Αιμοποιητικά βλαστοκύτταρα αίματος ομφάλιου λώρου

Το αίμα του ομφάλιου λώρου δρα ως πηγή αιματοποιητικών βλαστικών κυττάρων σχετικά με τις δυνατότητες πολλαπλασιασμού και αποκατάστασης του αίματος των αιμοποιητικών κυττάρων. Δείξει επανειλημμένα ότι η στιγμή της γέννησης το αίμα του ομφάλιου λώρου περιέχει ένα αρκετά μεγάλο αριθμό των ασθενώς δεσμευτεί προγόνων αιμοποίηση. Μερικοί συγγραφείς πιστεύουν ότι το πλεονέκτημα των αιμοποιητικών βλαστικών κυττάρων μεταμόσχευση αίματος ομφάλιου λώρου δεν είναι ανάγκη να βρεθεί μια δότη συμβατό για το HLA-αντιγόνων. Σύμφωνα με αυτούς, η ανωριμότητα του ανοσοποιητικού συστήματος αιτίες του νεογέννητου μειωμένη λειτουργική δραστηριότητα των κυττάρων ανοσοεπαρκείς και, κατά συνέπεια, χαμηλότερες σε σχέση με μεταμόσχευση μυελού των οστών, η συχνότητα εμφάνισης σοβαρής αντίδρασης «graft versus host». Σε αυτή την επιβίωση μοσχεύματος από κύτταρα αίματος ομφάλιου λώρου δεν είναι χαμηλότερο από κύτταρα μυελού των οστών, ακόμη και στην περίπτωση της χρήσης ενός μικρότερου αριθμού GSK χορηγούνται ανά 1 kg βάρους του ασθενούς. Ωστόσο, κατά την άποψή μας, ο βέλτιστος αριθμός των ερωτήσεων μεταμοσχευμένων κυττάρων αίματος ομφάλιου λώρου αναγκαία για την αποτελεσματική εμφύτευση στο σώμα του δέκτη, ανοσολογικές συμβατότητά τους, και μια σειρά από άλλες πτυχές της μεταμόσχευσης των αιμοποιητικών βλαστικών κυττάρων του ομφάλιου λώρου του αίματος απαιτεί περισσότερο σοβαρή ανάλυση.

[1], [2], [3], [4], [5], [6]

Απόκτηση αιματοποιητικών βλαστικών κυττάρων από αίμα ομφάλιου λώρου

Η διαδικασία για την απόκτηση αιμοποιητικά βλαστικά κύτταρα του αίματος του ομφάλιου λώρου απαιτεί την πρόσληψη του αμέσως μετά τη γέννηση και τον διαχωρισμό του από τον πλακούντα, όταν ο πλακούντας είναι in utero ή ex utero, καθώς και για καισαρική τομή, αλλά και ex utero. Έχει αποδειχθεί ότι στην περίπτωση της μείωσης του χρόνου από τη γέννηση έως τα νεογέννητα από πλακουντική διαχωρισμού μέχρι 30 δευτερόλεπτα ο όγκος του που λαμβάνεται αυξάνεται αίμα του ομφάλιου λώρου κατά μέσο όρο 25-40 ml. Με μια μεταγενέστερη διαδικασία, χάνεται το ίδιο ποσό αίματος. Διαπιστώνεται ότι ο πρώιμος διαχωρισμός του παιδιού από το μετά το κάψιμο δεν συνεπάγεται αρνητικές συνέπειες για το νεογέννητο.

Η Ρωσική Ερευνητικό Ινστιτούτο Αιματολογία και Μετάγγιση Αίματος αναπτυχθεί αποτελεσματική και χαμηλού κόστους τεχνολογίας τόσο για αίμα ομφάλιου λώρου σε φυσιολογικές γραμμώσεων ((70.2 + 25.8) ml) και καισαρική τομή ((73.4 + 25.1) ml). Μια μέθοδος για το διαχωρισμό του αίματος του ομφάλιου λώρου με μια επαρκώς υψηλή απόδοση των μονοπύρηνων κυττάρων και εμπύρηνα - (83,1 + 9,6) και (83,4 + 14,1)%, αντίστοιχα. Βελτιωμένη μέθοδος για την κρυοσυντήρηση του αίματος ομφάλιου λώρου, η οποία εξασφαλίζει υψηλή ασφάλεια των μονοπύρηνων κυττάρων και CFU-GM - (96,8 + 5,7) και (89,6 + 22,6)%, αντίστοιχα. Η αποτελεσματικότητα της μεθόδου δειγματοληψίας αίματος του ομφάλιου λώρου αποστράγγιση χρησιμοποιώντας το δοχείο «Kompoplast-300» (Ρωσία). Φράχτης συγγραφείς αίμα του ομφάλιου λώρου αμέσως μετά τη γέννηση και τον διαχωρισμό του από τον πλακούντα, όσον αφορά την τοποθέτηση του πλακούντα στη μήτρα ή τη μήτρα. Πριν από παρακέντηση της ομφαλικής φλέβας ομφάλιου λώρου μία φορά σε επεξεργασία με 5% βάμμα ιωδίου, και στη συνέχεια δύο φορές - 70% αιθυλική αλκοόλη. Το αίμα ρέει μέσα από τους σωλήνες σύνδεσης στο δοχείο αυθόρμητα. Η διάρκεια του φράχτη δεν πήρε περισσότερο από 10 λεπτά. 66 συλλέγονται αποστράγγιση μέθοδο όγκου δείγματα ομφάλιου αίματος κατά μέσο όρο (72 + 28) ml, και ο αριθμός των λευκοκυττάρων στο δείγμα κατά μέσο όρο πλήρους - (1.1 + 0.6) x x 107. Η ανάλυση του αίματος ομφάλιου λώρου για στειρότητα (βακτηριακή μόλυνση, HIV-1 ιούς της ηπατίτιδας Β και C, σύφιλη, και λοίμωξη από κυτταρομεγαλοϊό) σε ένα μόνο δείγμα ταυτοποιήθηκαν IgG-αντισωμάτων στην ηπατίτιδα C σε μια άλλη μελέτη μία φορά τον πλακούντα μετά επιφάνεια εμβρύου γέννηση τοποθετήθηκε σε ένα ειδικό πλαίσιο προς τα κάτω, το καλώδιο υποβλήθηκε σε επεξεργασία με 5% νάτριο ιώδιο και 75% αιθύλιο ου αλκοόλ. Οι φλέβες του ομφάλιου λώρου αποστραγγίσθηκαν με βελόνα από το σύστημα μετάγγισης (G16). Το αίμα αποστραγγίσθηκε αυθόρμητα στο δοχείο. Ο όγκος του αίματος που λαμβάνεται κατ 'αυτόν τον τρόπο ήταν κατά μέσο όρο (55 + 25) ml. Το χαρτί G. Kogler et al (1996) λώρου αίματος που ελήφθησαν κλειστό τρόπο και λαμβάνεται μεγάλους όγκους αίματος - κατά μέσο όρο (79 + 26) ml. Οι συγγραφείς σημειώνουν ότι μεταξύ 574 λώρου δείγματα αίματος περιέχουν περίπου 7% λιγότερο από 40 ml αίματος, η οποία δεν επιτρέπει να τα χρησιμοποιούν για μεταμόσχευση. Κ Isoyama et al (1996), λαμβάνοντας το αίμα του ομφάλιου λώρου με ενεργό exfusion χρησιμοποιώντας σύριγγες, έλαβαν κατά μέσο όρο 69,1 ml αίματος (όγκος αίματος του ομφάλιου λώρου κυμαίνονταν από 15 για να 135 ml). Τέλος, οι συνεργάτες Α Abdel-Mageed ΡΙ (1997) από punovinnoy φλέβα καθετηριασμού ελήφθησαν σε ένα μέσο όρο 94 ml του αίματος του ομφάλιου λώρου (από 56 έως 143 ml).

Για να μειωθεί ο κίνδυνος ιατρογενούς μόλυνσης και μόλυνσης από μητρικά εκκρίσεις αναπτυχθεί κλειστού συλλογής αίματος σύστημα βασίζεται στο ευρέως χρησιμοποιούμενο σύστημα transfuzioinoy Baxter Healthcare Corp., Deerfield, IL (USA), που περιέχει 62.5 ml από CPDA (κιτρικού-φωσφορικού-δεξτρόζης με αδενίνη) ως αντιπηκτικό. Η τεχνολογία για την παραγωγή υλικού είναι υψίστης σημασίας για την παρασκευή ενός ποιότητας δείγμα σε σχέση με την ποσότητα του περιεχομένου και την καθαρότητα του κυτταρικού εναιωρήματος. Από τις υπάρχουσες μεθόδους συλλογής αίματος ομφάλιου λώρου, kotoryeuslovno ταξινομούνται σε κλειστά, ημι-ανοικτή και ανοικτή προτίμηση sleduetotdavat πρώτο σύστημα, όπως σε ένα κλειστό σύστημα μειώνει σημαντικά τον κίνδυνο μικροβιακής μόλυνσης του υλικού, καθώς επίσης και η μόλυνση του κυτταρικού εναιωρήματος του μητρικό κύτταρο.

Ο A. Nagler και οι συν-συγγραφείς (1998) διεξήγαγαν μια συγκριτική ανάλυση της αποτελεσματικότητας και των τριών συστημάτων δειγματοληψίας αίματος ομφάλιου λώρου. Στην πρώτη παραλλαγή, η διαδικασία πραγματοποιήθηκε σε ένα κλειστό σύστημα με εκχύλιση αίματος απευθείας μέσα στο δοχείο. Στη δεύτερη παραλλαγή, ελήφθη αίμα ομφάλιου λώρου με τη μέθοδο της ενεργής εκχύλισης των συριγγών1 με περαιτέρω έκπλυση των φλεβών του πλακούντα και ταυτόχρονη αποστράγγιση του αίματος στο δοχείο (ανοιχτή μέθοδος). Στην τρίτη παραλλαγή, το αίμα αποσύρθηκε σε ένα ημι-ανοικτό σύστημα, εκχυλίνοντάς το ενεργά με σύριγγες και πλένοντας μέσω της αρτηρίας του ομφάλιου λώρου με ταυτόχρονη εκχύλιση στο δοχείο. Στην πρώτη έκδοση, οι συγγραφείς έλαβαν αίμα ομφάλιου λώρου στον όγκο (76,4 + 32,1) ml με αριθμό λευκοκυττάρων (10,5 + 3,6) x ¹⁰⁶ για 1 ml αίματος. Στη δεύτερη παραλλαγή, οι αντίστοιχοι δείκτες ήταν (174,4 + 42,8) ml και (8,8 + 3,4) x ¹⁰⁶ / ml. στο τρίτο - (173,7 + 41,3) ml και (9,3 + 3,8) x ¹⁰⁶ / ml. Η συχνότερη μόλυνση των δειγμάτων αίματος ομφάλιου λώρου παρατηρήθηκε όταν χρησιμοποιήθηκε ένα ανοικτό σύστημα. Παρατηρείται άμεση συσχέτιση μεταξύ της μάζας του πλακούντα και του όγκου του εξαγόμενου αίματος - με την αύξηση της μάζας του πλακούντα αυξάνεται η ποσότητα αίματος που συλλέγεται.

Μετά τη δειγματοληψία αίματος ομφάλιου λώρου ακολουθεί το στάδιο διαχωρισμού-απομόνωση μονοπύρηνων κυττάρων και καθαρισμός του κυτταρικού εναιωρήματος από ερυθροκύτταρα. Κάτω από τις πειραματικές συνθήκες, τα πυρηνωμένα κύτταρα απομονώνονται με τη μέθοδο της καθίζησης τους με μεθυλοκυτταρίνη κατά τη διάρκεια της λύσης των ερυθροκυττάρων αμμωνίου με χλωρίδιο. Ωστόσο, για κλινικούς σκοπούς, η μεθυλοκυτταρίνη δεν πρέπει να χρησιμοποιείται, δεδομένου ότι η απώλεια αιματοποιητικών βλαστοκυττάρων φθάνει το 50-90%. Λύση ερυθρών αιμοσφαιρίων σε σχέση με μεγάλους όγκους του διαλύματος εργασίας στην κλινική επίσης δύσκολα διεξάγεται, αν και το ποσοστό του διαχωρισμού με τον τρόπο αυτό εμπύρηνα κύτταρα με τον φαινότυπο CD34 +, και των προγονικών κυττάρων λειτουργίες CFU-GM και CFU-GEMM σημαντικά υψηλότερο. Έχει αναφερθεί ένας νέος παράγοντας για την απομόνωση μονοπυρηνικών κυττάρων στο διάλυμα πυκνότητας αγοραστή πυκνότητας (BDS72). Η ουσία αυτή έχει τις ακόλουθες φυσιολογικές παραμέτρους: ρΗ - 7.4, οσμωτικότητα - 280 mosm / kg, πυκνότητα - 1.0720 g / ml. Σύμφωνα με τους συγγραφείς, με τη βοήθειά του είναι δυνατόν να απομονωθούν έως και 100% των θετικών σε CD34 κυττάρων και να απομακρυνθεί το 98% των ερυθρών αιμοσφαιρίων. Ωστόσο, η κλινική δεν εφαρμόζει ακόμη το BDS72.

Οι μέθοδοι διαχωρισμού δοκιμάστηκαν εμπύρηνα κύτταρα από το αίμα του ομφάλιου λώρου χρησιμοποιείται τυπικά ένα 10% διάλυμα HES ή διάλυμα 3% ζελατίνη. Αποτελεσματικότητα της καθίζησης των ερυθροκυττάρων και απομόνωση εμπύρηνα κύτταρα σε αμφότερες τις περιπτώσεις είναι περίπου ίση. Ωστόσο, στην περίπτωση της χρήσης ως ζελατίνης παράγοντα καθίζησης δυνατόν να ληφθεί ένα κάπως μεγαλύτερο αριθμό των CFU-GM από ό, τι όταν χρησιμοποιείται HES. Υποτίθεται ότι η διαφορά στην απόδοση ανάκτησης CFU-GM άνιση ταχύτητα λόγω εναπόθεσης των μεμονωμένων κλασμάτων ή εμπύρηνα κύτταρα ικανότητα μορίων HES απορροφήθηκε επί αιμοποιητικών υποδοχείς κυτταρικής επιφάνειας και έτσι να αποκλείουν την ευαισθησία τους σε παράγοντες διέγερσης αποικιών, οι οποίες χρησιμοποιούνται κατά την καλλιέργεια CFU-GM in vitro. Παρ 'όλα αυτά, τόσο κατακράτησης ιζήματος μπορεί επίσης να είναι κατάλληλο για την απομόνωση εμπύρηνων κυττάρων στη δημιουργία μεγάλης κλίμακας τράπεζες αίματος ομφάλιου λώρου.

Οι μέθοδοι διαχωρισμού και κρυοσυντήρησης του αίματος του ομφάλιου λώρου κατ 'αρχήν δεν διαφέρουν από εκείνες που χρησιμοποιούνται στην εργασία με αιματοποιητικά βλαστοκύτταρα περιφερικού αίματος και μυελού των οστών των ενηλίκων δοτών. Αλλά όταν προετοιμάζεται ένας μεγάλος αριθμός δειγμάτων αίματος ομφάλιου λώρου για τις τράπεζές του, οι μέθοδοι διαχωρισμού πρέπει να είναι, πρώτα απ 'όλα, χαμηλού κόστους. Επομένως, τώρα, δυστυχώς, για κλινικές ανάγκες που έχουν ήδη χρησιμοποιηθεί, χρησιμοποιούνται συνήθεις μέθοδοι απομόνωσης και κρυοσυντήρησης των κυττάρων αίματος του ομφάλιου λώρου και οι πιο αποτελεσματικές αλλά οικονομικά αποτελεσματικές μέθοδοι παραμένουν οι πολλοί πειραματιστές.

Σε γενικές γραμμές τα κριτήρια αξιολόγησης που θεσπίστηκαν οι ίδιοι αιμοποιητικών απαιτήσεις του αριθμού των κυττάρων και στη μελέτη των δειγμάτων ομφαλοπλακουντιακού αίματος για την ανίχνευση μολυσματικών παραγόντων. Προκειμένου να προστατευθεί η αιμοποιητικών μεταμόσχευση κυττάρων αίματος ομφάλιου λώρου, τα δείγματα ολικού αίματος θα πρέπει να ερευνηθεί πρωτίστως σε μολύνσεις που μεταδίδονται από αιματογενή, και γενετικών ασθενειών. Μερικοί συγγραφείς συνιστούν επιπλέον ειδικές μεθόδους μελέτης αίματος από τον ομφάλιο λώρο για τους σκοπούς της διαγνώσεως γενετικών ασθενειών όπως η θαλασσαιμία και δρεπανοκυτταρική αναιμία, ανεπάρκεια απαμινάσης αδενοσίνης, αγαμμασφαιριναιμία Bruton, ασθένεια Harlera και παίκτης.

Σύμφωνα με τις συστάσεις Ticheli L. Et al (1998), σε κάθε δείγμα αίματος από τον ομφάλιο λώρο είναι απαραίτητο να προσδιοριστεί ο αριθμός των εμπύρηνων κυττάρων, SB34-θετικά κύτταρα και CFU-GM, φέρουν HLA-πληκτρολόγηση για τον προσδιορισμό της ομάδας αίματος ΑΒΟ και Rh σύνθεσή της. Επιπλέον, σπορά πραγματοποιείται βακτηριολογικές, ορολογικές εξετάσεις για τον ιό HIV και τη μόλυνση CMV, HBsAg, ηπατίτιδα C, HTLY-Ι και ΗΤΕν-ΙΙ (λευχαιμία Τ-κυττάρου, ανθρώπινα), σύφιλη, τοξοπλάσμωση. Μια αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης σε κυτταρομεγαλοϊό και μόλυνση με HIV είναι υποχρεωτική.

Η ίδια η διαδικασία λήψης αίματος ομφάλιου λώρου θα πρέπει να πραγματοποιείται σύμφωνα με τις αρχές της ιατρικής βιοηθικής. Πριν από την έναρξη της συλλογής αίματος είναι απαραίτητη η συναίνεση της εγκύου για την εφαρμογή της. Προκαταρκτική συνομιλία με την έγκυο γυναίκα τη συναίνεση κατόπιν ενημέρωσης για την εκτέλεση όλων των χειρισμών, αφού πλήρωση exfusion το αίμα και τα έγγραφα φινίρισμα γίνεται μόνο από επαγγελματίες της υγείας. Σε κάθε περίπτωση απαράδεκτη εκτελεί οποιαδήποτε από αυτές τις διαδικασίες από το προσωπικό με βιολογικά, χημικά, φαρμακευτικά και άλλα μη-ιατρική εκπαίδευση, ενόψει της παραβίασης των καθιερωμένων κανόνων της βιοηθικής και τα ανθρώπινα δικαιώματα. Για Θετικές δοκιμές φορέα HBsAg, αντισώματα προς τον αιτιολογικό παράγοντα της ηπατίτιδας C, αίμα του ομφάλιου λώρου HIV και σύφιλη δεν λαμβάνονται, και τα συλλεγέντα δείγματα αίματος έχει ήδη απορριφθεί και να καταστρέφονται. Θα πρέπει να σημειωθεί ότι η μεταφορά των λανθάνουσες λοιμώξεις στα νεογέννητα είναι πολύ πιο σπάνια από ότι στους ενήλικες, ως εκ τούτου, η πιθανότητα των αιματογενών μεταφορά και την ανάπτυξη των λοιμωδών επιπλοκών αιμοποιητικών εγχύσεις κυττάρων αίματος ομφάλιου λώρου είναι σημαντικά χαμηλότερη από ότι στην περίπτωση της μεταμόσχευσης μυελού των οστών από ενήλικες δότες.

Ένα σημαντικό σημείο της εφαρμογής του αίματος του ομφάλιου λώρου στην κλινική είναι η αξιολόγηση του μοσχεύματος, η οποία βασίζεται στην ποσοτικοποίηση των αιμοποιητικών βλαστικών κυττάρων σε ένα δείγμα κυττάρων αίματος ομφάλιου λώρου και τις δόσεις που απαιτούνται για μεταμόσχευση. Δεν έχουν ακόμη αναπτυχθεί πρότυπα για τον βέλτιστο αριθμό κυττάρων αίματος του ομφάλιου λώρου που απαιτούνται για τη μεταμόσχευση. Δεν υπάρχει γενικά αποδεκτή άποψη ακόμη και σε τέτοιες παραμέτρους ρουτίνας όπως ο αριθμός των CD34-θετικών κυττάρων και CFU-GM. Μερικοί συγγραφείς αξιολόγησε το δυναμικό των αιμοποιητικών κυττάρων με ανάλυση των μακροχρόνιες καλλιέργειες με καθορισμό της περιεκτικότητας των μονάδων σχηματισμού αποικίας που είναι κοινές στα κοκκιοκύτταρα, ερυθροκύτταρα, μονοκύτταρα και μεγακαρυοκύτταρα - CFU-GEMM.

Ωστόσο, σε κλινικά περιβάλλοντα, η τυποποιημένη αξιολόγηση της μεταμόσχευσης αίματος ομφάλιου λώρου περιλαμβάνει συνήθως μόνο τον προσδιορισμό του αριθμού των πυρηνωμένων ή μονοπύρηνων κυττάρων.

Αποθήκευση αιμοποιητικών βλαστοκυττάρων αίματος ομφάλιου λώρου

Υπάρχουν ορισμένα προβλήματα στην τεχνολογία αποθήκευσης αιμοποιητικών κυττάρων αίματος ομφάλιου λώρου. Όταν η κρυοσυντήρηση των αιμοποιητικών βλαστικών κυττάρων, προκειμένου να επιτευχθεί η βέλτιστη λειτουργία κατάψυξη τους πρέπει να ελαχιστοποιεί την ποσότητα του αίματος λώρου και ερυθρά αιμοσφαίρια απομακρύνθηκαν προηγουμένως για να αποφευχθεί η αιμόλυση και τον κίνδυνο της αντίδρασης ασυμβατότητας των αντιγόνων των ερυθροκυττάρων (ΑΒΟ, Rh). Για τους σκοπούς αυτούς, είναι κατάλληλες διάφορες μέθοδοι για την απομόνωση πυρηνωμένων κυττάρων. Στις αρχές της δεκαετίας του '90 του περασμένου αιώνα η πιο ευρέως χρησιμοποιούμενη μέθοδος διαχωρισμού εμπύρηνων κυττάρων σε βαθμίδωση πυκνότητας βασίζεται σε Ficoll με πυκνότητα 1,077 g / ml, είτε διήθησης με πυκνότητα 1,080 g / ml. Ο διαχωρισμός του αίματος ομφάλιου λώρου από βαθμίδωσης πυκνότητας επιτρέπει την επιλογή κυρίως μονοπύρηνα κύτταρα αλλά οδηγεί σε σημαντικές απώλειες των αιμοποιητικών προγονικών κυττάρων - έως και 30-50%.

Η αποτελεσματικότητα καθίζησης του υδροξυαιθυλικού αμύλου στη διαδικασία απομόνωσης των κυττάρων αίματος του ομφάλιου λώρου εκτιμάται με διάφορους τρόπους. Μερικοί συγγραφείς υποδεικνύουν χαμηλή ποιότητα διαχωρισμού με τη χρήση αυτής της μεθόδου, ενώ άλλοι ερευνητές, αντίθετα, μεταξύ όλων των πιθανών μεθόδων προτιμούν να κατανέμουν το αίμα του ομφάλιου λώρου HSC με ακρίβεια χρησιμοποιώντας διάλυμα 6% υδροξυαιθυλικού αμύλου. Αυτό υπογραμμίζει την υψηλή απόδοση της καθίζησης των αιμοποιητικών κυττάρων, η οποία, σύμφωνα με ορισμένα στοιχεία, φθάνει από 84% έως 90%.

Οι υποστηρικτές της άλλης άποψης πιστεύουν ότι σχεδόν όλες οι διαδικασίες κλασμάτωσης συνεπάγονται μεγάλες απώλειες κύτταρα yadrosoderzhashih και προσφέρουν για να κάνουν το διαχωρισμό με φυγοκέντρηση, διαχωρίζοντας το αίμα του ομφάλιου λώρου σε 3 κλάσματα: ερυθροκυττάρων, λευκοκυττάρων και δακτυλίου πλάσματος. Ο διαχωρισμός των κυττάρων με αυτόν τον τρόπο, οι εφευρέτες έχουν βρει ότι το περιεχόμενο των μονοπύρηνων κυττάρων πρώιμων αιματοποιητικών προγονικών κυττάρων και κυττάρων με CD34 + ανοσοφαινότυπο τελικά ήταν αντίστοιχα 90, 88 και 100% του αρχικού επιπέδου. Παρόμοιες ποσότητες της καθαρισμένης ανάπτυξης σε αυτή τη μέθοδο της ομφάλιου λώρου κύτταρα του αίματος που λαμβάνεται με άλλους ερευνητές: μετά την καθίζηση εμπύρηνα διατεθεί 92%, 98% - μονοπύρηνα, 96% - CD34-θετικών κυττάρων και 106% των μονάδων σχηματισμού αποικιών.

Στα τέλη της δεκαετίας του 1990, η ζελατίνη χρησιμοποιήθηκε ευρέως ως παράγοντας καθίζησης. Στην κλινική πρακτική, τη χρήση βλαστικών κυττάρων ζελατίνης αιμοποιητικά που απομονώνονται από το αίμα του ομφάλιου λώρου από το 1994. Όταν χρησιμοποιείται ένα διάλυμα ζελατίνης 3%, η αποτελεσματικότητα της απομόνωσης των πυρηνωμένων κυττάρων φτάνει το 88-94%. Η ευρεία χρήση ζελατίνης σε δημιουργία τράπεζας αίματος του ομφάλιου λώρου έχει επιβεβαιώσει τα πλεονεκτήματά της έναντι άλλων μέσων ιζημάτων. Συγκριτική ανάλυση όλων των ανωτέρω μεθόδων της απομόνωσης των εμπύρηνων κυττάρων από την άποψη της διαδοχική χρήση τους σε καθένα από τα δείγματα αίματος λώρου δοκιμή έδειξε ότι οι βέλτιστες κατακράτησης ιζήματος-out μονοπύρηνα κύτταρα με φαινότυπο CD34 + / CD45 +, καθώς και από τον αριθμό των CFU-GM και CFU-GEMM είναι 3% ζελατίνης. Απέδειξε ότι είναι σημαντικά λιγότερο αποτελεσματικές μεθόδους χρησιμοποιώντας κλίση πυκνότητας Ficoll, και η χρήση των μεθυλοκυτταρίνη και το άμυλο υδροξυαιθυλίου στο οποίο αιμοποιητικών απώλεια κυττάρου έφθασε 60%.

Η επέκταση του όγκου της μεταμόσχευσης αιμοποιητικού αίματος από ομφαλικό λώρο σχετίζεται όχι μόνο με την ανάπτυξη μεθόδων για την παραγωγή, αλλά και με την αποθήκευση. Υπάρχουν πολλά προβλήματα που σχετίζονται άμεσα με την παρασκευή αίματος ομφάλιου λώρου για μακροχρόνια αποθήκευση και την επιλογή της βέλτιστης τεχνολογίας κρυοσυντήρησης των δειγμάτων της. Μεταξύ αυτών είναι τα ζητήματα της σκοπιμότητας της διεξαγωγής διαδικασιών διαχωρισμού, η χρήση διαφόρων μέσων κρυοσυντήρησης και η χρήση μεθόδων για την παρασκευή των αποψυγμένων κυττάρων για μεταμόσχευση. Η μεταφορά των φυσικών δειγμάτων αίματος ομφάλιου λώρου πραγματοποιείται συχνά από περιοχές μακριά από αιματολογικά κέντρα. Σε σχέση με αυτό, προκύπτει το πρόβλημα των επιτρεπόμενων περιόδων αποθήκευσης αίματος ομφάλιου λώρου από τη στιγμή της λήψης τους μέχρι την έναρξη της κρυοσυντήρησης, η οποία έχει ιδιαίτερη σημασία στην ανάπτυξη τραπεζών αίματος ομφάλιου λώρου.

Η μελέτη της λειτουργικής δραστηριότητας των αιμοποιητικών κυττάρων αίματος ομφάλιου λώρου μετά από μακροχρόνια αποθήκευση (έως 12 ετών) σε υγρό άζωτο αποκάλυψε ότι περίπου το 95% των αιμοποιητικών κυττάρων κατά τη διάρκεια αυτής της περιόδου δεν χάνουν υψηλή πολλαπλασιαστική ικανότητα τους. Το χαρτί Yurasova S. Et al (1997) απέδειξαν ότι το αίμα λώρου αποθηκεύονται σε θερμοκρασία δωματίου (22 ° C) ή στους 4 ° C για 24 και 48 ώρες δεν μειώνει ουσιαστικά την βιωσιμότητα των αιμοποιητικών κυττάρων που το αρχικό επίπεδο είναι καταλλήλως 92 και 88%. Ωστόσο, αν ο χρόνος αποθήκευσης παραταθεί σε τρεις ημέρες, ο αριθμός των βιώσιμων πυρηνωμένων κυττάρων στο αίμα του ομφάλιου λώρου μειώνεται σημαντικά. Ταυτόχρονα, άλλες μελέτες βρήκαν ότι κατά την αποθήκευση για 2-3 ημέρες σε θερμοκρασία 22 ° C ή 4 επηρεάζονται κυρίως τη βιωσιμότητα των ώριμων κοκκιοκυττάρων, αλλά όχι αιμοποιητικών κυττάρων.

Από την βιωσιμότητα του αίματος του ομφάλιου λώρου αιμοποιητικών βλαστικών κυττάρων μπορεί να έχει αρνητικό αντίκτυπο των συνιστωσών του συστήματος για τη συλλογή του. Ανάλυση της επίδρασης των διαφορετικών αντιπηκτικών, η οποία μηχανισμός δράση οφείλεται στην πρόσδεση ιόντων ασβεστίου (ACD, EDTA, XAPD-1) για αιμοποιητικά προγονικά κύτταρα σε συνθήκες αποθήκευσης αίματος ομφάλιου λώρου των 24 έως 72 ωρών αποκάλυψαν αρνητικές επιπτώσεις τους στην βιωσιμότητα των εμπύρηνων κυττάρων. Στο πλαίσιο αυτό, οι συγγραφείς συστήνουν τη χρήση του PBS (ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικών) με την προσθήκη της φυσικής ηπαρίνης χωρίς συντηρητικό σε συγκέντρωση 20 U / ml, η οποία, κατά τη γνώμη τους, καθιστά δυνατή την αύξηση της διάρκειας της αποθήκευσης μη κλασματοποιημένων αίμα του ομφάλιου λώρου έως 72 ώρες και αποθηκεύει την λειτουργική δραστικότητα των μονάδων σχηματισμού αποικιών. Ωστόσο, στη μελέτη της διατήρησης CFU-GM και CFU-G δείξει ότι ομφάλιου χρόνο αποθήκευσης ομφαλικού αίματος πριν την κρυοσυντήρηση, δεν θα πρέπει να υπερβαίνει τις εννέα ώρες. Προφανώς, σε αυτή την περίπτωση θα πρέπει να ενεργήσει την αρχή ότι αν υπάρχει αντικρουόμενα δεδομένα θα πρέπει να χρησιμοποιούν την ελάχιστη συνιστώμενη διάρκεια αποθήκευσης ομφαλοπλακουντιακού αίματος και να αρχίσει μια προγραμματιζόμενη κατάψυξη απομονωμένα κύτταρα όσο το δυνατόν γρηγορότερα.

Κατά την κατάψυξη αιμοποιητικών βλαστοκυττάρων αίματος ομφάλιου λώρου, ένα διάλυμα 10% DMSO χρησιμοποιείται συνήθως ως κρυοπροστατευτικό. Εν τούτοις, εκτός από την εκφρασμένη κρυοπροστατευτική δράση, το διμεθυλοσουλφοξείδιο σε αυτή τη συγκέντρωση έχει άμεση κυτταροτοξική δράση, ακόμη και υπό την προϋπόθεση της ελάχιστης έκθεσης στα κύτταρα που σχηματίζουν αίμα του αίματος του ομφάλιου λώρου. Για να μειωθεί η κυτταροτοξική δράση του DMSO, εφαρμόζονται μηδενική θερμοκρασία έκθεσης, αύξηση της ταχύτητας όλων των χειρισμών και επανειλημμένη πλύση μετά την απόψυξη δειγμάτων ομφάλιου λώρου.

Το Ινστιτούτο Αιματολογίας και Μεταφυσιολογίας της Ακαδημίας Ιατρικών Επιστημών της Ουκρανίας αναπτύσσει μια επιστημονική κατεύθυνση από το 1995, σκοπός του οποίου είναι να μελετήσει το αίμα ομφάλιου λώρου ως εναλλακτική πηγή αίματος αιμοποιητικών κυττάρων. Συγκεκριμένα, έχουν αναπτυχθεί νέες τεχνολογίες για κρυοσυντήρηση χαμηλών θερμοκρασιών αιμοποιητικών κυττάρων μη κλασματωμένου και κλασματοποιημένου αίματος ομφάλιου λώρου. Ως κρυοπροστατευτικό, χρησιμοποιείται ιατρική πολυβινυλοπυρρολιδόνη χαμηλού μοριακού βάρους. Η μέθοδος κρυοσυντήρησης του μη κλασματωμένου αίματος ομφάλιου λώρου βασίζεται στην αρχική τεχνολογία της προπαρασκευής των κυττάρων για κατάψυξη και στην τεχνική της ειδικής αγωγής του κυτταρικού εναιωρήματος αμέσως πριν από τη μεταμόσχευση.

Ένας από τους σημαντικότερους παράγοντες που επηρεάζουν το επίπεδο της λειτουργικής δραστηριότητας των κρυοσυντηρημένων αιμοποιητικών βλαστικών κυττάρων είναι ο ρυθμός ψύξης του κυτταρικού εναιωρήματος, ειδικά κατά τη διάρκεια της φάσης κρυσταλλοποίησης. Μια προσέγγιση λογισμικού για την επίλυση του προβλήματος της ταχύτητας και του χρόνου κατάψυξης παρέχει μεγάλες ευκαιρίες για τη δημιουργία απλών και εξαιρετικά αποτελεσματικών μεθόδων κρυοσυντήρησης χωρίς να πλυθεί το αιώρημα κυττάρων από κρυοπροστατευτικά πριν από τη μεταμόσχευση.

Τα στάδια της άμεσης κατάψυξης και απόψυξης είναι πιο επικίνδυνα για τη βιωσιμότητα των κυττάρων κατά την παρασκευή τους. Κατά την κατάψυξη των αιμοποιητικών κυττάρων, ένα σημαντικό μέρος αυτών μπορεί να καταστραφεί τη στιγμή της μετάβασης του ενδοκυτταρικού μέσου από το υγρό στην κρυσταλλοποίηση της στερεάς φάσης. Για να μειωθεί το ποσοστό κυτταρικού θανάτου, χρησιμοποιούνται κρυοπροστατευτικά, οι μηχανισμοί δράσης και η κρυοπροστατευτική τους αποτελεσματικότητα έχουν καλυφθεί επαρκώς στην επιστημονική βιβλιογραφία.

Μια πολλά υποσχόμενη Τεχνικές κατεύθυνση Βελτιστοποίηση της κρυοσυντήρησης του μυελού των οστών και κύτταρα αίματος ομφάλιου λώρου είναι να συνδυάσει στο ίδιο διάλυμα σε χαμηλές συγκεντρώσεις κρυοπροστατευτικών με αρκετούς διαφορετικούς μηχανισμούς δράσης, για παράδειγμα, που δρουν στο ενδοκυτταρικό επίπεδο DMSO και αμύλου υδροξυαιθυλίου ή λευκωματίνη που διαθέτουν εξωκυτταρική επίδραση πλαστικοποιήσεως.

Για κρυοσυντήρηση των κυττάρων αίματος ομφάλιου λώρου χρησιμοποιούνται παραδοσιακά διάλυμα DMSO 20% το οποίο είναι μόνιμα μηχανικά ανάδευση σε ένα λουτρό πάγου, χύθηκε βραδέως εντός του κυτταρικού εναιωρήματος για να επιτευχθεί ίση (1: 1) η αναλογία όγκου του κυτταρικού εναιωρήματος και το κρυοπροστατευτικό. Η τελική συγκέντρωση του διμεθυλοσουλφοξειδίου είναι 10%. Το κυτταρικό εναιώρημα ψύχθηκε σε ένα πρόγραμμα σε ένα krioustanovke ταχύτητα ΕΣ / min στους -40 ° C μετά την οποία ο ρυθμός ψύξης αυξήθηκε στους 10 ° C / min. Αφού φθάσει στους -100 ° C, το δοχείο με το κυτταρικό εναιώρημα τοποθετείται σε υγρό άζωτο (-196 ° C). Με αυτή τη μέθοδο κρυοσυντήρησης, η ασφάλεια των λειτουργικά ενεργών μονοπύρηνων κυττάρων μετά την απόψυξη φτάνει το 85% του αρχικού επιπέδου.

Οι τροποποιήσεις των μεθόδων κρυοσυντήρησης στοχεύουν στη μείωση της συγκέντρωσης του DMSO με προσθήκη υδροξυαιθυλικού αμύλου (οι τελικές συγκεντρώσεις διμεθυλοσουλφοξειδίου και υδροξυαιθυλικού αμύλου είναι 5% και 6% αντίστοιχα). Η υψηλή αποτελεσματικότητα αυτού του συνδυασμού κρυοπροστατευτικών παρατηρείται όταν το εναιώρημα των μυελοειδών κυττάρων καταψύχεται, με όχι λιγότερη κυτταροπροστασία από ό, τι με ένα απλό διάλυμα 10% διμεθυλοσουλφοξειδίου. Ο αριθμός των βιώσιμων πυρήνων κυττάρων έφθασε στο 96,7% του βασικού επιπέδου και η λειτουργική τους δραστηριότητα, υπολογιζόμενη με τον αριθμό CFU-GM, ήταν 81,8%.

Όταν χρησιμοποιείται διάλυμα διμεθυλοσουλφοξειδίου σε συγκεντρώσεις που κυμαίνονται από 5 έως 10% σε συνδυασμό με 4% άμυλο υδροξυαιθυλίου (τελική συγκέντρωση) βρέθηκε ότι η διατήρηση των CD34-θετικών κυττάρων σε αυτά τα εύρη διμεθυλοσουλφοξείδιο πρακτικά αμετάβλητο. Ταυτόχρονα σε συνθήκες μείωση της συγκέντρωσης DMSO από 5 έως 2,5% παρατηρείται μαζικό θάνατο των κυττάρων του αίματος του ομφάλιου λώρου - αριθμός των βιώσιμων κυτταρικών μονάδων μειώνεται από 85,4 ποσοστό 12,2%. Άλλοι συγγραφείς συμπέρανε επίσης ότι ήταν 5 και 10% διάλυμα διμεθυλοσουλφοξειδίου (στην πραγματοποίηση των πνευματικών δικαιωμάτων - σε συνδυασμό με αυτόλογο ορό) με τη μέγιστη αποδοτικότητα παρέχουν κυτταροπροστασία κατά την διάρκεια της κρυοσυντήρησης του HSC αίμα του ομφάλιου λώρου. Επιπλέον, διαδοχικά υψηλή ασφάλεια καταψυχθεί και αποψυχθεί κυψέλη αυτή σηματοδοτείται στην περίπτωση συνδυασμού των 5 ή 10% DMSO διάλυμα αμύλου υδροξυαιθυλίου 4%, ιδιαίτερα με ελεγχόμενο ρυθμό ψύξης των TOS / min. Σε μία άλλη χαρτί που χρησιμοποιείται κρυοπροστατευτικό διάλυμα που αποτελείται από τρία συστατικά ήδη - DMSO, καθαρισμένη ανθρώπινη λευκωματίνη και μέσο RPMI σε αναλογία 1: 4: 5, το οποίο προστέθηκε στο κυτταρικό εναιώρημα έως σε ίσο όγκο αναλογίες (τελική συγκέντρωση DMSO ήταν 5%). Μετά την απόψυξη σε ένα λουτρό νερού στους + 4w CFU-GM ασφάλειας πρέπει να υπερβαίνει το 94%.

Μερικοί συγγραφείς προτείνουν τη χρήση μη κλασματωμένου αίματος ομφάλιου λώρου για κρυοσυντήρηση, καθώς σημαντικές ποσότητες αιμοποιητικών κυττάρων χάνονται κατά την αφαίρεση των ερυθρών αιμοσφαιρίων. Σε αυτή την υλοποίηση, ένα διάλυμα 10% διμεθυλοσουλφοξειδίου χρησιμοποιείται για την προστασία μονοπύρηνων κυττάρων από τις βλαπτικές επιδράσεις της κρυοκρυσταλλοποίησης. Η κατάψυξη πραγματοποιείται με σταθερό ρυθμό ψύξης HS / min έως -80 ° C, μετά το οποίο το εναιώρημα κυττάρων αίματος ομφάλιου λώρου βυθίζεται σε υγρό άζωτο. Με αυτή τη μέθοδο ψύξης, λαμβάνει χώρα μερική λύση των ερυθροκυττάρων, συνεπώς τα δείγματα αίματος δεν απαιτούν κλασμάτωση. Μετά την απόψυξη, το κυτταρικό εναιώρημα πλένεται από ελεύθερη αιμοσφαιρίνη και διμεθυλοσουλφοξείδιο σε ένα διάλυμα ανθρώπινης αλβουμίνης ή στον αυτόλογο ορό του ασθενούς και χρησιμοποιείται για μεταμόσχευση.

Διατήρηση των αιμοποιητικών προγονικών κυττάρων μετά από απόψυξη του αίματος μη κλασματικού τύπου καλωδίου είναι πράγματι υψηλότερο από το κλασματοποιημένα, αλλά σε σχέση με krioustoychivostyu των ερυθρών κυττάρων του αίματος μπορεί να προκαλέσει σοβαρά προβλήματα, ως αποτέλεσμα της μετά από μετάγγιση μετάγγιση ερυθρών κυττάρων ΑΒΟ-ασύμβατη. Επιπλέον, ο όγκος του αποθηκευμένου μη κλασματωμένου αίματος αυξάνεται σημαντικά. Από κλινική άποψη, ακόμη πιο προτιμότερα κρυοσυντήρηση προηγουμένως απομονωθεί και να καθαριστεί από άλλα κυτταρικά κλάσματα των αιμοποιητικών κυττάρων αίματος ομφάλιου λώρου.

Συγκεκριμένα, μια μέθοδος είναι κρυοσυντήρηση των κυττάρων αίματος ομφάλιου λώρου κλασματοποιείται δίνοντας την αφαίρεση ερυθροκυττάρων στο πλαίσιο της προετοιμασίας για κατάψυξη, η οποία χρησιμοποιεί ένα διάλυμα 6% υδροξυαιθυλαμύλου στο διάλυμα σύνθεση plazmozameshchath «Stabizol». Μετά την απόψυξη, το κυτταρικό εναιώρημα που λαμβάνεται κατ 'αυτόν τον τρόπο είναι έτοιμο για κλινική χρήση χωρίς επιπλέον χειρισμό.

Έτσι, επί του παρόντος, υπάρχουν πολλοί αρκετά αποτελεσματικοί τρόποι κρυοσυντήρησης του αίματος του ομφάλιου λώρου. Η κύρια διαφορά είναι ότι τα δείγματα αίματος καταψύχονται μη κλασματοποιημένα ή υποβάλλονται σε διαχωρισμό σε κλάσματα κυττάρων κατά τη διάρκεια του σταδίου παρασκευής και συλλέγονται πυρηνοποιημένα κύτταρα χωρίς πρόσμιξη ερυθροκυττάρων.

Μεταμόσχευση αιμοποιητικών βλαστικών κυττάρων αίματος ομφάλιου λώρου

Στα τέλη της δεκαετίας του 80 - στις αρχές του 90 του περασμένου αιώνα διαπιστώθηκε ότι το αίμα του ομφάλιου λώρου που παρέχει το έμβρυο κατά τη διάρκεια της εγκυμοσύνης χαρακτηρίζεται από υψηλή περιεκτικότητα σε αιματοποιητικά βλαστοκύτταρα. Η σχετική απλότητα λήψης κυττάρων αίματος από τον ομφάλιο λώρο και η απουσία προφανών ηθικών προβλημάτων προωθούν τη χρήση βλαστικών κυττάρων ομφαλοπλακουντιακού αίματος στην πρακτική ιατρική. Η πρώτη επιτυχής μεταμόσχευση αίματος ομφάλιου λώρου σε ένα παιδί με αναιμία Fanconi χρησίμευσε ως σημείο εκκίνησης για τη διεύρυνση του όγκου της μεταμόσχευσης βλαστοκυττάρων αίματος ομφάλιου λώρου και τη δημιουργία ενός συστήματος για την παροχή τράπεζας. Στο παγκόσμιο σύστημα τραπεζών αίματος ομφάλιου λώρου, το μεγαλύτερο είναι το κέντρο της New York για το αίμα του πλακούντα, το οποίο βρίσκεται στον ισολογισμό των Εθνικών Ινστιτούτων Υγείας. Ο αριθμός των αποθηκευμένων δειγμάτων αίματος ομφάλιου λώρου σε αυτήν την τράπεζα προσεγγίζει τα 20 LLC. Ο αριθμός των παραληπτών (κυρίως των παιδιών) αυξάνεται επίσης και έχει πραγματοποιηθεί επιτυχής μεταμόσχευση. Σύμφωνα με το υπουργείο Υγείας των ΗΠΑ, η περίοδος μη υποτροπής της μετα-μεταμοσχευτικής ζωής των αποδεκτών αίματος ομφάλιου λώρου HSC έχει ήδη ξεπεράσει τα 10 χρόνια.

Αυτό δεν αποτελεί έκπληξη, καθώς πολυάριθμες μελέτες του αιμοποιητικού δυναμικού του αίματος του ομφάλιου λώρου έχουν δείξει ότι η ποσότητα και η ποιότητα των νωρίτερο βλαστικών κυττάρων, όχι μόνο δεν είναι κατώτερη από ένα ανθρώπινου μυελού των οστών ενηλίκων, αλλά επίσης και από ορισμένα μέτρα που υπερβαίνει. Μια υψηλότερη πολλαπλασιαστικό δυναμικό των βλαστικών κυττάρων αίματος ομφάλιου λώρου προκάλεσε αναπτυξιακές κυτταρικής σηματοδότησης χαρακτηριστικά, η παρουσία των υποδοχέων επί HSCs σε συγκεκριμένους αυξητικούς παράγοντες, η ικανότητα των κυττάρων του αίματος του ομφάλιου λώρου να αυτοκρινή παραγωγή των αυξητικών παραγόντων, το μεγάλο μέγεθος και το μήκος των τελομερών.

Έτσι, γονιδιωματικές και φαινοτυπικά χαρακτηριστικά των αιμοποιητικών βλαστικών κυττάρων των λώρου προδικάζει ωστόσο αίματος ποιότητα εμφύτευση υψηλό δυναμικό ανάκτησης αιματοποιητικών δότη στον δέκτη.

Πλεονεκτήματα των αιματοποιητικών βλαστοκυττάρων του αίματος του ομφάλιου λώρου

Ανάμεσα στα πραγματικά οφέλη από τη χρήση λώρου αιμοποιητικών αρχέγονων κυττάρων του αίματος για μεταμόσχευση σε σχέση με άλλες πηγές αιμοποιητικών κυττάρων θα πρέπει να σημειωθεί σχεδόν μηδενικό κίνδυνο για την υγεία του δότη (εάν δεν θεωρούνται ως τέτοια πλακούντα), ενώ εξαλείφεται η ανάγκη της γενικής αναισθησίας. Η χρήση της μεταμόσχευσης ομφάλιο λώρο των κυττάρων του αίματος διογκώνεται οφείλεται εν μέρει από HLA-συμβατό σύστημα μοσχεύματος (ασυμβατότητες από ένα έως τρία αντιγόνα). Η τεχνική της μακροπρόθεσμης αποθήκευσης των αιμοποιητικών κυττάρων αίματος ομφάλιου λώρου σε κατεψυγμένη κατάσταση, η οποία αυξάνει την πιθανότητα απόκτησης σπάνιων HLA-τύπου και μειώνει το χρόνο αναζήτησης HLA-συμφωνημένα αλλογενή μεταμόσχευση. Ταυτόχρονα, ο κίνδυνος ανάπτυξης ορισμένων λανθάνουσων λοιμώξεων που μεταδίδονται από τη διαδρομή μετάδοσης μειώνεται σημαντικά. Επιπλέον, υπάρχει μια φθηνή μορφή βιολογικής ασφάλειας ζωής σε συνδυασμό με τη δυνατότητα χρήσης κυττάρων αίματος ομφάλιου λώρου για αυτόλογη μεταμόσχευση.

Ωστόσο, επειδή μικρούς όγκους αίματος που μπορούν να συλλέγονται από τον πλακούντα (κατά μέσο όρο όχι περισσότερο από 100 ml) στο προσκήνιο το πρόβλημα της απόκτησης της μέγιστης δυνατής ποσότητας αίματος από τη φλέβα του ομφάλιου λώρου σε αυστηρή συμμόρφωση με τους όρους της ελάχιστης κίνδυνος βακτηριακής μόλυνσης των παραγώγων δειγμάτων αίματος ομφάλιου λώρου.

Τα πρωτόγονα αιμοποιητικά κύτταρα από το αίμα του ομφάλιου λώρου γενικά ταυτοποιείται από την παρουσία στην επιφάνειά glikofosfoproteina CD34 τους, και βάσει των λειτουργικών ιδιοτήτων τους με την εξέταση της κλωνογόνο σχηματισμό δοκιμασία ή αποικιών in vitro. Συγκριτική ανάλυση έδειξε ότι σε αίμα του ομφάλιου λώρου και του μυελού των οστών μέγιστη περιεκτικότητα των CD34-θετικών μονοπύρηνων κυττάρων στο κλάσμα είναι αντίστοιχα 1,6 και 5,0%, το ανώτατο επίπεδο των μονάδων σχηματισμού αποικιών σε ένα υποπληθυσμό κυττάρων CD34 + - 80 και 25%, συνολική απόδοση κλωνοποίησης των CD34 + β-κύτταρα - 88 και 58%, η μέγιστη κυττάρων με υψηλό δυναμικό πολλαπλασιασμού (ΗΡΡ-ΟΡΟ εις -populyatsii CD34 +) που σχηματίζουν αποικίες - 50 και 6,5%. Θα πρέπει να προστεθεί ότι η αποτελεσματικότητα κλωνοποίησης των CD34 + CD38-κυττάρων και την ικανότητα να αποκρίνονται σε διέγερση κυτοκίνης επίσης υψηλότερη σε αιμοποιητικά βλαστικά κύτταρα του αίματος του ομφάλιου λώρου.

Συνδυασμός φαινοτυπική αντιγόνα Thy-1, CD34 και CD45RA επιβεβαιώνει την υψηλή πολλαπλασιαστική ικανότητα των αιμοποιητικών κυττάρων αίματος ομφάλιου λώρου, και έκφραση των τριών αντιγόνων στην επιφάνεια των κυττάρων αίματος ομφάλιου λώρου υποδεικνύει ότι ανήκουν στην βλαστικών κυττάρων. Επιπλέον, έχει διαπιστωθεί ότι το ομφαλοπλακουντιακό αίμα περιέχει κύτταρα με φαινότυπο CD34 + που δεν έχουν δείκτες γραμμικής διαφοροποίησης. Επίπεδο σε υποπληθυσμούς κυττάρων αίματος ομφάλιου λώρου με το προφίλ φαινοτυπικής των CD34 + / Lin είναι περίπου 1% του συνολικού αριθμού των CD34-θετικών κυττάρων. Τα αιμοποιητικά προγονικά κύτταρα να οδηγήσουν σε αίμα λώρου ως λεμφοειδείς κυτταρικές σειρές, και έναν αριθμό γραμμικών πολυδύναμων μυελοειδούς κυτταρικής διαφοροποίησης, η οποία δείχνει επίσης ότι ανήκουν στα βλαστικά κύτταρα.

Όπως αναφέρθηκε ήδη, οι ουσιαστικές διαφορές μεταξύ του μυελού των οστών και το αίμα του ομφάλιου λώρου είναι σε μια ποσότητα που λαμβάνεται με μία διαδικασία δειγματοληψίας που χρησιμοποιούνται για μεταμόσχευση των αιμοποιητικών κυττάρων. Όταν η απώλεια μεταμόσχευση μυελού των οστών της κυτταρικής μάζας κατά τη διαδικασία διαχωρισμού, κρυοσυντήρηση, απόψυξη και τις δοκιμές είναι επιτρεπτοί στο εύρος 40-50%, τα κύτταρα του αίματος λώρου τέτοια απώλεια είναι πολύ σημαντική, δεδομένου ότι κατά τη χρήση του ανεπαρκούς αριθμού μεταμόσχευσης HSC μπορεί να είναι ανυπόφορη. Σύμφωνα με G. Kogler et al (1998), για την κυτταρική μεταμόσχευση στον δέκτη σωματικό βάρος 10 kg δυναμικό μεταμόσχευσης (συνολικός αριθμός των συλλεγέντων δειγμάτων αίματος ομφάλιου λώρου - 2098) μπορεί να είναι όλα τα δείγματα αίματος του ομφάλιου λώρου, το σωματικό βάρος 35 kg - 67%, και μόνο 25% των δειγμάτων θα παρέχει αποτελεσματική μεταμόσχευση σε ασθενείς με σωματικό βάρος 50-70 kg. Αυτή η κλινική κατάσταση αποδεικνύει την ανάγκη για τη βελτιστοποίηση και τη βελτίωση της αποτελεσματικότητας των υφιστάμενων μεθόδων δειγματοληψίας, την αναπαραγωγή και την αποθήκευση των ομφάλιου κυττάρων αίματος ομφάλιου λώρου. Ως εκ τούτου, τα ζητήματα της τυποποίησης των μεθόδων δειγματοληψίας, δοκιμή, ο διαχωρισμός και η κρυοσυντήρηση του αίματος ομφάλιου λώρου είναι τώρα συζητείται ευρέως στη βιβλιογραφία για τη δημιουργία τραπεζών αίματος, η χρήση της στην κλινική, καθώς και τον καθορισμό των όρων και συνθηκών αποθήκευσης των αιμοποιητικών αρχέγονων κυττάρων του αίματος λώρου.

[7], [8], [9],

Η χρήση αιματοποιητικών βλαστικών κυττάρων αίματος ομφάλιου λώρου στην ιατρική

Συνήθως, μπορούν να απομονωθούν μέχρι και ¹⁰⁶ αιμοποιητικά βλαστοκύτταρα από το αίμα του ομφάλιου λώρου , σπάνια περισσότερο. Ως εκ τούτου, μέχρι σήμερα παραμένει αναπάντητο το ερώτημα σχετικά με την επάρκεια της ποσότητας του αίματος του ομφάλιου λώρου αιμοποιητικών βλαστικών κυττάρων για την αποκατάσταση της αιμοποίησης ενήλικα παραλήπτη. Οι γνωμοδοτήσεις για το θέμα αυτό χωρίστηκαν. Μερικοί ερευνητές πιστεύουν ότι αυτή η ποσότητα είναι επαρκής για τα παιδιά μεταμόσχευση, αλλά πολύ μικρή για να μεταμοσχεύσει ενήλικα άνθρωπο, για την οποία η χορήγηση είναι βέλτιστη (7-10) × 10 ⁶ κύτταρα CD34-θετικών ανά 1 kg σωματικού βάρους - όρο 7 × 10 ⁸ ανά μόσχευμα. Από αυτούς τους υπολογισμούς προκύπτει ότι ένα δείγμα ομφάλιου λώρου περιέχει 700 φορές λιγότερα αιματοποιητικά βλαστοκύτταρα από αυτά που απαιτούνται για μια μεταμόσχευση σε έναν ενήλικα ασθενή. Ωστόσο, μια τέτοια ποσοτική αξιολόγηση γίνεται κατ 'αναλογία με τον αριθμό των κυττάρων του μυελού των οστών μεταγγίζονται και αγνοεί πλήρως τις αναπτυξιακά χαρακτηριστικά της αιμοποίησης.

Ειδικότερα, αγνοεί το γεγονός ότι το υψηλότερο πολλαπλασιαστική ικανότητα των αιμοποιητικών βλαστικών κυττάρων αίματος ομφάλιου λώρου σε σύγκριση με αιμοποιητικά προγονικά κύτταρα του μυελού των οστών. Τα αποτελέσματα του δυναμικού σχηματισμού αποικιών in vitro μελέτη δείχνουν ότι μία εφάπαξ δόση αίματος ομφάλιου λώρου μπορεί να παρέχει ανασύσταση της αιματοποίησης του ενήλικα δέκτη. Από την άλλη πλευρά, δεν πρέπει να ξεχνάμε ότι ο αριθμός των HSCs μειώνεται ακόμη και κατά τη διαδικασία της εμβρυϊκής ανάπτυξης: το περιεχόμενο των CD34-θετικών κυττάρων στο αίμα του ομφάλιου λώρου είναι γραμμικά μειώνεται 5 φορές σε μία περίοδο 20 εβδομάδων (το αίμα για τη μελέτη ελήφθη σε περίπτωση πρόωρου τερματισμού της κύησης) έως 40 εβδομάδες κύησης (η περίοδος των φυσιολογικών γεννήσεων), η οποία συνοδεύεται από μια παράλληλη, μόνιμη αύξηση της έκφρασης γραμμικών δεικτών κυτταροδιαφοροποίησης.

Λόγω της έλλειψης τυποποιημένης προσέγγισης για τον ποσοτικό προσδιορισμό σε δείγματα αίματος ομφάλιου λώρου των προγονικών κυττάρων διαμάχη για την βέλτιστη δόση των αιμοποιητικών βλαστικών κυττάρων του ομφάλιου αίματος συνεχίζεται. Μερικοί ερευνητές πιστεύουν ότι καθώς η επιλογή κριτηρίων των δειγμάτων αίματος του ομφάλιου λώρου μπορούν να χρησιμοποιηθούν τον αριθμό των εμπύρηνων κυττάρων και μονοπύρηνων κυττάρων, να υπολογίσει εκ νέου στο σωματικό βάρος του αποδέκτη, δηλαδή, τη δόση τους. Μερικοί συγγραφείς πιστεύουν ότι το ελάχιστο ποσοτικό όριο των κυττάρων CD34 +, ακόμη και για τη διεξαγωγή αυτόλογης μεταμόσχευσης HSC, είναι 2 x ¹⁰⁶ / kg. Η αύξηση της δόσης των αιμοποιητικών κυττάρων σε 5 × 10 ⁶ κύτταρα / kg (συνολικά 2,5) παρέχει ήδη ένα πιο κατάλληλο για πρώιμη περίοδο μετά τη μεταμόσχευση, μειώνει τη συχνότητα εμφάνισης των λοιμωδών επιπλοκών και συντομεύει την περίοδο της προληπτικής θεραπείας με αντιβιοτικά.

Σύμφωνα με τον Ε Gluckman et al (1998) στην αιματολογία για την επιτυχή μεταμόσχευση των κυττάρων του αίματος του ομφάλιου λώρου είναι η εισαγωγή τουλάχιστον 3,7 × 10 ⁷ εμπύρηνα κύτταρα ανά 1 kg σωματικού βάρους του λήπτη. Με τη μείωση της δόσης των αιμοποιητικών βλαστικών κυττάρων σε 1 × 10 ⁷ ή μικρότερο των εμπύρηνων κυττάρων ανά 1 kg σωματικού βάρους του ασθενούς και τον κίνδυνο αποτυχίας του μοσχεύματος αυξάνει υποτροπιάζουσες καρκίνων του αίματος δραματικά. Θα πρέπει να αναγνωριστεί ότι ο ελάχιστος αριθμός προγονικών κυττάρων που απαιτούνται για την ταχεία ανάκτηση της αιμοποίησης μετά από μεταμόσχευση GSG δεν είναι ακόμη γνωστή. Θεωρητικά αυτό μπορεί να επιτευχθεί χρησιμοποιώντας ένα μονό κύτταρο, αλλά σε μεταμόσχευση μυελού των οστών κλινικές ταχεία και σταθερή εμφύτευση εγγυημένη μετάγγιση τουλάχιστον (1-3) × 10 ⁸ εμπύρηνα κύτταρα ανά 1 kg σωματικού βάρους του ασθενούς.

Μία πρόσφατη λεπτομερής μελέτη για τον προσδιορισμό της βέλτιστης ποσότητας HSC στην ογκοενατολογία περιελάμβανε την παρατήρηση ασθενών των τριών ομάδων που απομονώθηκαν ανάλογα με την περιεκτικότητα των CD34-θετικών κυττάρων στο υλικό μεταμόσχευσης. Οι ασθενείς της πρώτης ομάδας έλαβαν (3-5) χ ¹⁰⁶ κύτταρα / kg. Η δόση του HSC σε ασθενείς της δεύτερης ομάδας ήταν (5-10) χ ¹⁰⁶ κύτταρα / kg και οι ασθενείς της τρίτης ομάδας έλαβαν μεταμόσχευση περισσότερο από 10 χ ¹⁰⁶ κύτταρα CD34 + / kg. Τα καλύτερα αποτελέσματα παρατηρήθηκαν στην ομάδα των παραληπτών που έλαβαν μεταμόσχευση με τον αριθμό των CD34-θετικών κυττάρων ίσων με (3-5) χ ¹⁰⁶ / kg. Με αύξηση της δόσης των μεταμοσχευμένων κυττάρων πάνω από 5 × ¹⁰⁶ / kg, δεν προσδιορίστηκαν στατιστικά σημαντικά οφέλη. Έτσι πολύ μεγάλες HSCs περιεχόμενο στο μόσχευμα (> 10 χ χ 10 ⁶ / kg) συσχετίστηκε με μια σημαντική ποσότητα των υπολειμματικών επανέγχυση των κυττάρων όγκου, οδηγώντας σε υποτροπή της νόσου. Δεν υπήρχε άμεση σχέση μεταξύ του αριθμού των μεταμοσχευμένων αλλογενών προγονικών κυττάρων και της ανάπτυξης της αντίδρασης "μοσχεύματος έναντι ξενιστή".

Η συσσωρευμένη παγκόσμια εμπειρία της μεταμόσχευσης του αίματος του ομφάλιου λώρου HSC επιβεβαιώνει το υψηλό δυναμικό αποκατάστασης. Ο ρυθμός εμφύτευσης της μεταμόσχευσης αίματος ομφάλιου λώρου συσχετίζεται με τον αριθμό των εισαγόμενων πυρηνωμένων κυττάρων. Τα καλύτερα αποτελέσματα παρατηρούνται με μεταμόσχευση 3 × 10 ⁷ / kg, ενώ για τον μυελό των οστών αυτή η δόση είναι 2 × 10 ⁸ / kg. Σύμφωνα με τα στοιχεία των κέντρων συντονισμού, στο τέλος του 2000 έγιναν 1200 μεταμοσχεύσεις κυττάρων αίματος ομφάλιου λώρου παγκοσμίως, κυρίως από συγγενείς δότες (83%). Προφανώς, το αίμα ομφάλιου λώρου θα πρέπει να θεωρείται εναλλακτική λύση για τον μεταβολισμό του μυελού των οστών σε ασθενείς με αιμοβλαστώσεις.

Ωστόσο, νεογνική φύση Cordova πηγή αιμοποιητικών ιστών ενθαρρύνοντας λόγω της παρουσίας των λειτουργικών χαρακτηριστικών των GCW του. Ωστόσο, μόνο η κλινική εμπειρία μπορεί να δώσει μια απάντηση στο ερώτημα της επάρκειας ενός δείγματος αίματος από τον ομφάλιο λώρο για ενήλικα αιμοποιητικά ανασύσταση του παραλήπτη με απλασία της αιμοποίησης. Μεταμόσχευση κυττάρων αίματος ομφάλιου λώρου χρησιμοποιείται στη θεραπεία πολλών ασθενειών του όγκου και μη όγκου φύσης: λευχαιμίες και μυελοδυσπλαστικά σύνδρομα, μη-Hodgkin λέμφωμα, και νευροβλάστωμα, απλαστική αναιμία, συγγενή αναιμία Fanconi και Diamond μαύρο ανεμιστήρα, ανεπάρκεια προσκόλλησης λευκοκυττάρων, σύνδρομο Barr, σύνδρομο Gunther ασθένεια Harlera, θαλασσαιμία .

Η προσεκτική προσοχή και η ξεχωριστή έρευνα αξίζουν τις ανοσολογικές πτυχές της μεταμόσχευσης αιμοποιητικών κυττάρων του αίματος του ομφάλιου λώρου. Έχει αποδειχθεί ότι στην περίπτωση της μεταμόσχευσης βλαστικών κυττάρων αίματος ομφάλιου λώρου από δότες με ατελή αποτελέσματα μεταμόσχευση HLA-συμφωνημένα είναι αρκετά ικανοποιητική, ότι, σύμφωνα με τους συγγραφείς, υποδεικνύοντας μία μείωση της αρτηριακής λώρου ανοσοαντιδραστικότητα από το μυελό των οστών.

Μια λεπτομερής μελέτη της κυτταρικής σύνθεσης του αίματος του ομφάλιου λώρου έδειξε χαρακτηριστικά και των δύο φαινοτυπικών φάσματος των τελεστών κυττάρων του ανοσοποιητικού συστήματος και λειτουργική δραστηριότητά τους, επιτρέποντας να εξετάσουν αίματος ομφάλιου λώρου ως πηγή HSCs με σχετικά χαμηλό κίνδυνο αντίδρασης «μοσχεύματος κατά ξενιστή». Επιπλέον χαρακτηριστικά Λειτουργική ανωριμότητα κύτταρα αίματος ομφάλιου λώρου ανοσοϊκανά πρέπει να σημειωθεί ανισορροπία της παραγωγής κυτοκίνης και μία μείωση στην ευαισθησία σε κυτοκίνες νέα ρύθμιση της ανοσοαπόκρισης. Που προκύπτει ως αποτέλεσμα της αναστολής της δραστικότητας των κυτταροτοξικών λεμφοκυττάρων θεωρείται ένας παράγοντας που συμβάλλει στο σχηματισμό της ανοσολογικής ανοχής σε μεταμοσχευμένα αιματοποιητικό ιστό. Σε έναν πληθυσμό λεμφοκυττάρων αίματος λώρου, σε αντίθεση με το αίμα και μυελό των οστών περιφερικού από ενήλικες δότες, κυριαρχείται ανενεργά, ανώριμα κύτταρα και κατασταλτικά κύτταρα. Αυτό δείχνει μειωμένη διαθεσιμότητα T-λεμφοκυττάρων αίματος ομφάλιου λώρου στην ανοσοαπόκριση. Ένα σημαντικό χαρακτηριστικό του πληθυσμού μονοκυττάρων κυττάρων αίματος ομφάλιου λώρου είναι η χαμηλή περιεκτικότητα σε λειτουργικά πλήρη και δραστικά κύτταρα που παρουσιάζουν αντιγόνο.

Από τη μία πλευρά, ένας χαμηλός βαθμός ωριμότητας των τελεστών κυττάρων του ανοσοποιητικού συστήματος σε αναγνώσεις αίματος ομφάλιου λώρου επεκτείνεται στην χρήση του στην κλινική, δεδομένου ότι αυτά τα χαρακτηριστικά επιτρέπουν την μείωση της έντασης των ανοσοποιητικού σύγκρουσης μεταξύ κυττάρων δότη και δέκτη. Αλλά, από την άλλη πλευρά, γνωρίζουμε την ύπαρξη συσχέτισης μεταξύ του βαθμού της αντίδρασης «μοσχεύματος έναντι ξενιστή» και μεταμόσχευση αντικαρκινική δράση, δηλαδή, το αποτέλεσμα της ανάπτυξης των «μοσχεύματος κατά λευχαιμίας». Σε σχέση με αυτό, διεξήχθη μια μελέτη της αντινεοπλασιακής κυτταροτοξικότητας των κυττάρων αίματος του ομφάλιου λώρου. Τα αποτελέσματα υποδεικνύουν ότι, παρά την πραγματικά εξασθενημένο ανοσοποιητικό απόκριση των κυττάρων αίματος ομφάλιου λώρου σε αντιγονική διέγερση, ενεργοποιείται στην πρώτη θέση είναι τα φυσικά φονικά κύτταρα και τα κύτταρα killeropodobnymi που εμπλέκονται ενεργά στους μηχανισμούς της εφαρμογής της κυτταροτοξικότητας κατά των όγκων. Επιπλέον, σε υποπληθυσμούς λεμφοκυττάρων αίματος λώρου βρέθηκαν με τον φαινότυπο CD16 + CD56 + και CD16 «TCRA / p +. Υποτίθεται ότι αυτά τα κύτταρα είναι σε ενεργοποιημένη μορφή εφαρμόσουν αντίδραση» μοσχεύματος-έναντι-λευχαιμίας».

Στο Ινστιτούτο Ογκολογίας, Ακαδημίας Ιατρικών Επιστημών της Ουκρανίας κρυοσυντηρημένων αιμοποιητικών κυττάρων από αίμα ομφάλιου λώρου χορηγήθηκαν σε ασθενείς με καρκίνο με επίμονη υποπλασία της αιμοποίησης λόγω χημειοθεραπεία και ακτινοθεραπεία. Σε αυτούς τους ασθενείς, η μεταμόσχευση των αιμοποιητικών βλαστικών κυττάρων αίματος ομφάλιου λώρου αποτελεσματικά αποκατασταθεί καταπίεση του αίματος, όπως αποδεικνύεται από εμμένουσα αύξηση των ώριμων σχηματίζεται στοιχείων στο περιφερικό αίμα, καθώς επίσης και την αύξηση των δεικτών που χαρακτηρίζουν την κατάσταση της κυτταρικής και χυμικής ανοσίας. Σταθερότητα repopulyatsionnogo επίδραση μετά από μεταμόσχευση αιμοποιητικών κυττάρων αίματος ομφάλιου λώρου επιτρέπει την συνέχιση της ακτινοβολίας και της χημειοθεραπείας, χωρίς διακοπή της θεραπείας. Υπάρχουν στοιχεία από ασθενείς με καρκίνο του αίματος ομφάλιου λώρου βλαστικών κυττάρων μεγαλύτερη αλλομοσχεύματος απόδοση: ο ετήσιος κίνδυνος επανεμφάνισης ενός όγκου κατά τη χρήση τους ήταν 25% έναντι 40% σε ασθενείς με μεταμοσχευμένο γονίδιο αλλογενούς μυελού των οστών.

Ο μηχανισμός δράσης των κρυοσυντηρημένων βλαστοκυττάρων αίματος ομφάλιου λώρου θα πρέπει να θεωρηθεί ως το αποτέλεσμα μιας χυμικής διέγερσης των παραληπτών αιμοποίησης που προκαλείται από την μοναδική ικανότητα της νεογνικής κυττάρων να αυτοκρινή παραγωγή αιμοποιητικών αυξητικών παραγόντων, καθώς και ως συνέπεια της προσωρινής μεταμόσχευση των κυττάρων του δότη (ως επιβεβαίωση - μια σημαντική αύξηση της περιεκτικότητας του περιφερικού αίματος εμβρυϊκής αιμοσφαιρίνης παραλήπτη 7-15 ου ημέρα μετά από μετάγγιση αίματος σε σύγκριση με την αρχική τιμή). Απουσία σε αποδέκτες αντιδράσεις μετά από μετάγγιση αίματος ομφάλιου λώρου - αποτέλεσμα της σχετικής ανοχής του ανοσοκυττάρων, καθώς επίσης και το κριτήριο εμπιστοσύνη η χρησιμότητα των κρυοδιατηρημένων βιολογικού υλικού.

Τα προγονικά κύτταρα Τ λεμφοκυττάρων αίματος λώρου δολοφόνος ικανή να ενεργοποιείται υπό την επίδραση της εξωγενούς διέγερσης κυτοκίνης που χρησιμοποιείται για την ανάπτυξη νέων ex νίνο και ίη νίνο μεθόδους επαγωγής αντι-καρκινικά κύτταρα κυτταροτοξικών λεμφοειδή για επακόλουθη ανοσοθεραπεία μεταμόσχευση. Επιπλέον, η «ανωριμότητα» του γονιδιώματος των κυττάρων του ανοσοποιητικού ομφάλιου αίματος επιτρέπει τη χρήση τους για την ενίσχυση της κατά του όγκου δραστικότητα με μοριακή μοντελοποίηση.

Σήμερα, το ομφαλοπλακίδιο έχει βρεθεί σε ευρεία εφαρμογή κυρίως στην παιδιατρική αιματολογία. Σε παιδιά με οξεία λευχαιμία αλλομεταμόσχευση των αιμοποιητικών βλαστικών κυττάρων αίματος ομφάλιου λώρου σε σύγκριση με αλλομοσχεύματα του μυελού των οστών, μειώνει σημαντικά τη συχνότητα εμφάνισης της αντίδρασης «μοσχεύματος κατά ξενιστή». Ωστόσο, πρέπει να σημειωθεί πάνω από μια μακρά περίοδο ουδετεροπενία και θρομβοκυτταροπενία, και δυστυχώς, ένα υψηλότερο επίπεδο της θνησιμότητας 100 ημερών μετά τη μεταμόσχευση. Μία μεγαλύτερη περίοδος ανάκαμψης στα κοκκιοκύτταρα και τα αιμοπετάλια του περιφερικού αίματος μπορεί να οφείλεται σε ανεπαρκή διαφοροποίηση των επιμέρους υποπληθυσμών των CD34 θετικών κυττάρων του αίματος του ομφάλιου λώρου, όπως αποδεικνύεται από το χαμηλό επίπεδο απορρόφησης των ραδιενεργών ροδαμίνη και χαμηλή έκφραση των αντιγόνων CD38 στην επιφάνεια τους.

Ταυτόχρονα, η μεταμόσχευση των αιμοποιητικών βλαστικών κυττάρων του ομφάλιου αίματος των ενήλικων ασθενών, πραγματοποιήθηκε λόγω έλλειψης τόσο ενός συμβατού μη συνδεδεμένους δότη του μυελού των οστών, καθώς και ευκαιρίες για την κινητοποίηση αυτόλογα HSC έδειξαν υψηλή ετήσια ελεύθερη υποτροπής επιβίωση σε ασθενείς ηλικίας κάτω των 30 ετών (73%) . Επέκταση εύρος ηλικίας αποδέκτη (18-46 ετών) μείωσε την επιβίωση σε 53%.

Ποσοτική ανάλυση των κυττάρων με τον φαινότυπο CD34 + του μυελού των οστών και το καλώδιο του αίματος έδειξαν υψηλότερη (3,5 φορές) το περιεχόμενό τους στο μυελό των οστών, αλλά το αίμα του ομφάλιου λώρου έδειξαν σημαντική υπεροχή των κυττάρων με φαινοτυπική προφίλ των CD34 + HLA-DR .Izvestno, chtokletkikrovisimmunologicheskimi δείκτες CD34 + HLA-DR πολλαπλασιάζονται περισσότερο δραστικά από τα κύτταρα με ανοσοφαινότυπο CD34 + HLA-DR +, όπως επιβεβαιώνεται σε πειραματικές μελέτες της ανάπτυξης της μακροχρόνιας καλλιέργειας αιμοποιητικών κυττάρων in vitro. Πρωτόγονες κυττάρου πρόγονοι με το φαινότυπο CD34 + CD38 που περιέχονται στο αίμα του ομφάλιου λώρου και του μυελού των οστών, αλλά ομφάλιου λώρου κύτταρα του αίματος με το δείκτη που CD34 + CD38 έχουν υψηλότερη κλωνογονική ενεργότητα από αιμοποιητικά κύτταρα του ίδιου φαινοτύπου, που απομονώνονται από ενήλικο μυελό των οστών του δότη. Επιπλέον, κύτταρα αίματος ομφάλιου λώρου με CD34 + CD38 ανοσοφαινότυπο θα πολλαπλασιάζονται σε απόκριση προς διέγερση με κυτοκίνες (IL-3, IL-6, G-CSF) και αναπαράγει 7 φορές περισσότερες αποικίες στα μακροχρόνιες καλλιέργειες από κύτταρα μυελού των οστών.

Τράπεζες βλαστοκυττάρων αίματος ομφάλιου λώρου

Για τη σωστή ανάπτυξη του νέου γηπέδου της πρακτικής ιατρικής - μεταμόσχευση βλαστικών κυττάρων ομφαλοπλακουντιακού αίματος, καθώς και να πραγματοποιήσει μεταμοσχεύσεις αιμοποιητικών βλαστικών κυττάρων του μυελού των οστών, θα πρέπει να έχετε ένα εκτεταμένο δίκτυο των τραπεζών αίματος, τα οποία έχουν ήδη καθιερωθεί στις ΗΠΑ και την Ευρώπη. Τα ενδοκρατικά δίκτυα τραπεζών αίματος ομφάλιου λώρου ενώνονται από την Ένωση Netcord Banks. Η σκοπιμότητα της δημιουργίας ενός διεθνούς ένωσης τραπεζών ομφαλοπλακουντιακού αίματος καθορίζεται από το γεγονός ότι για να εκτελέσει άσχετα μεταμοσχεύσεις χρειαστείτε ένα μεγάλο αριθμό δειγμάτων αίματος από τον ομφάλιο λώρο δακτυλογραφημένες, επιτρέποντας να επιλέξετε το HLA-πανομοιότυπο δότη. Μόνο η δημιουργία ενός συστήματος τραπεζών με την αποθήκευση δειγμάτων αίματος διαφόρων τύπων HLA σε αυτά μπορεί πραγματικά να λύσει το πρόβλημα της εύρεσης του απαραίτητου δότη. Η οργάνωση ενός τέτοιου συστήματος τραπεζών αίματος ομφάλιου λώρου απαιτεί την προκαταρκτική ανάπτυξη δεοντολογικών και νομικών κανόνων που συζητούνται επί του παρόντος σε διεθνές επίπεδο.

Για να δημιουργήσετε τράπεζες αίματος ομφάλιου λώρου στην Ουκρανία, είναι απαραίτητο να επεξεργαστεί μια σειρά διατάξεων και εγγράφων.

Πρώτα απ 'όλα, αυτά είναι ζητήματα τυποποίησης των μεθόδων δειγματοληψίας, κλασματοποίησης και κατάψυξης αίματος ομφάλιου λώρου. Είναι απαραίτητο να ρυθμιστούν οι κανόνες συλλογής αίματος ομφάλιου λώρου σε νοσοκομεία, σύμφωνα με τις απαιτήσεις της ιατρικής δεοντολογίας, για να καθοριστεί το ελάχιστο ποσό των αίμα του ομφάλιου λώρου, το οποίο παρέχει μια επιτυχημένη μεταμόσχευση. Θα πρέπει να συγκρίνεται και τυποποίηση των διαφόρων κριτηρίων της αξιολόγησης της ποιότητας και του αριθμού των αιμοποιητικών προγονικών κυττάρων, καθώς και μέθοδοι HLA-πληκτρολόγηση και των μεθόδων διάγνωσης γενετικών και μολυσματικών νόσων που μπορούν να μεταδοθούν από την έγχυση των κυττάρων του αίματος του ομφάλιου λώρου που γενικά κριτήρια επιλογής υγιείς δότες. Αξίζει επίσης να συζητηθεί η δημιουργία ξεχωριστών εγκαταστάσεων αποθήκευσης για ορό, κύτταρα και ϋΝΑ που προέρχονται από αίμα ομφάλιου λώρου.

Είναι απολύτως απαραίτητο να οργανωθεί ένα δίκτυο πληροφορικών δεδομένων για αίμα ομφάλιου λώρου για την εφαρμογή της σχέσης με τα μητρώα των δωρητών μυελού των οστών. Για να αναπτυχθεί περαιτέρω η κυτταροπλαστική, θα πρέπει να αναπτυχθούν ειδικά πρωτόκολλα για τη σύγκριση των αποτελεσμάτων μεταμόσχευσης αίματος ομφάλιου λώρου και μεταμόσχευσης μυελού των οστών από συγγενείς με HLA και μη σχετιζόμενους δότες. Για την αντιμετώπιση ηθικά και νομικά προβλήματα της κλινικής χρήσης των κυττάρων του αίματος του ομφάλιου λώρου μπορεί να βοηθήσει την τυποποίηση εγγράφων, συμπεριλαμβανομένης της συγκατάθεσης των γονέων, καθώς και ανακοίνωση για τη μητέρα ή οι συγγενείς του παιδιού που προσδιορίζονται από τη γενετική ή / και μολυσματικές ασθένειες.

Ο καθοριστικός όρος για την ανάπτυξη της μεταμόσχευσης κυττάρων στην Ουκρανία θα είναι η έγκριση του Εθνικού Προγράμματος για τη δωρεά των βλαστικών κυττάρων και την ανάπτυξη της διεθνούς συνεργασίας με άλλες χώρες μέσω του Παγκόσμιου Συνδέσμου μυελού των οστών δότη (WMDA), το πρόγραμμα του μυελού των οστών του δότη Εθνική των ΗΠΑ (NMDP) και άλλων μητρώων.

Γενικεύοντας ακόμη σύντομο ιστορικό των αιμοποιητικών βλαστικών κυττάρων μεταμόσχευση αίματος ομφάλιου λώρου, σημειώνουμε ότι η πρώτη παραδοχή της δυνατότητας κλινική εφαρμογή αίματος από τον ομφάλιο λώρο, γίνονται στις αρχές της δεκαετίας του 70, επιβεβαιώθηκαν στα 80 έτη τα αποτελέσματα των πειραματικών μελετών σε ζώα, και το 1988 έτους έχει διενεργηθεί πρώτη μεταμόσχευση στον κόσμο των αιμοποιητικών κυττάρων από αίμα ανθρώπινου ομφάλιου λώρου, και στη συνέχεια άρχισε να αναπτύσσει ένα παγκόσμιο δίκτυο των τραπεζών ομφαλοπλακουντιακού αίματος. Μετά από 10 χρόνια, ο αριθμός των ασθενών με μεταμοσχευμένο αιμοποιητικά κύτταρα, ομφάλιου πλησιέστερα αίμα του ομφάλιου λώρου έως 800. Μεταξύ αυτών ήταν ασθενείς με διάφορες ασθένειες όγκων (λευχαιμία, λέμφωμα, στερεούς όγκους) και μη-όγκου (συγγενής ανοσοανεπάρκεια, αναιμία, ασθένειες που σχετίζονται με μεταβολικές διαταραχές) φύση.

Στο αίμα του ομφάλιου λώρου, το περιεχόμενο των πρώιμων και δεσμευμένων κυτταρικών προγόνων είναι υψηλότερο από το περιφερικό αίμα ενός ενήλικα. Με τον αριθμό των μονάδων κοκκιοκυττάρων-μακροφάγων που σχηματίζουν αποικίες και πολλαπλασιαστικό δυναμικό τους ομφαλικού αίματος είναι πολύ μεγαλύτερη από το περιφερικό αίμα ενηλίκων, ακόμη και μετά τη χορήγηση των αυξητικών παραγόντων. Σε μακροχρόνιες κυτταρικές καλλιέργειες in vitro, υπήρξε μια μεγαλύτερη πολλαπλασιαστική δραστηριότητα και βιωσιμότητα των κυττάρων αίματος του ομφάλιου λώρου από ότι τα κύτταρα μυελού των οστών. Οι κρίσιμες στιγμές στη μεταμόσχευση των βλαστικών κυττάρων αίματος ομφάλιου λώρου είναι αιμοποιητικά δυνητικός αριθμός και εμπύρηνα κύτταρα, η παρουσία λοίμωξης από κυτταρομεγαλοϊό, HLA-συμβατό δότη και του αποδέκτη, το σωματικό βάρος και την ηλικία του ασθενούς.

Ωστόσο, η μεταμόσχευση αιμοποιητικού αίματος από βλαστοκύτταρα θα πρέπει να θεωρείται ως εναλλακτική λύση στη μεταμόσχευση μυελού των οστών για τη θεραπεία σοβαρών ασθενειών του αίματος, ειδικά σε παιδιά. Κλινικά προβλήματα της μεταμόσχευσης των κυττάρων του αίματος του ομφάλιου λώρου σταδιακά επιλυθεί - υπάρχουν ήδη αρκετά αποδοτικές τεχνικές δειγματοληψίας, διαχωρισμού και κρυοσυντήρηση των κυττάρων αίματος ομφάλιου λώρου, εφόσον πληρούνται οι όροι για το σχηματισμό των τραπεζών αίματος ομφάλιου λώρου, οι μέθοδοι δοκιμών βελτιωμένη εμπύρηνα κύτταρα. Βέλτιστο διαχωρισμό κατά τη διάρκεια των μεγάλης κλίμακας αιμοποιητικών αίμα του ομφάλιου λώρου προπλάσματος βλαστικά κύτταρα στην εγκατάσταση των τραπεζών θα πρέπει να θεωρηθεί ως ένα διάλυμα 3% από ζελατίνη και 6% διάλυμα υδροξυαιθυλ-αμύλου.

Perehrestenko Ρ et αϊ (2001) ορθώς επισημαίνουν ότι η μεταμόσχευση των βλαστικών κυττάρων θα πρέπει να λάβει δικαιωματική θέση της στα σύνθετα θεραπευτικά μέτρα για την αντιμετώπιση της κατάθλιψης της αιμοποίησης των διαφόρων προελεύσεων, όπως το αίμα λώρου GSK διαφέρουν σε έναν αριθμό σημαντικών πλεονεκτημάτων, μεταξύ των οποίων σημαντική είναι η σχετική ευκολία της συγκομιδής, δεν υπάρχει κανένας κίνδυνος για το δότη, χαμηλή μόλυνση των νεογνών κυττάρων με ιούς και σχετικά χαμηλό κόστος της μεταμόσχευσης. Μερικοί συγγραφείς προτείνουν ότι η μεταμόσχευση του ομφάλιου κυττάρων αίματος ομφάλιου λώρου λιγότερο συχνά από ό, τι τα κύτταρα του μυελού των οστών συνοδεύεται από επιπλοκές που σχετίζονται με την αντίδραση του «μοσχεύματος έναντι ξενιστού», η οποία οφείλεται, κατά την άποψή τους, ένα ασθενές έκφραση στα κύτταρα αίματος του ομφάλιου λώρου των αντιγόνων HLA-DR και τους ανωριμότητα. Παρ 'όλα αυτά, ο κύριος πληθυσμός των εμπύρηνων κυττάρων του αίματος του ομφάλιου λώρου είναι Τ-λεμφοκύτταρα (SDZ-θετικά κύτταρα), των οποίων το περιεχόμενο είναι περίπου 50%, η οποία είναι 20% λιγότερο σε σχέση με το περιφερειακό αίμα ενός ενήλικα, αλλά οι διαφορές φαινοτυπική των υποπληθυσμών των Τ-κυττάρων από αυτά πηγές είναι ασήμαντες.

Μεταξύ των παραγόντων που επηρεάζουν άμεσα την επιβίωση των βλαστικών κυττάρων μεταμόσχευση αίματος ομφάλιου λώρου, πρέπει να σημειωθεί η ηλικία των ασθενών (τα καλύτερα αποτελέσματα δει σε αποδέκτες ηλικίας έως 5 ετών), η έγκαιρη διάγνωση της ασθένειας και μια μορφή λευχαιμίας (απόδοση είναι σημαντικά υψηλότερη σε οξεία λευχαιμία). Μεγάλη σημασία έχουν οι δόσεις πυρηνικών κυττάρων αίματος ομφάλιου λώρου, καθώς και η συμβατότητά τους με τον υποδοχέα HLA. Δεν είναι ανάλυση ατυχημάτων της κλινικής αποτελεσματικότητας της μεταμόσχευσης αίματος ομφάλιου λώρου GSK ίη Oncology και Αιματολογίας δείχνει τα καλύτερα αποτελέσματα θεραπείας χρησιμοποιώντας σχετικών μοσχεύματα: ενός έτους ελεύθερη νόσου επιβίωση σε αυτή την περίπτωση φθάνει το 63%, ενώ το άσχετο μεταμόσχευση - μόνο 29%.

Έτσι, η παρουσία ενός μεγάλου αριθμού των βλαστικών κυττάρων στο αίμα του ομφάλιου λώρου και υψηλή ικανότητα repopulyatsionnaya νεογνική αιμοποιητικά βλαστικά κύτταρα τα καθιστούν κατάλληλα για αλλογενή μεταμόσχευση σε ασθενείς με αιματολογικές κακοήθειες. Ωστόσο, σημειώστε ότι η ανακεφαλαίωση της αιμοποίησης μετά τη μεταμόσχευση των αιμοποιητικών βλαστικών κυττάρων αίματος ομφάλιου λώρου «τεντώνεται σε χρόνο»: αποκατάσταση του περιεχομένου σε ουδετερόφιλα περιφερειακού αίματος εμφανίζεται συνήθως προς το τέλος της 6η εβδομάδα, και φαινόμενο θρομβοκυτταροπενία εξαφανίζονται, συνήθως μετά από 6 μήνες. Επιπλέον, τα ανώριμα κύτταρα του αίματος του ομφάλιου λώρου του αίματος που σχηματίζουν δεν αποκλείει ανοσολογική σύγκρουση: σοβαρή πορεία της οξείας και χρόνιας αντίδρασης «μοσχεύματος κατά ξενιστή» που παρατηρείται αντιστοίχως σε 23 και 25% των αποδεκτών. Οι υποτροπές της οξείας λευχαιμίας μέχρι το τέλος του πρώτου έτους μετά τη μεταφύτευση ομφάλιου λώρου κύτταρα του αίματος που βρέθηκαν σε 26% των περιπτώσεων.

[10], [11]