη - 0,91-2,51 μmol / l; σε ενήλικες είναι 1,05-2,09 μmol / l.

Η βιταμίνη Α αναφέρεται σε λιποδιαλυτές και υφίσταται σε δύο μορφές - η πραγματική βιταμίνη Α ή ρετινόλη (που βρίσκονται μόνο στα ζωικά προϊόντα) και προ-βιταμίνη Α, γνωστή ως καροτένιο (που παρασκευάζεται από ζωικής ή φυτικής προέλευσης), τα οποία μπορούν να μετατραπούν σε ρετινόλη στους τοίχους την πεπτική οδό. Περίπου το 50-90% της ρετινόλης που λαμβάνεται με τροφή απορροφάται στο λεπτό έντερο και μεταφέρεται στο σύμπλεγμα που συνδέεται με τα χυλομικράνια στο ήπαρ, όπου φυλάσσεται με τη μορφή παλμιτικής ρετινόλης. Εάν είναι απαραίτητο, απελευθερώνεται στην κυκλοφορία του αίματος με τη μορφή ρετινόλης, η οποία είναι σε συνδυασμό με πρωτεΐνη δέσμευσης βιταμίνης Α. Στον ορό, το σύμπλεγμα πρωτεΐνης δέσμευσης βιταμίνης Α + ρετινόλης δεσμεύεται με τρανσθυρετίνη. Από τον ορό, η ρετινόλη συλλαμβάνεται από κύτταρα-στόχους, όπως φωτοϋποδοχείς αμφιβληστροειδούς και επιθήλιο.

Όταν η βιταμίνη Α εισέρχεται στο σώμα πέραν των απαιτήσεων (180-430 μg ρετινόλης ανά ημέρα ανάλογα με την ηλικία, το φύλο και τη φυσιολογική κατάσταση), η περίσσεια της κατατίθεται στο ήπαρ που αποτελεί την αποθήκη αυτής της βιταμίνης. Με μειωμένη πρόσληψη ρετινόλης από τα τρόφιμα, τα αποθέματα ήπατος απελευθερώνονται στην κυκλοφορία του αίματος, διατηρώντας τη συγκέντρωση της ρετινόλης στον ορό σε κανονικό επίπεδο (πάνω από 0,7 μmol / L). Άλλες βιολογικά δραστικές μορφές βιταμίνης Α (αμφιβληστροειδούς και ρετινοϊκού οξέος) υπάρχουν στο αίμα σε πολύ χαμηλές συγκεντρώσεις (κάτω από 0,35 μmol / L). στους εστέρες της ρετινόλης αντιστοιχεί περίπου στο 5% της συνολικής βιταμίνης Α (0,1-0,1 μmol / l).

Η βιταμίνη Α έχει σημαντικό ρόλο στις διαδικασίες οξείδωσης-αναγωγής. Η ρετινόλη προάγει τον σχηματισμό γλυκογόνου στο ήπαρ και τους μυς, βελτιώνει τη χοληστερόλη του αίματος εμπλέκεται στη σύνθεση των στεροειδών ορμονών. Είναι απαραίτητη για την ανάπτυξη και το σχηματισμό των σκελετού επανασύνθεσης των οστών της ροδοψίνης, και συμβάλλει επίσης στην κανονική λειτουργία των βλεννογόνων μεμβρανών και επιθήλιο του καλύμματος δέρματος, αποτρέποντας μεταπλασία, υπερκεράτωση του και της υπερβολικής διάρρηξης. Η βιταμίνη Α συμβάλλει στην ενίσχυση των μαλλιών, των δοντιών και των ούλων. Τα τελευταία χρόνια, αυτό δείχνει ποικίλη ρόλος της βιταμίνης Α στην πρόληψη του καρκίνου και τη ρύθμιση της ανοσίας (απαραίτητη για την ολοκλήρωση της φαγοκυττάρωσης, αυξάνουν τη σύνθεση των Ig, διεγείρει την παραγωγή των Τ κυττάρων φονέων, διεγείρει το τύπου Τ-βοηθητικών II et al.). Βιταμίνη Α - ένα ενεργό αντιοξειδωτικό, που ενεργεί κυρίως παρουσία βιταμίνης Ε. προστατεύει την βιταμίνη C από την οξείδωση. Η ανεπάρκεια της βιταμίνης Α θεωρείται παράγοντας κινδύνου για κακοήθη νεοπλάσματα. Σε πειραματικές μελέτες αποδείχθηκε ότι η αύξηση της περιεκτικότητας σε βιταμίνη Α στη διατροφή αυξάνει τη μέση διάρκεια ζωής κατά 17,5%. Ο ψευδάργυρος είναι ένας βασικός συμπαράγοντας του μεταβολισμού της βιταμίνης Α (απαραίτητος για τη σύνθεση πρωτεΐνης δέσμευσης βιταμίνης Α).

Η μέση ημερήσια απαίτηση για ρετινόλη ενήλικες (20-50 ετών) ήταν 1,2 mg (4.000 IU, 1 IU είναι ισοδύναμη με 0.3 μικρογραμμάρια ρετινόλη) για τις εγκύους - 1,5 mg (5000 IU) για τον θηλασμό - 1, 8 mg (6000 IU), για άτομα άνω των 60 ετών - 2,5 mg (10.000 IU). Τουλάχιστον το ένα τρίτο της καθημερινής απαίτησης της ρετινόλης πρέπει να παραδίδεται στο σώμα σε έτοιμη μορφή. το υπόλοιπο μπορεί να απορροφηθεί με τη χρήση καροτενοειδών, από τα οποία σχηματίζεται ρετινόλη στο σώμα. Πρέπει να ληφθεί υπόψη ότι περίπου 30% της ρετινόλης στα τρόφιμα καταστρέφονται από τη θερμική τους επεξεργασία. Η δραστικότητα της ρετινόλης είναι 2 φορές υψηλότερη από την καροτίνη, επιπλέον, η τελευταία είναι μόνο 30-40% απορροφημένη στο έντερο. Επομένως, κατά την εκτίμηση της διαιτητικής πρόσληψης, θεωρείται ότι 1 mg ρετινόλης αντιστοιχεί περίπου σε 6 mg καροτενοειδών.

Προσδιορισμός της ρετινόλης (βιταμίνης Α) και των καροτενοειδών στον ορό σύμφωνα με την Bessey στην τροποποίηση του LA Anisimova

Αρχή της μεθόδου

Ο προσδιορισμός της βιταμίνης Α και των καροτενοειδών βασίζεται στην υδρόλυση αυτών σε διάλυμα αλκαλικής αλκοόλης, ακολουθούμενη από εκχύλιση με μίγμα οργανικών διαλυτών.

Αντιδραστήρια

• 11 Μ διάλυμα υδροξειδίου του καλίου (ΚΟΗ).
• 96% αιθυλική αλκοόλη.
• 1 Μ διάλυμα υδροξειδίου του καλίου (ΚΟΗ) σε 96% αιθυλική αλκοόλη: 1 όγκος διαλύματος 11 Μ ΚΟΗ αναμειγνύεται με 10 όγκους 96% αιθυλικής αλκοόλης. Το αντιδραστήριο παρασκευάζεται την ημέρα της μελέτης. Εάν εμφανίζεται χρώση κατά τη διάρκεια της ανάμειξης, η αλκοόλη πρέπει να καθαριστεί με απόσταξη πριν τη χρήση.
• Xylol, hp.
• Οκταν, h.ch.
• Μείγμα ξυλενίου-οκτανίου: παρασκευασμένο με ανάμιξη ίσων όγκων ξυλολίου και οκτανίου.

Οι έρευνες διεξάγονται σε φασματοφωτόμετρο.

Η πορεία του προσδιορισμού της βιταμίνης Α

Το αίμα που λαμβάνεται από το δάκτυλο (περίπου 1 ml) εισάγεται στην ετικέτα φυγοκέντρου και τοποθετείται σε γυάλινο κύπελλο με ζεστό νερό (θερμοκρασία 40-45 ° C) για 20-30 λεπτά. Για να διαχωριστεί ο ορός, ένας θρόμβος αίματος τυλίγεται προσεκτικά γύρω από την άκρη του σωλήνα με μια λεπτή γυάλινη ράβδο και φυγοκεντρείται στις 3000 στροφές ανά λεπτό για 10 λεπτά.

Επιλέξτε 0.12 ml ορού και μεταφέρετέ το σε σωληνάριο συγκόλλησης, στη συνέχεια προσθέστε 0.12 ml διαλύματος υδροξειδίου του καλίου 1 Μ αλκοόλης. Το περιεχόμενο ανακινείται προσεκτικά.

Δοκιμαστικοί σωλήνες με ανιχνευτές τοποθετούνται σε υδατόλουτρο για 20 λεπτά σε θερμοκρασία 60 ° C για υδρόλυση.

Τα δείγματα ψύχονται και προστίθενται σ 'αυτά 0.12 ml ενός μίγματος ξυλολίου-οκτανίου, αναταράσσεται έντονα για 10-15 δευτερόλεπτα. Ψύξτε ξανά και φυγοκεντρίστε.

Αφαιρέστε προσεκτικά το ανώτερο στρώμα που περιέχει βιταμίνη Α και καροτενοειδή με μια πιπέττα Pasteur με ένα κουτί από καουτσούκ και μεταφέρετέ το σε μικροσφαιρίδια.

Τα δείγματα είναι φασματοφωτομετρικά σε μήκος κύματος 328 nm - για τον προσδιορισμό της βιταμίνης Α και σε μήκος κύματος 460 nm - για τον προσδιορισμό των καροτενοειδών.

Μετά φασματοφωτομετρία η μελέτησε δείγμα υποβάλλεται σε υπεριώδη ακτινοβολία για την καταστροφή της βιταμίνης Α Για το σκοπό αυτό, σε απόσταση 15-20 cm από το χαλαζία μικροδοχεία που λαμπτήρα (βακτηριοκτόνο), έτσι ώστε η ακτινοβολία εκτεθειμένο τμήμα της κυψελίδας, που γεμίζουν με υγρό? ο χρόνος έκθεσης των 45-60 λεπτών.

Τα δείγματα επαναλαμβάνονται φασματοφωτομετρικά σε μήκος κύματος 328 nm. Η περιεκτικότητα σε βιταμίνη Α προσδιορίζεται από τη διαφορά στις τιμές εξαφάνισης (οπτική πυκνότητα), λαμβανομένου υπόψη του συντελεστή (παράγοντας) 637, που υπολογίζεται από την Bessey για τη βιταμίνη Α.

Ο υπολογισμός πραγματοποιείται σύμφωνα με τον τύπο:

X = 637 × (Ε328 (1) - Ε328 (2)),

όπου X είναι η περιεκτικότητα σε βιταμίνη Α, μg / dL. 637 είναι ο συντελεστής που υπολογίζεται από την Bessey για τον προσδιορισμό της βιταμίνης Α. Ε328 (1) - η οπτική πυκνότητα του διαλύματος πριν από την ακτινοβολία. E328 (2) είναι η οπτική πυκνότητα του διαλύματος μετά την ακτινοβολία.

Ο συντελεστής για τη μεταφορά της συγκέντρωσης βιταμίνης Α από μg / dL σε μmol / l είναι 0,035.

Η περιεκτικότητα σε καροτενοειδή υπολογίζεται από τον τύπο:

Χ = 480-Ε480,

όπου X είναι η περιεκτικότητα σε καροτενοειδή, μg / dL. 480 είναι ο συντελεστής που υπολογίζεται από τη Bessey για τον προσδιορισμό των καροτενοειδών. Το Ε480 είναι η οπτική πυκνότητα του διαλύματος δοκιμής.

Σημείωση:

Σύμφωνα με τον Bessey, μεγαλύτεροι ή μικρότεροι όγκοι ορού μπορούν να ληφθούν κατά τη διάρκεια των μελετών, αλλά η αναλογία του προς τον όγκο του διαλύματος αλκοόλης θα πρέπει να είναι σταθερή με οποιαδήποτε μεταβολή στον όγκο (ποσότητα) του μίγματος ξυλόλης-οκτανίου.

Ο κανόνας για την περιεκτικότητα της βιταμίνης Α στον ορό του αίματος είναι: στα νεογνά και τα βρέφη - 160-270 μg / l; σε ενήλικες, 1,05-2,45 μmol / l (300-700 μg / l). Η περιεκτικότητα σε καροτενοειδή στον ορό ενηλίκου είναι 800-2300 μg / l.