Μεσεγχυματικά βλαστοκύτταρα

Μεταξύ των περιφερειακών βλαστικών κυττάρων, τα μεσεγχυματικά βλαστοκύτταρα (MSCs) κατέχουν μια ιδιαίτερη θέση, τα παράγωγα των οποίων αποτελούν τη στρωματική μήτρα όλων των οργάνων και ιστών του ανθρώπινου σώματος. Προτεραιότητα στην έρευνα της MSC ανήκει στους εκπροσώπους της ρωσικής βιολογίας.

Στη μέση του περασμένου αιώνα στο εργαστήριο του Friedenstein απομονώθηκε πρώτη ομοιογενή καλλιέργεια πολυδύναμων οστών στρωματικά αρχέγονα κύτταρα του μυελού. Μεσεγχυματικά βλαστικά κύτταρα προσκολλημένα σε ένα υπόστρωμα για μεγάλο χρονικό διάστημα διατηρείται ένα υψηλό ρυθμό πολλαπλασιασμού, και οι καλλιέργειες σε χαμηλή πυκνότητα σποράς μετά από στερέωση επί ενός υποστρώματος που σχηματίζεται από κλώνους ινοβλαστών κυττάρων που δεν έχουν δραστικότητα φαγοκυτταρικά. MSCs πολλαπλασιασμού Διακοπή ολοκληρωθεί αυθόρμητη διαφοροποίηση τους in vitro σε κύτταρα οστών, λίπος, χόνδρο, μυ ή του συνδετικού ιστού. Περαιτέρω μελέτες αποκάλυψαν οστεογόνο δυναμικό των ινοβλαστών ομοιάζουν με στρωματικά κύτταρα του μυελού των οστών διαφορετικών ειδών θηλαστικών, όπως επίσης και την δραστικότητα σχηματισμού αποικίας. Σε πειράματα in vivo απεδείχθη ότι τόσο έτερο- και ορθοτοπική μεταμόσχευση κυττάρων σχηματισμού αποικίας των ινοβλαστών έχει ολοκληρωθεί οστού, χόνδρου, και ινώδη λιπώδη ιστό σχηματισμού. Δεδομένου ότι οι στρωματικά αρχέγονα κύτταρα του μυελού των οστών που χαρακτηρίζονται από υψηλή ικανότητα για αυτο-ανανέωση και διαφοροποίηση της αντίστιξης μέσα στην ίδια κυτταρική γραμμή, που ονομάζονται πολυδύναμα μεσεγχυματικά προγονικά κύτταρα.

Πρέπει να σημειωθεί ότι για 45 χρόνια θεμελιώδους έρευνας των μεσεγχυματικών βλαστικών κυττάρων έχουν δημιουργηθεί πραγματικές συνθήκες για τη χρήση των παραγώγων τους στην κλινική πρακτική.

Σήμερα, δεν υπάρχει αμφιβολία ότι όλοι οι ιστοί του ανθρώπινου σώματος σχηματίζονται από τα βλαστοκύτταρα διαφορετικών κυτταρικών σειρών ως αποτέλεσμα διαδικασιών πολλαπλασιασμού, μετανάστευσης, διαφοροποίησης και ωρίμανσης. Ωστόσο, πιο πρόσφατα, πιστεύεται ότι τα βλαστοκύτταρα στο ενήλικο σώμα είναι ειδικά για τον ιστό, δηλαδή είναι ικανά να παράγουν εξειδικευμένες κυτταρικές σειρές μόνο των ιστών στους οποίους βρίσκονται. Αυτή η εννοιολογική κατάσταση διαψεύστηκε από τα γεγονότα μετασχηματισμού των αιμοποιητικών βλαστοκυττάρων όχι μόνο σε κυτταρικά στοιχεία περιφερικού αίματος αλλά και σε ωοειδή ηπατικά κύτταρα. Επιπλέον, και τα νευρικά βλαστοκύτταρα ήταν ικανά να προκαλέσουν τόσο νευρώνες και γλοιακά στοιχεία, όσο και έγκαιρα δεσμευμένες σειρές αιματοποιητικών προγονικών κυττάρων. Με τη σειρά τους, τα μεσεγχυματικά βλαστικά κύτταρα, που παράγουν συνήθως κυτταρικά στοιχεία του οστού, του χόνδρου και του λιπώδους ιστού, είναι ικανά να μετασχηματιστούν σε νευρικά βλαστοκύτταρα. Θεωρείται ότι κατά τη διαδικασία ανάπτυξης, φυσιολογικής και αποκαταστατικής αναγέννησης ιστών, μη δεσμευμένα προγονικά κύτταρα παράγονται από ιστικά αποθέματα στελεχών. Για παράδειγμα, η επισκευή των μυϊκών ιστών μπορεί να πραγματοποιηθεί μέσω μεσεγχυματικών βλαστοκυττάρων που μεταναστεύουν από τον μυελό των οστών στους σκελετικούς μύες.

Αν και τέτοια βλαστικά κύτταρα εγκάρσια εναλλαξιμότητα αναγνωρίζουν όχι όλους τους ερευνητές η δυνατότητα κλινική χρήση των μεσεγχυματικών βλαστικών κυττάρων ως πηγή για την κυτταρική μεταμόσχευση και φορέα κυττάρου των γενετικών πληροφοριών δεν αμφισβητείται ως βλαστικά κύτταρα πολυδύναμα στρωματικά του μυελού των οστών, η οποία μπορεί να είναι σχετικά εύκολο να απομονωθούν και να διαδώσει σε καλλιέργεια in vitro. Την ίδια στιγμή στην επιστημονική βιβλιογραφία συνεχίζει να εμφανίζεται εκθέσεις σχετικά με τις δυνατότητες των πολυδύναμων βλαστικών κυττάρων του στρώματος του μυελού των οστών. Όπως στοιχεία που παρουσιάζονται ερευνητικά πρωτόκολλα, τα οποία υπό την επίδραση των συγκεκριμένων επαγωγέων της δια-στρωματικών κυττάρων μυελού μετατρέπονται σε νευρικά κύτταρα, καρδιομυοκύτταρα και ηπατοκύτταρα. Ωστόσο, ορισμένοι επιστήμονες την ευκαιρία να επαν-ενεργοποίηση και γονιδιακή έκφραση κατά την πρώιμη εμβρυογένεση σε σοβαρή αμφιβολία. Την ίδια στιγμή, ο καθένας καταλαβαίνει ότι αν οι συνθήκες που επικρατούν για την επέκταση των πολυδύναμων μεσεγχυματικών βλαστικών κυττάρων για να πλειοδυναμία της ΟΚΕ στην αναγεννητική ιατρική και πλαστική επιλυθεί αυτόματα πολλά προβλήματα της ηθικής, της ηθικής, θρησκευτικής και νομικής φύσης. Επιπλέον, δεδομένου ότι στην περίπτωση αυτή η πηγή βλαστικών αναγεννητική ικανότητα του ασθενούς είναι αυτόλογα στρωματικά κύτταρα έχει λυθεί και το πρόβλημα της ανοσολογικής απόρριψης του κυτταρικού μοσχεύματος. Πόσο πραγματικές είναι αυτές οι προοπτικές, το προσεχές μέλλον θα δείξει.

[1], [2]

Χρήση μεσεγχυματικών βλαστικών κυττάρων στην ιατρική

Η χρήση κλινική των παραγώγων των μεσεγχυματικών βλαστικών κυττάρων σχετίζεται κατά κύριο λόγο με τη μείωση των ελαττωμάτων ιστού που προκαλείται από εκτεταμένη και βαθιά θερμική βλαβών του δέρματος. Προκλινικά πειραματική αξιολόγηση της καταλληλότητας των αλλογενών ινοβλαστών ομοιάζουν με μεσεγχυματικά βλαστικά κύτταρα για την αγωγή βαθέων εγκαυμάτων διεξήχθη. Έχει αποδειχθεί ότι οι μοιάζουν με ινοβλάστες του μυελού των οστών μεσεγχυματικά βλαστικά κύτταρα σχηματίζουν μία μονοστιβάδα στην καλλιέργεια, η οποία καθιστά δυνατό να μεταμοσχεύσει να βελτιστοποιηθεί η αναγέννηση της βαθιές πληγές εγκαύματος. Οι συγγραφείς σημειώνουν ότι παρόμοιες ιδιότητες έχουν τα εμβρυϊκά ινοβλάστες, αλλά η κλινική εφαρμογή των τελευταίων περιορίζεται στα υφιστάμενα ηθικά και νομικά προβλήματα. Ένα βαθύ θερμικό έγκαυμα με βλάβη σε όλα τα στρώματα του δέρματος μοντελοποιήθηκε σε αρουραίους Wistar. Η περιοχή του καύσου ήταν 18-20% της συνολικής επιφάνειας του δέρματος. Στην πρώτη πειραματική ομάδα αποτελούνταν από αρουραίων με βαθιά θερμικό τραυματισμό και την μεταμόσχευση των αλλογενών ινοβλαστών προερχόμενων μεσεγχυματικών βλαστικών κυττάρων. Η δεύτερη ομάδα αποτελούταν από ζώα με βαθιά θερμική καύση και trans φυτεία αλλογενών εμβρυϊκών ινοβλαστών. Η τρίτη ομάδα παριστάνεται από αρουραίους ελέγχου με βαθύ θερμικό έγκαυμα, που δεν πραγματοποίησαν κυτταρική θεραπεία. Ένα εναιώρημα ινοβλαστών προερχόμενων μεσεγχυματικών βλαστικών κυττάρων και εμβρυϊκών ινοβλαστών εφαρμόστηκε σε μία εγκαύματος επιφάνεια με πιπέτα σε μία ποσότητα από 2 × 10 ⁴ κύτταρα για την 2η ημέρα μετά την εκτομή της μοντελοποίησης εγκαύματος και νεκρωτική εσχάρα σχηματίζεται. Μετά τη μεταμόσχευση, τα κύτταρα καίγονται επιφάνεια καλυμμένη με γάζα εμποτισμένο σε ισότονο διάλυμα χλωριούχου νατρίου με γενταμυκίνη. Φράκτης κύτταρα μυελού των οστών για να ληφθεί MSCs με επακόλουθη επαγωγή της γραμμής ινοβλαστών σε μεσεγχυματικά βλαστικά κύτταρα που παράγονται σε ενήλικες αρουραίους Wistar από τα μηριαία οστά. Εμβρυονικοί ινοβλάστες ελήφθησαν από τους πνεύμονες εμβρύων ηλικίας 14-17 ημερών. Εμβρυϊκούς ινοβλάστες και τα κύτταρα του μυελού των οστών για να ληφθεί ένα προ-MSCs καλλιεργήθηκαν σε τρυβλία Petri στους 37 ° C σε ένα iikubatore C02, σε μια ατμόσφαιρα με 5% CO2 εις 95% υγρασία. Εμβρυϊκούς ινοβλάστες καλλιεργούνται για 4-6 ημέρες, ενώ για τον σχηματισμό μονοστιβάδος MSC απαιτείται από 14 μέχρι 17 ημέρες. Ακολούθως MSCs διατηρείται από κρυοσυντήρηση ως αρχικό υλικό για ινοβλάστη προερχόμενα μεσεγχυματικά βλαστικά κύτταρα τα οποία παρασκευάστηκαν με τήξη και καλλιέργεια MSCs για 4 ημέρες. Αριθμός μεσεγχυματικών βλαστικών κυττάρων ινοβλαστών που δημιουργείται είναι περισσότερο από 3 φορές ο αριθμός των εμβρυϊκών ινοβλαστών που προκύπτουν κατά τη διάρκεια της ίδιας περιόδου καλλιέργειας. Για την ταυτοποίηση κυττάρων σε transtslantirovannyh καίνε πληγές στο βήμα καλλιέργεια γονιδίωμά τους σημανθούν χρησιμοποιώντας ιικό φορέα μεταφοράς βασίζεται σε ένα ανασυνδυασμένο αδενοϊό V φορέα τύπου 1aS-2 γονίδιο που κωδικοποιεί β-γαλακτοσιδάση E.coli. Τα ζωντανά κύτταρα σε διάφορους χρόνους μετά τη μεταμόσχευση ανιχνευθεί ανοσοϊστοχημικά στις κατεψυγμένες τομές με προστιθέμενο υπόστρωμα X-Gal, δίνοντας το χαρακτηριστικό μπλε-πράσινο χρώμα. Ως αποτέλεσμα της οπτικής δυναμικής, εμβαδογράμματος και ιστολογική κατάσταση αξιολόγηση της εγκαύματα, διαπιστώθηκε ότι ακόμα και κατά την 3η ημέρα μετά τη μεταμόσχευση των κυττάρων σε απομονωμένες ομάδες εμφανίζονται σημαντικές διαφορές κατά τη διάρκεια της διαδικασίας επούλωσης του τραύματος. Ιδιαίτερα διακριτή, αυτή η διαφορά έγινε την 7η ημέρα μετά τη μεταμόσχευση κυττάρων. Τα ζώα της πρώτης ομάδας, η οποία μεταμοσχεύθηκαν μοιάζουν με ινοβλάστες μεσεγχυματικά βλαστικά κύτταρα, τραύματος αποκτήθηκε ομοιόμορφα ρόδινο έντονο χρώμα, κοκκοποίηση ιστού αυξήθηκε πάνω από ολόκληρη την επιφάνεια της στο επίπεδο της επιδερμίδας, και καίνε την επιφάνεια μειώνεται σημαντικά σε μέγεθος. Η μεμβράνη κολλαγόνου που σχηματίστηκε στην επιφάνεια του τραύματος ήταν κάπως αδύναμη, αλλά συνέχισε να καλύπτει ολόκληρη την περιοχή καύσης. Τα ζώα της δεύτερης ομάδας, η οποία μεταμοσχεύθηκαν εμβρυϊκούς ινοβλάστες, κοκκοποίηση ιστού ανυψώνεται στο επίπεδο της επιδερμίδας των ακμών του τραύματος, αλλά μόνο σε ορισμένα μέρη, ταυτόχρονα plazmoreya από το τραύμα ήταν πιο έντονη από ό, τι στην ομάδα 1, και αρχικά σχηματίζονται φιλμ από κολλαγόνο σχεδόν εξαφανιστεί. Σε ζώα που δεν έλαβαν θεραπεία με βλαστικά κύτταρα, την 7η ημέρα έγκαυμα πληγή ήταν ένα ανοικτόχρωμο, χωρίς κουκούτσι, νεκρωτικό ιστό, επικαλυμμένα με ινώδες. Παρατηρήθηκε πλασόρροια σε όλη την επιφάνεια καύσης. Ιστολογικά, τα ζώα των 1ου και 2ου ομάδες παρουσίασαν μια μείωση της κυτταρικής διήθησης και της ανάπτυξης του αγγειακού συστήματος, αυτά τα σημάδια της αρχόμενης διαδικασίας αναγεννητή να ήταν πιο σοβαρή σε αρουραίους στην ομάδα 1. Στην ομάδα ελέγχου έδειξε σημάδια κυτταρικής πληγής διήθησης, την ιστολογική μοτίβο των νεοσχηματισμένα αιμοφόρα αγγεία απουσιάζουν. 15-30 th ημέρα της παρατήρησης τα ζώα του 1ου την επιφάνεια του εγκαύματος ομάδα ήταν σημαντικά μικρότερη από ό, τι στους αρουραίους των άλλων ομάδων και επιφάνεια κοκκοποίησης ήταν περισσότερο ανεπτυγμένες. Στα ζώα της επιφάνειας του εγκαύματος 2η ομάδα είναι επίσης μειώθηκε σε σύγκριση με το μέγεθος των τραυμάτων εγκαύματος στην ομάδα ελέγχου των αρουραίων που οφειλόταν στην οριακή επιθηλίωση. Κατά τον έλεγχο sites επιφάνεια του εγκαύματος ομάδα παρέμεινε χλωμό κοκκοποιήσεων με σπάνια, εμφανίζεται σ 'ευρυαγγείες, νησίδες ήταν ινώδης πλάκα συνεχίστηκε μέτρια plazmoreya σε όλη την επιφάνεια του εγκαύματος, κάτι που είναι δύσκολο αποσπώμενο ψώρα παρέμεινε. Σε γενικές γραμμές, τα ζώα της ομάδας 3 μειώνει επίσης το μέγεθος της πληγής, αλλά η πληγή παρέμεινε podrytymi άκρη.

Έτσι, κατά τη διάρκεια μιας συγκριτική μελέτη της επούλωσης τραύματος συντελεστών χρησιμοποιώντας ινοβλαστών προερχόμενων μεσεγχυματικών βλαστικών κυττάρων και εμβρυϊκών ινοβλαστών, και χωρίς τη χρήση της κυτταρικής θεραπείας σημειώνονται επιτάχυνση της επούλωσης των επιφανειακών εγκαύματος, ως αποτέλεσμα της μεταμόσχευσης των ινοβλαστών προερχόμενων μεσεγχυματικών βλαστικών κυττάρων και εμβρυϊκών ινοβλαστών. Ωστόσο, στην περίπτωση της χρήσης αλλογονιδιακών μεσεγχυματικών βλαστικών κυττάρων των ινοβλαστών τραύματος ρυθμού επούλωσης ήταν υψηλότερο από ό, τι στην μεταμόσχευση εμβρυϊκών ινοβλαστών. Αυτό εκδηλώθηκε με επιταχυνόμενη αλλαγή των φάσεων αναγέννησης της διαδικασίας - να μειώσει την κυτταρική περιόδους ενδοδιήθηση, αυξάνει το ρυθμό πολλαπλασιασμού των αγγειακών δικτύων, καθώς και το σχηματισμό κοκκιώδους ιστού.

Τα αποτελέσματα της δυναμικής επιπεδομετρία δείχνουν ότι ο ρυθμός της αυθόρμητης επούλωσης των πληγών εγκαύματος (χωρίς τη χρήση της κυτταρικής θεραπείας) ήταν η χαμηλότερη. Από την 15η και 30η ημέρα μετά την μεταμόσχευση των αλλογονιδιακών μεσεγχυματικών βλαστικών κυττάρων των ινοβλαστών τραύματος ρυθμού επούλωσης ήταν υψηλότερο από ό, τι στην μεταμόσχευση εμβρυϊκών ινοβλαστών. Ιστοχημικές μέθοδο για την ανίχνευση της βήτα-γαλακτοσιδάσης έδειξε ότι μετά από μεταμόσχευση ινοβλαστών ομοιάζουν με μεσεγχυματικά βλαστικά κύτταρα και εμβρυϊκούς ινοβλάστες καθ 'όλη τη περίοδο της παρατήρησης στην επιφάνεια και βαθιά αναγέννηση πληγές μεταμοσχευμένα κύτταρα παραμένουν βιώσιμα. Οι συγγραφείς προτείνουν ότι ένα υψηλότερο ποσοστό του καψίματος πληγών αναγέννησης χρησιμοποιώντας μεσεγχυματικά βλαστικά κύτταρα του ινοβλαστών ρυθμισμένο απελευθέρωσης από αυτά τα κύτταρα κατά τη διάρκεια της ωρίμανσης rostostimuliruyushih βιοδραστικών παραγόντων.

Μεταμόσχευση αυτόλογων ή αλλογενών κερατινοκυττάρων και αλλογενή ινοβλαστών για τη θεραπεία των τραυμάτων εγκαύματος και χρησιμοποιούνται στην κλινική. Θα πρέπει να σημειωθεί ότι η χειρουργική θεραπεία παιδιών με εκτεταμένη βαθιά εγκαύματα είναι μία πολύπλοκη εργασία, λόγω της υψηλή πολλαπλότητα του τραύματος και χειρουργικών επεμβάσεων, σημαντική απώλεια αίματος, για τις διάφορες αντιδράσεις που χρησιμοποιούνται μέσων έγχυσης. Οι κύριες δυσκολίες στην εφαρμογή του δέρματος και η πλαστική χειρουργική με μεγάλη βαθιά εγκαύματα, η έκταση που υπερβαίνει το 40% της επιφάνειας του σώματος, λόγω της σοβαρότητας της κατάστασής της και την έλλειψη πόρων του δέρματος δότη. Η χρήση μοσχευμάτων πλέγματος με μεγάλο λόγο διάτρηση δεν λύνει το πρόβλημα, δεδομένου ότι η εικόνα μετά τη διάτρηση epiteliziruyutsya κυττάρων είναι πολύ αργή, και συχνά κάνουν οι μοσχεύματα δέρματος λύονται ή ξηρό. Τέτοιες επικαλύψεις καίνε πληγές όπως ksenokozha, πτωματική αλλομοσχεύματα, συνθετικές επικαλύψεις φιλμ δεν είναι πάντοτε επαρκώς αποτελεσματικές, έτσι ώστε ανάπτυξη νέων μεθόδων για το κλείσιμο της επιφάνειας του εγκαύματος στρώματα καλλιεργημένα κερατινοκύτταρα και ινοβλάστες. Ειδικότερα, μία μέθοδος κλεισίματος επιφανειών εγκαύματος χρησιμοποιώντας καλλιεργημένα allofibroblastov παρέχοντας κατά τη διάρκεια μεταμόσχευσης προφέρεται διεγερτική επίδραση στον πολλαπλασιασμό epidermotsitov διατηρημένα σε σύνορα πληγή σε εγκαύματα, και σε κερατινοκυττάρων μοσχεύματα mesh πλέγματα. Στην Budkevich L. Et al (2000) δείχνει τα αποτελέσματα της εφαρμογής αυτής της μεθόδου για τη θεραπεία των εγκαυμάτων σε παιδιά. 31 παιδιά με θερμικό τραύμα ηλικίας μεταξύ 1 και 14 ετών ήταν υπό παρατήρηση. Σε τρία παιδιά συνολικό εμβαδόν καίνε πληγές IIIA-B - IV βαθμός ήταν 40%, 25 - 50-70%, ακόμη και στο τρία - 71-85% της επιφάνειας του σώματος. Πρώιμη χειρουργική necrectomy σε συνδυασμό με τη μεταμόσχευση των καλλιεργημένων allofibroblastov και autodermaplasty. Στην πρώτη θεραπεία στάδιο διεξήχθη νεκρωτικό εκτομή ιστού, η δεύτερη - για την μεταμόσχευση των καλλιεργημένων φέρουσα μεμβράνη allofibroblastov, η τρίτη (48 ώρες μετά τη μεταμόσχευση των καλλιεργημένων allofibroblastov) - αφαίρεση των πτερυγίων μήτρας και του δέρματος με autodermoplasty αναλογία διάτρηση του 1: 4. Τρεις ασθενείς που εισήχθησαν στο νοσοκομείο με σοβαρή νόσο έγκαυμα, καλλιεργημένα allofibroblasty μεταμοσχεύθηκαν σε κοκκοποίηση πληγές. Μεταμόσχευση των καλλιεργημένων allofibroblastov εκτελείται μία φορά σε 18 παιδιά, δύο φορές - σε 11, τρεις - δύο ασθενείς. Η περιοχή της επιφάνειας του τραύματος που καλύπτεται από την καλλιέργεια κυττάρων ήταν από 30 έως 3500 cm2. Αποτελεσματικότητα των καλλιεργημένων allofibroblastov αξιολογούνται από τον συνολικό ποσοστό των ενοφθαλμισμό των πτερυγίων του δέρματος, ο χρόνος της επούλωσης των εγκαυμάτων και τον αριθμό των θανάτων σοβαρή θερμική βλάβη. Η μεταμόσχευση μοσχευμάτων ολοκληρώθηκε στο 86% των ασθενών. Σε 14% των περιπτώσεων παρατηρήθηκε μερική μη εμφάνιση των πτερυγίων του δέρματος. Παρά τη συνεχιζόμενη θεραπεία, έξι (19,3%) παιδιά έχασαν τη ζωή τους. Η συνολική περιοχή δερματικών αλλοιώσεων ήταν από 40 έως 70% της επιφάνειας του σώματος. Η μεταμόσχευση καλλιεργημένων allofibroblastov δεν είχε καμία σχέση με το θάνατο των εγκαυμάτων ένας ασθενής.

Αναλύοντας τα αποτελέσματα της θεραπείας, οι συγγραφείς επισημαίνουν ότι τα προηγούμενα εγκαύματα ασύμβατη με τη ζωή, για την αντιμετώπιση βαθιά θερμική βλάβη της περιοχής του δέρματος του 35-40% της επιφάνειας του σώματος (για μικρά παιδιά - μέχρι 3 χρόνια - είναι κρίσιμα βαθιά εγκαύματα με έκταση 30%, για μεγαλύτερα παιδιά τις ηλικίες - πάνω από 40% της επιφάνειας του σώματος). Όταν η χειρουργική μεταμόσχευση καλλιεργημένων autodermaplasty necrectomy allofibroblastov και μετέπειτα μοσχεύματα δέρματος με μεγάλα εγκαύματα, παράγοντας διάτρηση IIIB - IV βαθμό παραμένει κρίσιμη, αλλά αυτή τη στιγμή δεν υπάρχουν προοπτικές σε πολλές περιπτώσεις για να σώσει τη ζωή του, ακόμη και αυτών των θυμάτων. Χειρουργικά necrectomy σε συνδυασμό με μεταμόσχευση καλλιεργημένων allofibroblastov και autodermaplasty σε παιδιά με βαθιά εγκαύματα αποδείχθηκε ότι είναι ιδιαίτερα αποτελεσματική σε ασθενείς με προχωρημένη βλαβών του δέρματος με έλλειμμα θέσεων δότη. Ενεργά χειρουργικά τακτική και τη μεταμόσχευση καλλιεργημένων allofibroblastov προωθήσει την ταχεία σταθεροποίηση της γενικής κατάστασης των ασθενών αυτών, η μείωση του αριθμού των λοιμωδών επιπλοκών της νόσου έγκαυμα, δημιουργώντας ευνοϊκές συνθήκες για την εμφύτευση, να μειώσει το χρόνο για να αποκαταστήσει τη χαμένη του δέρματος και τη διάρκεια της νοσηλείας, μειώνοντας τη συχνότητα των θανάτων σε ασθενείς με εκτεταμένα εγκαύματα. Έτσι, η μεταμόσχευση των καλλιεργημένων allofibroblastov ακολουθούμενη autodermaplasty πτερύγια του δέρματος επιτυγχάνει ανάκτηση σε παιδιά με σοβαρά εγκαύματα, τα οποία προηγουμένως θεωρούνταν καταδικασμένη.

Είναι γενικά αποδεκτό ότι η προτεραιότητα της ασθένειας έγκαυμα είναι η πιο πλήρης και ταχεία αποκατάσταση των κατεστραμμένων δέρματος για την προειδοποίηση που προκύπτουν από αυτό το τοξικές επιδράσεις, λοιμώδεις επιπλοκές και αφυδάτωση. Τα αποτελέσματα της εφαρμογής των καλλιεργημένων κυττάρων εξαρτώνται σε μεγάλο βαθμό από την ετοιμότητα για μεταμόσχευση της ίδιας της πληγής. Σε περιπτώσεις μεταμόσχευσης καλλιεργημένων κερατινοκυττάρων στην επιφάνεια του τραύματος μετά από χειρουργική necrectomy prizhivlyaetsya κατά μέσο όρο 55% (κατά περιοχή) των μεταμοσχευμένων κυττάρων, ενώ στα κοκκοποίηση πληγές εμφύτευση συντελεστής μειώνεται στο 15%. Επομένως, η επιτυχής αντιμετώπιση των εκτεταμένων εγκαυμάτων βαθιάς δερματίτιδας απαιτεί, καταρχάς, ενεργό χειρουργική τακτική. Με την παρουσία βαθμών IIIB-IV εγκαύματος, η επιφάνεια καύσης απελευθερώνεται αμέσως από τους νεκρωτικούς ιστούς προκειμένου να μειωθούν οι επιπτώσεις της δηλητηρίασης και να μειωθεί ο αριθμός των επιπλοκών της ασθένειας των εγκαυμάτων. Η χρήση τέτοιων τακτικών είναι το κλειδί για τη μείωση του χρόνου από τη στιγμή που θα καεί το κλείσιμο των πληγών και τη διάρκεια παραμονής των ασθενών με εκτεταμένα εγκαύματα στο νοσοκομείο, ενώ επίσης θα μειωθεί σημαντικά ο αριθμός των θανάτων.

Οι πρώτες αναφορές για την επιτυχή χρήση των καλλιεργημένων κερατινοκυττάρων για την κάλυψη της επιφάνειας εγκαύματος εμφανίστηκαν στις αρχές του ογδόντα του περασμένου αιώνα. Ακολούθως, αυτός ο χειρισμός διεξήχθη με τη βοήθεια στρώσεων καλλιεργημένων κερατινοκυττάρων, που λαμβάνονται συνήθως από αυτοσυσχέτιζες, πολύ λιγότερο συχνά από αλλοκερατινοκύτταρα. Ωστόσο, η τεχνολογία της αυτοκερατινοκυτταροπλαστικής δεν επιτρέπει τη δημιουργία μιας τράπεζας κυττάρων, ενώ ο χρόνος που απαιτείται για την παραγωγή επαρκούς μοσχεύματος από τα κερατινοκύτταρα είναι μεγάλος και ανέρχεται σε 3-4 εβδομάδες. Κατά την περίοδο αυτή, ο κίνδυνος εμφάνισης μολυσματικών και άλλων επιπλοκών από τη νόσο των εγκαυμάτων αυξάνεται σημαντικά, γεγονός που παρατείνει σημαντικά τη συνολική διάρκεια παραμονής των ασθενών στο νοσοκομείο. Επιπλέον, τα αυτοκερατινοκύτταρα πρακτικά δεν επιβιώνουν κατά τη διάρκεια της μεταμόσχευσης σε κοκκώδη εγκαύματα και το υψηλό κόστος των ειδικών μέσων ανάπτυξης και των διεγερτικών βιολογικώς δραστικών αυξητικών κερατινοκυττάρων περιορίζει σημαντικά την κλινική τους εφαρμογή. Άλλες βιοτεχνολογικές μέθοδοι, όπως η κολλαγοπλαστική, η μεταμόσχευση κρυοσυντηρημένων ξενοειδών και η χρήση διαφόρων επικαλύψεων βιοπολυμερούς αυξάνουν την αποτελεσματικότητα της επεξεργασίας εκτεταμένων επιφανειών αλλά όχι βαθιών εγκαυμάτων. Η μέθοδος επικάλυψης της επιφάνειας του τραύματος με καλλιεργημένους ινοβλάστες είναι θεμελιωδώς διαφορετική στο ότι το κύριο συστατικό της καλλιέργειας κυττάρων καλλιέργειας δεν είναι κερατινοκύτταρα αλλά ινοβλάστες.

Μια προϋπόθεση για την ανάπτυξη της μεθόδου χρησίμευσε ως απόδειξη ότι περικύτταρα που περιβάλλουν τα μικρά αγγεία είναι προ- κύτταρα genitornymi μεσεγχυματικά σε θέση να μετατρέψει σε ινοβλάστες, οι οποίες παράγουν πολλά αυξητικούς παράγοντες και παρέχουν επούλωση πληγών, λόγω της ισχυρής διεγερτικό αποτέλεσμα επί του πολλαπλασιασμού και την προσκόλληση των κερατινοκυττάρων. Χρησιμοποιώντας καλλιεργημένους ινοβλάστες για το κλείσιμο επιφανειών του τραύματος προσδιορίζονται αμέσως έναν αριθμό σημαντικών πλεονεκτημάτων της μεθόδου αυτής έναντι της χρήσεως καλλιεργημένων κερατινοκυττάρων. Ειδικότερα, η παρασκευή των ινοβλαστών σε καλλιέργεια δεν απαιτεί τη χρήση ειδικών υποκινητών μέσα καλλιέργειας και ανάπτυξης, η οποία μειώνει το κόστος της μεταμόσχευσης περισσότερο από 10 φορές το κόστος της απόκτησης κερατινοκυττάρων. Οι ινοβλάστες είναι εύκολα υποβάλλονται σε πέρασμα, κατά την οποία χάνουν μερικώς επιφανειακά αντιγόνα ιστοσυμβατότητας τους, η οποία με τη σειρά της καθιστά δυνατή τη χρήση για την παρασκευή αλλογενή μοσχεύματα κυττάρων και δημιουργούν τους τράπεζες. Ελαττώνει μεταμοσχεύσεις παραλαβή, έτοιμο για χρήση σε μια κλινική, από 3 εβδομάδες (κερατινοκύτταρα) 1-2 ημέρες (για τους ινοβλάστες). Πρωτογενείς καλλιέργειες ινοβλαστών μπορεί να ληφθεί με καλλιέργεια κυττάρων από θραύσματα του δέρματος λαμβάνονται σε autodermoplasty και κυττάρων σποράς πυκνότητα σε υποκαλλιέργειες παραλαβή των ανθρώπινων ινοβλαστών είναι μόνο 20 × 10 ³ ανά 1 cm ².

Για να μελετηθεί η επίδραση των ινοβλαστών και των ρυθμιστικών πρωτεϊνών τους στον πολλαπλασιασμό και τη διαφοροποίηση των κερατινοκυττάρων, μια συγκριτική ανάλυση των χαρακτηριστικών και της μορφολογίας του πολλαπλασιασμού των κερατινοκυττάρων επί υποστρωμάτων των τύπων κολλαγόνου Ι και III και φιμπρονεκτίνης σε συν-καλλιέργεια με ανθρώπινους ινοβλάστες. Ανθρώπινα κερατινοκύτταρα απομονώθηκαν από θραύσματα δέρμα των ασθενών με εγκαύματα, που λαμβάνονται κατά τη διάρκεια autodermoplasty λειτουργία. Η πυκνότητα των κερατινοκυττάρων ήταν 50 χ 103 κύτταρα ανά cm2. Η κλινική αποτελεσματικότητα της μεταμόσχευσης καλλιεργημένων ινοβλαστών αξιολογήθηκε σε 517 ασθενείς. Όλοι οι ασθενείς χωρίστηκαν σε δύο ομάδες: 1ος - ενήλικες που πάσχουν από εγκαύματα IIA, Β - IV βαθμό, 2ο - παιδιά με βαθιά εγκαύματα βαθμού IIIB - IV. Εκτίμηση της δυναμικής των δομικών και λειτουργική οργάνωση της μονοστρωματική καλλιέργεια των ινοβλαστών σε σχέση με τον ρόλο στη διαδικασία αναγέννησης των γλυκοζαμινογλυκανών, ινονεκτίνης, κολλαγόνου, και επέτρεψε οι συγγραφείς για να προσδιοριστεί η τρίτη ημέρα ως τους πιο ευνοϊκούς όρους της χρησιμοποιώντας καλλιέργειες ινοβλαστών για την παραγωγή μοσχευμάτων. Διερεύνηση των επιπτώσεων επί του πολλαπλασιασμού και της διαφοροποίησης των κερατινοκυττάρων ινοβλαστών έδειξαν ότι κάτω από in vitro ινοβλάστες έχουν έντονη διεγερτική δράση, κυρίως σε διαδικασίες κερατινοκυττάρων πρόσφυση, την αύξηση του αριθμού των προσφυόμενων κυττάρων και τον ρυθμό του καθορισμού περισσότερο από 2 φορές. διεργασίες προσκόλλησης Η διέγερση συνοδεύεται από αυξημένη ένταση της σύνθεσης του DNA και το επίπεδο του πολλαπλασιασμού των κερατινοκυττάρων. Επιπλέον, διαπιστώθηκε ότι η παρουσία των ινοβλαστών και εξωκυτταρικής μήτρας που σχηματίζεται από αυτούς αποτελεί προϋπόθεση για τον σχηματισμό tonofibrillyarnogo συσκευή κερατινοκυττάρων διακυτταρικών συνδέσεων και, εν τέλει, για τη διαφοροποίηση των κερατινοκυττάρων και το σχηματισμό της βασικής μεμβράνης. Στη θεραπεία των παιδιών με βαθιά εγκαύματα καθιερωμένη κλινική αποτελεσματικότητα της καλλιέργειας μεταμόσχευσης allofibroblastov, ειδικά σε ασθενείς με εκτεταμένες αλλοιώσεις των θέσεων δότη δέρματος σε ένα έλλειμμα. Complex μελέτη morfofunktcionalnoe έδειξε ότι μοσχεύματος χαρακτηρίζεται από ινοβλάστες δραστική σύνθεση DNA, καθώς και κολλαγόνο, φιμπρονεκτίνη και γλυκοζαμινογλυκάνες, οι οποίες παράγονται στα κύτταρα της εξωκυττάριας ουσίας. Οι συγγραφείς προτείνουν ένα υψηλό ποσοστό εμφύτευσης μεταμοσχευμένων ινοβλαστών (έως 96%), μια απότομη μείωση από την άποψη της παρασκευής τους (εντός 2-3 ώρες αντί για 24-48 εβδομάδων στην περίπτωση των κερατινοκυττάρων), μια σημαντική επιτάχυνση της επιθηλίωση της επιφάνειας έγκαυμα, και μια σημαντική μείωση στην τιμή (σε 10 φορές) της τεχνολογίας ανάπτυξης του μοσχεύματος από ινοβλάστες σε σύγκριση με τη μεταμόσχευση κερατινοκυττάρων. Η χρήση της μεταμόσχευσης των καλλιεργημένων allofibroblastov καθιστά δυνατή για να σώσει τις ζωές των παιδιών με κρίσιμες εγκαύματα - θερμική βλάβη πάνω από το 50% της επιφάνειας του σώματος, η οποία εθεωρείτο ασυμβίβαστη με τη ζωή. Είναι αξιοσημείωτο ότι αλλογενή μεταμόσχευση εμβρυϊκών ινοβλαστών επίσης πειστικά αποδειχθεί όχι μόνο ταχύτερη αναγέννηση των τραυμάτων και των ασθενών ανάρρωσης με διάφορες βαθμού έγκαυμα και την περιοχή, αλλά και μια ουσιαστική μείωση της θνησιμότητας.

Αυτόλογα ινοβλάστες χρησιμοποιούνται σε μια τέτοια περίπλοκη και πλαστική χειρουργική ως βλάβη διόρθωση αντικατάστασης, οι φωνητικές χορδές. Συνήθως χρησιμοποιούνται για το σκοπό αυτό βόειο κολλαγόνο, διάρκεια δράσης η οποία περιορίζεται από την ανοσογονικότητά της. Όντας μια ξένη πρωτεΐνη, το κολλαγόνο βοοειδούς, κολλαγενάση ευαίσθητα στον αποδέκτη και μπορεί να προκαλέσει ανοσολογικές αντιδράσεις, για να μειωθεί ο κίνδυνος που έχουν αναπτυχθεί η τεχνολογία των παρασκευασμάτων κολλαγόνου, εγκάρσια συνδεδεμένο με γλουταραλδεϋδη. Το πλεονέκτημά τους είναι μεγαλύτερη σταθερότητα και χαμηλότερη ανοσογονικότητα, η οποία έχει βρει πρακτική εφαρμογή στην απομάκρυνση των ελαττωμάτων και ατροφία των φωνητικών χορδών. Αυτόλογη ενέσεις κολλαγόνου χρησιμοποιήθηκαν για πρώτη φορά το 1995. Μέθοδοι παρέχονται διατήρηση της πρωτοταγούς δομής των αυτόλογων ινών κολλαγόνου, συμπεριλαμβανομένων των ενζυματικά καταλυόμενη ενδομοριακή σταυρωτές συνδέσεις. Το γεγονός ότι οι φυσικές ίνες κολλαγόνου είναι περισσότερο ανθεκτικά στην αποδόμηση από πρωτεάσες από ανασυσταθέντος τελοπεπτίδια κολλαγόνου όπου κομμένα. Ακεραιότητα τελοπεπτίδια σημαντικό για την τεταρτοταγή δομή των ινών κολλαγόνου και της δημιουργίας σταυροειδών δεσμών μεταξύ γειτονικών μορίων κολλαγόνου. Σε αντίθεση με τα παρασκευάσματα του κολλαγόνου βοοειδών, αυτόλογο κολλαγόνο δεν προκαλεί ανοσοαποκρίσεις στον δέκτη, αλλά δεν είναι επαρκώς αποτελεσματικό ως γεμίζει παράγοντα. Επίμονη διόρθωση μπορεί να επιτευχθεί λόγω των τοπικών παραγωγή αυτόλογη μεταμόσχευση κολλαγόνου από τους ινοβλάστες. Ωστόσο, η έρευνα της αποτελεσματικότητας της μεταμόσχευσης αυτόλογων ινοβλαστών στην κλινική αποκάλυψε κάποιες δυσκολίες. Στις αρχές της περιόδου μετά τη μεταμόσχευση ινοβλαστών κλινικό αποτέλεσμα ήταν ασθενέστερη σε σύγκριση με εκείνη μετά την χορήγηση του βόειου κολλαγόνου. Οταν καλλιεργούνται αυτόλογα ινοβλάστες δεν μπορεί να αποκλείσει την πιθανότητα μεταμόρφωσης των φυσιολογικών ινοβλαστών στην ανώμαλη, τα λεγόμενα μυοϊνοβλάστες, υπεύθυνη για την ανάπτυξη της ίνωσης και ουλών, όπως αποδεικνύεται από τη μείωση σε πηκτή κολλαγόνου, λόγω της ειδικής αλληλεπίδρασης των ινοβλαστών και ινίδια κολλαγόνου. Περαιτέρω, μετά την εν σειρά δίοδο οι ινοβλάστες in vitro χάνουν την ικανότητά τους να συνθέτουν πρωτεΐνες εξωκυτταρικής μήτρας.

Ωστόσο, επί του παρόντος πειραματική τεχνική τελειοποιηθεί καλλιέργεια των ανθρώπινων αυτόλογων ινοβλαστών, η οποία εξαλείφει τα παραπάνω μειονεκτήματα και οδηγεί σε ογκογόνο μετασχηματισμό των φυσιολογικών ινοβλαστών. Αυτόλογοι ινοβλάστες που λαμβάνονται με αυτή τη μέθοδο χρησιμοποιούνται για την πλήρωση των ελαττωμάτων των μαλακών ιστών του προσώπου. Σε μια μελέτη του H. Keller και συν-συγγραφέων (2000), 20 ασθενείς ηλικίας 37 έως 61 ετών με ρυτίδες και ατροφικές ουλές έλαβαν θεραπεία. Βιοψίες δέρματος (4 mm) BTE περιοχή που μεταφέρονται στο εργαστήριο σε αποστειρωμένα φιαλίδια που περιέχουν 10 ml μέσου καλλιέργειας (Dulbecco αντιβιοτικό mikoseptikom, πυροσταφυλικό και ορό εμβρύου μόσχου). Το υλικό τοποθετήθηκε μέσα σε 3-5 δίσκους καλλιέργειας με διάμετρο 60 mm και επωάστηκε σε θερμοστάτη με ατμόσφαιρα που περιείχε 5% CO2. Μετά από 1 εβδομάδα, τα κύτταρα απομακρύνθηκαν από τα τρυβλία με θρυψινοποίηση και τοποθετήθηκαν σε φιαλίδια των 25 cm2. Τα κύτταρα χορηγούνται σε ασθενείς σε μία ποσότητα από 4 χ 107. Η σημαντική και μακροχρόνια κλινική επίδραση παρατηρήθηκε σε ασθενείς με διόρθωση ρινοχειλικές πτυχώσεις, και σε ασθενείς με ουλές μετά από 7 και 12 μήνες μετά την τρίτη μεταμόσχευση αυτόλογων ινοβλαστών. Σύμφωνα με την κυτταρομετρία ροής, οι καλλιεργημένοι ινοβλάστες παρήγαγαν μεγάλη ποσότητα κολλαγόνου τύπου Ι. Σε in vitro μελέτες, φαίνεται η κανονική συσταλτικότητα των ενέσιμων ινοβλαστών. Δύο μήνες μετά την υποδόρια χορήγηση καλλιεργημένων ινοβλαστών σε δόση 4 χ 107 κυττάρων, δεν ανιχνεύθηκαν γυμνά ποντίκια. Οι ενέσιμες ινοβλάστες δεν προκάλεσαν σχηματισμό ουλής και διάχυτη ίνωση σε ασθενείς. Σύμφωνα με τον συγγραφέα, οι εμφυτευμένοι αυτόλογοι ινοβλάστες είναι σε θέση να παράγουν συνεχώς κολλαγόνο, το οποίο θα δώσει καλλυντικό αποτέλεσμα αναζωογόνησης. Σε αυτή την περίπτωση, δεδομένου ότι η διάρκεια ζωής των διαφοροποιημένων κυττάρων είναι περιορισμένη, οι ινοβλάστες που λαμβάνονται από έναν νεαρό ασθενή είναι πιο αποτελεσματικοί από αυτούς που λαμβάνονται σε ηλικιωμένους. Στο μέλλον, η πιθανότητα κρυοσυντήρησης μιας καλλιέργειας ινοβλαστών που λαμβάνεται από έναν νεαρό δότη θεωρείται ότι αργότερα μεταμόσχευση σε έναν ηλικιωμένο ασθενή τα δικά του νεαρά κύτταρα. Εν κατακλείδι, δεν είναι αρκετά σωστό συμπέρασμα ότι αυτόλογες ινοβλάστες, υπό την προϋπόθεση λειτουργική ασφάλεια τους είναι ιδανικές για διόρθωση του προσώπου ελαττωμάτων των μαλακών ιστών. Ταυτόχρονα, ο ίδιος ο συγγραφέας σημειώνει ότι στη διαδικασία της έρευνας προέκυψαν επίσης ορισμένες προβληματικές καταστάσεις που συνδέονται με τη χρήση ενός συστήματος αυτόλογου ινοβλάστης-κολλαγόνου. Η κλινική επίδραση ήταν συχνά ασθενέστερη από τη χρήση κολλαγόνου βοοειδών, η οποία προκάλεσε απογοήτευση στους ασθενείς.

Γενικά, τα στοιχεία της βιβλιογραφίας σχετικά με τις προοπτικές κλινικής χρήσης των μεσεγχυματικών βλαστοκυττάρων μοιάζουν αρκετά αισιόδοξα. Καταβάλλονται προσπάθειες για τη χρήση αυτόλογων πολυδύναμων μεσεγχυματικών προγονικών κυττάρων μυελού των οστών για τη θεραπεία των εκφυλιστικών αρθρικών βλαβών. Οι πρώτες κλινικές δοκιμές καλλιεργημένων μεσεγχυματικών προγονικών κυττάρων στη θεραπεία σύνθετων καταγμάτων οστού διεξάγονται. Αυτόλογη και αλλογενή μεσεγχυματικά κύτταρα του μυελού των οστών στρωματικά χρησιμοποιείται για να παράγει ιστό χόνδρου για μεταμόσχευση στην διόρθωση των ελαττωμάτων αρθρικού χόνδρου λόγω τραύματος, ή αυτοάνοση αλλοιώσεις. Ασκείται μεθόδους της κλινικής εφαρμογής των πολυδύναμων μεσεγχυματικών προγονικών κυττάρων για τη διόρθωση ελαττωμάτων των οστών σε παιδιά με σοβαρή πρόοδο οστεογένεση που προκαλείται από μεταλλάξεις του γονιδίου του κολλαγόνου τύπου Ι. Μετά mieloabelyatsii παιδιά-λήπτες μεταμοσχευμένων μυελού των οστών από HLA-συμβατό υγιή δότη ως μη κλασματοποιημένη μυελού των οστών μπορεί να περιέχει μία επαρκή ποσότητα μεσεγχυματικών βλαστικών κυττάρων για να τροφοδοτηθούν σοβαρή βλάβη του οστού. Μετά τη μεταμόσχευση, αλλογονικού μυελού των οστών όπως τα παιδιά που σημειώνονται θετικές ιστολογικές αλλαγές στο δοκιδωτό οστό, αύξηση του ρυθμού ανάπτυξης και τη μείωση της συχνότητας εμφάνισης καταγμάτων των οστών. Σε ορισμένες περιπτώσεις, επιτυγχάνεται θετικό κλινικό αποτέλεσμα με μεταμόσχευση στενά συγγενών αλλογενών μυελού των οστών και οστεοβλαστών. Για τη θεραπεία της συγγενούς ευθραυστότητας των οστών λόγω ανισορροπίας των οστεοβλαστών και των οστεοκλαστών στον οστικό ιστό, χρησιμοποιείται επίσης μεταμόσχευση MSK. Η αποκατάσταση του σχηματισμού οστού σε αυτή την περίπτωση επιτυγχάνεται λόγω χιμαιρισμού της ομάδας των στελεχών και προγονικών στρωματικών κυττάρων στον ιστό των οστών των ασθενών.

Οι μέθοδοι γενετικής τροποποίησης των μεσεγχυματικών βλαστοκυττάρων του δότη βελτιώνονται για να διορθωθούν τα γενετικά ελαττώματα των στρωματικών ιστών. Υποτίθεται ότι μεσεγχυματικά προγονικά κύτταρα σύντομα θα χρησιμοποιηθούν στη νευρολογία για τα εγκεφαλικά κύτταρα κατευθυντική χιμαιρισμού και να δημιουργήσει μια πισίνα των υγιών κυττάρων, ικανά να παράγουν με ανεπάρκεια ενζύμου ή παράγοντα υπεύθυνο για τις κλινικές εκδηλώσεις της νόσου. Η μεταμόσχευση μεσεγχυματικών βλαστικών κυττάρων μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την αποκατάσταση στρώμα μυελού οστών σε ασθενείς με καρκίνο μετά από ακτινοθεραπεία και χημειοθεραπεία, και σε συνδυασμό με κύτταρα μυελού των οστών - για την αποκατάσταση της αιμοποίησης. Ανάπτυξη της θεραπείας υποκατάστασης με στόχο την εξάλειψη των ελαττωμάτων του μυοσκελετικού συστήματος χρησιμοποιώντας MSCs προώθηση μηχανικής στα βιοϋλικών μήτρας σχεδιασμού ή biomimics σχηματίζει σκελετούς που κατοικούν τους απογόνους των μεσεγχυματικών βλαστικών κυττάρων.

Πηγές μεσεγχυματικών βλαστικών κυττάρων

Η κύρια πηγή των μεσεγχυματικών βλαστικών κυττάρων είναι ο μυελός των οστών αιμοποιητικά βλαστικά κύτταρα τα οποία σε θηλαστικά συνεχώς διαφοροποιούνται σε κύτταρα του αίματος και του ανοσοποιητικού συστήματος, ενώ τα μεσεγχυματικά βλαστικά κύτταρα παρουσιάζονται μικρούς πληθυσμούς των στρωματικών κυττάρων του μυελού των οστών που μοιάζουν με ινοβλάστες και βοηθούν στη διατήρηση της αδιαφοροποίητη κατάσταση των αιμοποιητικών βλαστικών κυττάρων. Υπό ορισμένες συνθήκες, μεσεγχυματικά βλαστικά κύτταρα διαφοροποιούνται σε κύτταρα του χόνδρου και του οστού. Όταν απλώνονται επί ενός μέσου καλλιέργειας σε πυκνότητα φύτευσης κύτταρα χαμηλής στρώματος του μυελού των οστών μονοπύρηνα σχηματίζουν αποικίες των προσκολλημένων κυττάρων, τα οποία, στην πραγματικότητα, είναι ινοβλαστών πολυδύναμα μεσεγχυματικά πρόδρομα κύτταρα. Μερικοί συγγραφείς έχουν προτείνει ότι μυελού των οστών κατατεθεί αναληφθεί μεσεγχυματικά βλαστικά κύτταρα, τα οποία, χάρη στη δυνατότητα να αυτο-ανανέωση και υψηλό δυναμικό διαφοροποίησης, παρέχουν όλες τις ιστούς του σώματος προκατόχους μεσεγχυματικά κύτταρα στρωματικά καθ 'όλη τη ζωή οργανισμό θηλαστικού.

Στο μυελό των οστών, τα στοιχεία των στρωματικών κυττάρων σχηματίζουν ένα δίκτυο που γεμίζει το διάστημα μεταξύ των ημιτονοειδών και του οστικού ιστού. Η περιεκτικότητα του αδρανούς MSC στον μυελό των οστών ενός ενήλικου είναι συγκρίσιμη με τον αριθμό των αιμοποιητικών βλαστοκυττάρων και δεν υπερβαίνει το 0,01-0,001%. Τα μεσεγχυματικά βλαστοκύτταρα που απομονώνονται από μυελό των οστών και δεν υποβάλλονται σε καλλιέργεια στερούνται συγκολλητικών μορίων. Τέτοια MSCs δεν εκφράζουν CD34, ICAM, VCAM, κολλαγόνο τύπου Ι και III, CD44 και CD29. Ως εκ τούτου, in vitro μεσεγχυματικά βλαστικά κύτταρα δεν είναι σταθερές επί του υποστρώματος καλλιέργειας, και πιο προηγμένες λαμβανόμενα πρόγονα μεσεγχυματικά βλαστικά κύτταρα, έχουν σχηματιστεί τα συστατικά κυτταροσκελετικές και συσκευή υποδοχέα των μορίων κυτταρικής προσκόλλησης. Τα κύτταρα Stromal με το φαινότυπο CD34 βρίσκονται ακόμη και στο περιφερικό αίμα, αν και είναι πολύ λιγότερα στον μυελό των οστών από τα CD34-θετικά μονοπύρηνα κύτταρα. Τα κύτταρα CD34 που απομονώνονται από το αίμα και μεταφέρονται στην καλλιέργεια προσκολλώνται στο υπόστρωμα και σχηματίζουν αποικίες κυττάρων που μοιάζουν με ινοβλάστες.

Είναι γνωστό ότι κατά τη διάρκεια της βάση εμβρυϊκών περίοδο στρωματικά όλων των οργάνων και ιστών των θηλαστικών και ανθρώπων προκύπτει από μια κοινή δεξαμενή μεσεγχυματικών βλαστικών κυττάρων πριν και κατά το στάδιο της οργανογένεσης. Επομένως, πιστεύεται ότι σε ένα ώριμο σώμα, τα περισσότερα από τα μεσεγχυματικά βλαστοκύτταρα θα πρέπει να βρίσκονται στον συνδετικό ιστό και στον οστικό ιστό. Έχει αποδειχθεί ότι η πλειονότητα των κυτταρικών στοιχείων του στρώματος του χαλαρού συνδετικού και οστικού ιστού αντιπροσωπεύονται από δεσμευμένα προγονικά κύτταρα, τα οποία όμως διατηρούν την ικανότητα πολλαπλασιασμού και σχηματισμού κλώνων in vitro. Με την εισαγωγή τέτοιων κυττάρων στην κυκλοφορία του αίματος για περισσότερο από 20% των μεσεγχυματικών προγονικών κυττάρων εμφυτεύονται αιματοποιητικά στρωματικά στοιχεία μεταξύ ιστών και παρεγχυματώδη όργανα.

Μία πιθανή πηγή των μεσεγχυματικών βλαστικών κυττάρων είναι ο λιπώδης ιστός, μεταξύ των οποίων σε δεσμευμένες βλαστικών κυττάρων που βρέθηκαν σε διάφορους βαθμούς προγόνων λιποκυττάρων. Λιγότερο ώριμη στοιχεία προγονικά του λιπώδους ιστού - στρωματικά-αγγειακά κύτταρα, τα οποία είναι η ίδια όπως πολυδύναμων προγόνων μεσεγχυματικά του μυελού των οστών μπορούν να διαφοροποιηθούν σε αδιποκύτταρα υπό την δράση των γλυκοκορτικοειδών, που μοιάζει με ινσουλίνη αυξητικού παράγοντα και της ινσουλίνης. Στην κουλτούρα των στρωματικών αγγειακών κυττάρων διαφοροποιούνται σε αδιποκύτταρα και χονδροκύτταρα και λιπώδη κύτταρα που προέρχονται από μυελό των οστών ιστού λιποκύτταρα και οστεοβλάστες σχηματισμού.

Στους μυς βρέθηκαν επίσης πηγές στρωματικών στελεχών. Τα πρωτογενή κύτταρα καλλιέργεια απομονώθηκε από ανθρώπινο σκελετικό μυ, αποκαλύπτει κύτταρα σε σχήμα αστεριού και πολυπυρηνικά μυοσωληνάρια. Με την παρουσία των αστεροειδών κυττάρων ορό αλόγου πολλαπλασιάζονται in vitro χωρίς σημεία κυτταροδιαφοροποίησης και μετά την προσθήκη της δεξαμεθαζόνης στο μέσο καλλιέργειας της διαφοροποίησης χαρακτηρίζεται από την εμφάνιση των στοιχείων κυττάρου κυττάρων με τον φαινότυπο των σκελετικών και λείων μυών, των οστών, των χόνδρων, και στο λιπώδη ιστό. Κατά συνέπεια, σε ανθρώπινο μυϊκό ιστό αντιπροσωπεύονται ως τις δεσμευμένες και μη πολυδύναμων μεσεγχυματικών προγονικών κυττάρων. Έχει αποδειχθεί ότι ένας πληθυσμός προγονικών κυττάρων που υπάρχουν στο σκελετικό μυ προέρχεται από μη δεσμευμένα πολυδύναμα μυελό των οστών μεσεγχυματικά προγονικά κύτταρα, και διαφέρει από μυογονικά δορυφορικά κύτταρα.

Στο μυοκάρδιο των νεογέννητων αρουραίων διαπίστωσε επίσης αστεροειδή κύτταρα κόλλα, κατάλληλη για το δυναμικό διαφοροποίησης των πολυδύναμων μεσεγχυματικών προγονικών κυττάρων, όπως κάτω από την επίδραση της δεξαμεθαζόνης που διαφοροποιούνται σε λιποκύτταρα, οστεοβλάστες, χονδροκύτταρα, κύτταρα λείου μυός, μυοσωλήνες του σκελετικού μυός και στα καρδιακά μυοκύτταρα. Έχει δειχθεί ότι τα αγγειακά λεία μυϊκά κύτταρα (περικύτταρα) προέρχεται πολυδύναμα μη διαφοροποιημένα μεσεγχυματικά περιαγγειακό πρόδρομα κύτταρα. Στην κουλτούρα των περιαγγειακών μεσεγχυματικών βλαστικών κυττάρων εκφράζουν ένα-λείου μυός ακτίνης και τον υποδοχέα αυξητικού παράγοντα που προέρχεται από αιμοπετάλια και είναι σε θέση να διαφοροποιούν τουλάχιστον λεία μυϊκά κύτταρα.

Μια ξεχωριστή θέση από την άποψη των βλαστικών αποθεματικών λαμβάνει χόνδρου, πολύ χαμηλή επανορθωτική δυναμικό των οποίων πιστεύεται ότι οφείλεται σε ανεπάρκεια των πολυδύναμων μεσεγχυματικών προγονικών κυττάρων ή διαφοροποίηση και αυξητικούς παράγοντες. Θεωρείται ότι τα πολυδύναμα μεσεγχυματικά προγονικά κύτταρα προ-δωρεά στη χονδρο- και οστεογένεση εισέρχονται στον χόνδρο ιστό από άλλες πηγές ιστών.

Η προέλευση του ιστού και οι συνθήκες για τη διέγερση μεσεγχυματικών προγονικών κυττάρων στους τένοντες δεν έχουν επίσης τεκμηριωθεί. παρατηρήσεις Ekspermentalnye υποδηλώνουν ότι στην πρώιμη μεταγεννητική κύτταρα τένοντα κουνελιού αχίλλειο σε πρωτογενείς καλλιέργειες στην πρώτη δίοδο και να διατηρήσει την έκφραση του κολλαγόνου τύπου Ι και ντεκορίνη, αλλά μόλις περαιτέρω καλλιέργεια χάνουν tenotsitov δείκτες διαφοροποίησης.

Θα πρέπει να σημειωθεί ότι η απάντηση στο ερώτημα αν όντως εντοπισμένη σε διάφορους ιστούς των πολυδύναμων μεσεγχυματικών προγονικών κυττάρων είναι πάντα παρούσα στο στρώμα τους, ή την πισίνα ιστού μεσεγχυματικών βλαστικών κυττάρων αντισταθμίζεται από τη μετανάστευση των οστών στρωματικά αρχέγονα κύτταρα μυελού, αυτό αναμένεται ακόμη.

Επίσης ο μυελός των οστών και άλλα μεσεγχυματικά ζώνες ιστού ενήλικα άλλη πηγή MSCs μπορεί να είναι αίμα του ομφάλιου λώρου. Έχει δειχθεί ότι ομφάλιου αίματος φλέβας λώρου περιέχει κύτταρα τα οποία έχουν παρόμοια μορφολογικά και αντιγονικά χαρακτηριστικά με πολυδύναμα μεσεγχυματικά προγονικά κύτταρα είναι ικανά πρόσφυσης, και δεν είναι κατώτερα από πολυδύναμα μεσεγχυματικά προγονικά κύτταρα του μυελού των οστών προέλευσης μέσω διαφοροποίησης δυναμικό. Σε καλλιέργειες των μεσεγχυματικών βλαστικών κυττάρων αίματος ομφάλιου λώρου ανιχνεύεται από 5 έως 10% μη δεσμευμένα πολυδύναμων μεσεγχυματικών προγονικών κυττάρων. Αποδείχθηκε ότι ο αριθμός τους στο αίμα λώρου είναι αντιστρόφως ανάλογη με την ηλικία κύησης, η οποία είναι έμμεση απόδειξη της μετανάστευσης των πολυδύναμων μεσεγχυματικών προγονικών κυττάρων σε διάφορους ιστούς κατά τη διάρκεια της εμβρυϊκής ανάπτυξης. Υπήρχαν πρώτες πληροφορίες για κλινική εφαρμογή των μεσεγχυματικών βλαστικών κυττάρων που απομονώθηκαν από το αίμα του ομφάλιου λώρου, καθώς προέρχονται εμβρυϊκών βιοϋλικών, η οποία βασίζεται στην γνωστή ικανότητα των εμβρυϊκών βλαστικών κυττάρων ενσωματώσουν και λειτουργία prizhivlyatsya σε όργανα και συστήματα ιστών ενηλίκων παραλήπτες.

Η αναζήτηση νέων πηγών μεσεγχυματικών βλαστικών κυττάρων

Η χρήση μεσεγχυματικών βλαστικών κυττάρων εμβρυϊκής προέλευσης, όπως και άλλων εμβρυϊκών κυττάρων, δημιουργεί ορισμένα ηθικά, νομικά, νομικά και νομοθετικά προβλήματα. Επομένως, συνεχίζεται η αναζήτηση για εξωεμβρυονικό κυτταρικό δότη. Προσπάθεια ήταν ανεπιτυχής κλινική εφαρμογή των ανθρώπινων ινοβλαστών δέρματος, προσδιορίστηκε από όχι μόνο την υψηλή οικονομική ικανότητα της τεχνολογίας, αλλά και η ταχεία διαφοροποίηση των ινοκυττάρων σε ινοβλάστες έχουν σημαντικά λιγότερο δυναμικό πολλαπλασιασμού και παράγουν έναν περιορισμένο αριθμό αυξητικών παραγόντων. Περαιτέρω πρόοδος στη μελέτη της βιολογίας του MSK και των πολυδύναμων μεσεγχυματικών προδρόμων μυελού των οστών επέτρεψε την ανάπτυξη μιας στρατηγικής για την κλινική χρήση των αυτόλογων μεσεγχυματικών βλαστοκυττάρων. Η τεχνολογία της απομόνωσής τους, της καλλιέργειας τους, της ex νίνο αναπαραγωγής και της κατευθυνόμενης διαφοροποίησης απαιτούσε, πρώτα απ 'όλα, τη μελέτη του φάσματος των μοριακών δεικτών MSCs. Η ανάλυσή τους έδειξε ότι στις πρωτογενείς καλλιέργειες ανθρώπινου οστικού ιστού υπάρχουν διάφοροι τύποι πολυδύναμων μεσεγχυματικών προγονικών κυττάρων. Ο φαινότυπος προ-οστεοβλάστη βρέθηκε σε κύτταρα που εκφράζουν έναν δείκτη προδρόμων στρώματος STRO-1, αλλά δεν φέρουν έναν δείκτη οστεοβλάστη - αλκαλική φωσφατάση. Τέτοια κύτταρα χαρακτηρίζονται από χαμηλή ικανότητα σχηματισμού μεταλλοποιημένης οστικής μήτρας, καθώς και από την απουσία έκφρασης οστεοποντίνης και υποδοχέα ορμόνης παραθυρεοειδούς. Τα παράγωγα των STRO-1-θετικών κυττάρων που δεν εκφράζουν αλκαλική φωσφατάση αντιπροσωπεύονται από ενδιάμεσους και πλήρως διαφοροποιημένους οστεοβλάστες. Διαπιστώνεται ότι τα κυτταρικά στοιχεία κλωνοποιημένων γραμμών STRO-1-θετικών κυττάρων ανθρώπινων δοκιδωτών οστών είναι ικανά να διαφοροποιηθούν σε ώριμα οστεοκύτταρα και λιποκύτταρα. Η διαφοροποίηση κατεύθυνση αυτών των κυττάρων εξαρτάται από την έκθεση των πολυακόρεστων λιπαρών οξέων, προφλεγμονώδεις κυτοκίνες - IL-1β και παράγοντα νέκρωσης όγκου α (ΤΝΡ-α), καθώς και αντι-φλεγμονώδη και ανοσοκατασταλτικά TGF-b.

Αργότερα βρέθηκε ότι πολυδύναμα μεσεγχυματικά πρόδρομα κύτταρα στερούνται συγκεκριμένων μόνο σε αυτούς εγγενείς φαινότυπο, αλλά εκφράζουν πολύπλοκες δείκτες, χαρακτηριστική για μεσεγχυματικά, ενδοθηλιακά, επιθηλιακά και μυϊκά κύτταρα με την απουσία της έκφρασης των αντιγόνων ανοσοφαινοτυπικών αιμοποιητικών κυττάρων - CD45, CD34 και CD14. Επιπλέον, τα μεσεγχυματικά βλαστικά κύτταρα και συντακτικά παράγουν διεγέρσιμα αιμοποιητικών και μη-αιμοποιητικών αυξητικών παραγόντων, ιντερλευκίνες, χημειοκίνες και, και σε πολυδύναμα μεσεγχυματικά πρόδρομα κύτταρα εξέφρασαν υποδοχείς για ορισμένους αυξητικούς παράγοντες και κυτοκίνες. Μεταξύ στρωματικά κύτταρα βασικά του ανθρώπινου σώματος βρέθηκε dormantnye ή ηρεμούντα κύτταρα με ανοσοφαινότυπο, σχεδόν ταυτόσημη με την αντιγονική προφίλ των πρώτων 5-φθοριοουρακίλη πολυδύναμα μεσεγχυματικά προγονικά κύτταρα - αυτά και άλλα κύτταρα εκφράζουν CD117, σήμανση «ενήλικα» βλαστοκύτταρα.

Έτσι, δεν έχει ακόμη καθιερωθεί ένας δείκτης κυττάρων μοναδικός για μεσεγχυματικά βλαστοκύτταρα. Υποτίθεται ότι τα κύτταρα ηρεμίας είναι χωρίς δέσμευση πληθυσμοί των πολυδύναμων μεσεγχυματικών προδρόμων κυττάρων, δεδομένου ότι δεν εκφράζουν δείκτες κυττάρου των προσηλωμένη στην οστεοαρθρίτιδα (CBFA-1) ή αδιπογένεσης (PPAR-y-2). Η παρατεταμένη έκθεση των ηρεμούντων βραδέως πολλαπλασιαζόμενα κύτταρα με εμβρυϊκό ορό μοσχαριού αποτελέσματα σε σχηματισμό τερματικά διαφοροποιημένους δεσμευτεί πρόδρομοι, οι οποίες χαρακτηρίζονται από ταχεία ανάπτυξη. Η κλωνική ανάπτυξη τέτοιων μεσεγχυματικών κυττάρων στελέχους υποστηρίζεται από FGF2. Φαίνεται ότι το γονιδίωμα προερχόμενα στρωματικά αρχέγονα κύτταρα «κλειστό» αρκετά σφιχτά έχει αναφερθεί σχετικά με την απουσία της αυθόρμητης διαφοροποίησης σε MSCs -. Χωρίς ειδικούς όρους για τη διάπραξη του ακόμη και αυτοί δεν μετατρέπονται σε κύτταρα μεσεγχυματικής σειράς.

Για να μελετηθεί η δομή του πληθυσμού μεσεγχυματικών Τα βλαστικά κύτταρα αναζήτηση πρωτεΐνες δείκτης διαφοροποίησης για τις κυτταρικές σειρές στρωματικών και πρωτογενείς καλλιέργειες. Σε κλωνικά κύτταρα μυελού των οστών δοκιμασία αποικίας ίη vitro βρέθηκε ότι όταν υποβάλλεται σε πρωτογενείς καλλιέργειες EGF αυξάνει το μέσο μέγεθος των αποικιών και μειώνει κλωνική έκφραση της αλκαλικής φωσφατάσης, ενώ η προσθήκη της υδροκορτιζόνης ενεργοποιεί την έκφραση της αλκαλικής φωσφατάσης η οποία είναι ένας δείκτης της οστεογονική διαφοροποίηση των MSCs προσανατολισμού. Μονοκλωνικά αντισώματα εναντίον STRO-1 κατέστησε δυνατό το διαχωρισμό και πληθυσμούς μελέτη των STRO-1-θετικά προσκολλημένα κύτταρα σε ένα ετερογενές σύστημα Dexter καλλιέργειες. Το φάσμα των κυτοκινών μην ρυθμίσει μόνο τον πολλαπλασιασμό και τη διαφοροποίηση των αιμοποιητικών και λεμφοειδών κυττάρων, αλλά επίσης να συμμετάσχουν στον σχηματισμό, το σχηματισμό και την επαναρρόφηση των σκελετικών ιστών από παρα-, αυτό- και ενδοκρινικές μηχανισμούς. Receptor-μεσολαβούμενη απελευθέρωση των δευτερογενών αγγελιοφόρων όπως cAMP, διακυλογλυκερόλη, τριφωσφορική ινοσιτόλη, και Ca2 + χρησιμοποιούνται επίσης για ανάλυση δείκτη των διαφορετικών κατηγοριών των ιστών στρωματικών κυττάρων που εκφράζουν τους σχετικούς υποδοχείς. Η χρήση μονοκλωνικών αντισωμάτων σαν δείκτες επέτρεψε να διαπιστωθεί λεμφοειδή όργανα στρωματικά ανήκουν δικτυωτά κύτταρα για Τ και Β-εξαρτώμενη ζώνες.

Για κάποιο χρονικό διάστημα συνεχίστηκαν επιστημονικές διαμάχες γύρω από το ζήτημα της πιθανότητας προέλευσης του MSC από τα αιματοποιητικά βλαστοκύτταρα. Πράγματι, όταν εκφύτευση εναιώρημα κυττάρων μυελού των οστών σε μονοστρωματική καλλιέργεια στην οποία διακριτές αποικίες αναπτύσσονται ινοβλάστες. Ωστόσο, έχει αποδειχθεί ότι η παρουσία των προδρόμων αποικιών ινοβλαστών και διαφόρων μικροβίων διαφοροποίηση των αιμοποιητικών ιστών ως μέρος του μυελού των οστών δεν είναι απόδειξη της κοινής τους προέλευσης των αιμοποιητικών βλαστικών κυττάρων. Χρησιμοποιώντας διακρίνουσα ανάλυση των βλαστικών κυττάρων του μυελού των οστών διαπίστωσε ότι το μικροπεριβάλλον σε ετεροτοπική μεταμόσχευση, αιμοποιητικά κύτταρα του μυελού των οστών μεταφέρεται, γεγονός που αποδεικνύει την ύπαρξη, στο μυελό των οστών ανεξάρτητη από histogenetic πληθυσμού MSC αιμοποιητικών κυττάρων.

Επιπλέον, η επιλεκτική μέθοδος κλωνοποίησης αποκαλύφθηκε σε καλλιέργειες μονοστοιβάδας των στρωματικών κυττάρων του μυελού των οστών μιας νέας κατηγορίας των προδρόμων κυττάρων για να προσδιοριστεί ο αριθμός τους, να μελετήσουν τις ιδιότητες, πολλαπλασιαστικών και διαφοροποίηση των δυνατοτήτων τους. Διαπιστώθηκε ότι in vitro στρωματικά κύτταρα που μοιάζουν με ινοβλάστες πολλαπλασιάζονται και σχηματίζουν διπλοειδή αποικίες ότι όταν αντίστροφη μεταμόσχευση στο σώμα εξασφαλίζοντας το σχηματισμό νέων αιμοποιητικά όργανα. Τα αποτελέσματα των μελετών των μεμονωμένων κλώνων δείχνουν ότι υπάρχει ένας πληθυσμός κυττάρων σε πολλαπλασιαστικές και διαφοροποίηση δυναμικό τους είναι σε θέση να διεκδικήσει το ρόλο των βλαστικών κυττάρων του ιστού στρωματικών, Gistogeneticheskaja ανεξάρτητη των αιμοποιητικών βλαστικών κυττάρων στα στρωματικά προγονικά κύτταρα. Τα κύτταρα αυτού του πληθυσμού χαρακτηρίζονται από αυτοσυντηρούμενη ανάπτυξη και διαφοροποιούνται σε προγονικά κύτταρα οστού, χόνδρου και δικτυωτού ιστού μυελού των οστών.

Μεγάλο ενδιαφέρον παρουσιάζουν τα αποτελέσματα των μελετών Chailakhyan R. Et αϊ (1997-2001), τα οποία καλλιεργήθηκαν προέρχονται από μυελό οστών στρωματικά προγονικά κύτταρα κουνέλια, ινδικά χοιρίδια, και τα ποντίκια της α-ΜΕΜ μέσο καλλιέργειας συμπληρωμένο με ορό εμβρύου μόσχου. Οι συγγραφείς διεξήγαγαν την έκφυση με αρχική πυκνότητα 2-4 χ 103 κυττάρων μυελού των οστών ανά 1 cm2. Όπως χρησιμοποιείται τροφοδότης ομόλογη ή ετερόλογη αδρανοποιηθεί με ακτινοβόληση των κυττάρων μυελού των οστών σε ένα δράση συγκράτησης τροφοδότη δόση, αλλά εντελώς αποκλεισμένη πολλαπλασιασμό. Δυο εβδομάδες πρωτοταγείς διακεκριμένες αποικίες ινοβλαστών υποβλήθηκαν σε θρυψίνη για να παραχθούν μονοκλωνικά στελέχη. Αποδεικτικά στοιχεία κλωνική αποικίες προέλευσης ελήφθησαν χρησιμοποιώντας χρωμοσωμικών δεικτών σε μικτές καλλιέργειες μυελού των οστών των αρσενικών και θηλυκών ινδικά χοιρίδια, time-lapse γυρίσματα ζωντανών καλλιεργειών, καθώς και σε μικτές καλλιέργειες μυελού των οστών του συγγενή ποντίκια και CBA SVAT6T6. πολτός Μεταμόσχευση πρόσφατα απομονωμένων κυττάρων μυελού των οστών καλλιεργούνται in vitro ή στρωματικών ινοβλαστών κάτω από τη νεφρική κάψα διεξήχθη σε ivalonovyh πορώδη ικριώματα ή ζελατίνη, καθώς και αδρανοποιημένο κουνέλι μήτρα σπογγώδους οστού. κλώνοι Μεταμόσχευση μέσα στο κάλυμμα του οστού ινδικού χοιριδίου μηρούς καθαρίζονται από μαλακό ιστό και περιόστεο, κόψτε το επίφυσης και πλένοντας προσεκτικά μυελό των οστών τους. Το οστό κόπηκε σε θραύσματα (3-5 mm), ξηράνθηκε και ακτινοβολήθηκε σε δόση 60 Gy. Στα οστεώδη καλύμματα τοποθετήθηκαν μεμονωμένες αποικίες ινοβλαστών και εμφυτεύθηκαν ενδομυϊκά. Για ενδοπεριτοναϊκή μεταμόσχευση των ινοβλαστών στρωματικών, καλλιεργούνται in vitro, χρησιμοποιήσαμε τύποι ένας θάλαμος διάχυσης (V = 0.015 cm 3, h = 0, l mm) και D (V = 0,15 cm 3, h = 2 mm).

Κατά τη μελέτη της δυναμικής της ανάπτυξης των κλωνικών στελεχών Chailakhyan R. Et al (2001) βρήκαν ότι τα ξεχωριστά κύτταρα, σχηματισμού αποικιών ινοβλάστες, καθώς και οι απόγονοί τους έχουν μεγάλες πολλαπλασιαστικές δυναμικό. Με το δέκατο πέρασμα, ο αριθμός των ινοβλαστών σε ορισμένα στελέχη ήταν 1,2-7,2 χ ¹⁰⁹ κύτταρα. Κατά τη διαδικασία της ανάπτυξής τους, πραγματοποίησαν μέχρι και 31-34 κυτταρικές επικαλύψεις. Έτσι ετεροτοπική μεταμόσχευση των στελεχών που προέρχονται από μυελό των οστών που σχηματίζεται από στρωματικά προδρόμων αρκετές δεκάδες κλώνους οδήγησε στη μεταφορά του μικροπεριβάλλοντος του μυελού των οστών και την εκπαίδευση στη νέα μεταμόσχευση οργάνων ζώνη αιμοποιητικών. Οι συγγραφείς έθεσε το ερώτημα του κατά πόσον ξεχωριστών κλώνων μπορούν να ανεχθούν τα κύτταρα των οστών μικροπεριβάλλον του μυελού των στρωματικών, ή απαιτεί τη συνεργασία των διαφόρων διαφορετικών κλωνογόνων στρωματικά προγονικά; Και αν ξεχωριστοί κλώνοι θα είναι σε θέση να μεταφέρει το μικροπεριβάλλον, αν είναι γεμάτο από τα τρία αίματος μικρόβιο, ή διαφορετικών κλώνων παρέχει το σχηματισμό των αιμοποιητικών μικροπεριβάλλον για διάφορα μικρόβια; Για να αντιμετωπιστούν αυτά τα ζητήματα έχει αναπτυχθεί τεχνολογία της καλλιέργειας στρωματικών προγονικών κυττάρων στη γέλη κολλαγόνου που σας επιτρέπει να πυροβολήσει από την επιφάνεια των ινοβλαστών που καλλιεργούνται αποικιών για επακόλουθη ετεροτοπική μεταμόσχευση. Ξεχωριστοί κλώνοι ινοβλαστών στρωματικά, κύτταρα μυελού των οστών που προέρχονται από ποντικούς CBA και ινδικά χοιρίδια, κόβεται μαζί με ένα θραύσμα του τριχώματος γέλης και μεταμοσχεύονται ετεροτοπική - υπό την κάψουλα του νεφρού των συγγενικών ποντικών ή αυτόλογων ινδικά χοιρίδια μυών της κοιλιάς. Όταν μεταμοσχεύτηκαν στον μυ, οι αποικίες στο πήκτωμα τοποθετήθηκαν στα οστεώδη καλύμματα.

Έχουμε βρει ότι κατά 50-90 ημέρες μετά τη μεταμόσχευση των αποικίας των ινοβλαστών μυελού των οστών σε 20% των περιπτώσεων παρατηρήθηκαν στην ανάπτυξη περιοχή μεταμόσχευση οστού ή οστού και αιματοποιητικό ιστό. Σε 5% των ζώων δεκτών που σχηματίζονται θύλακες οστού που έχει μία κοιλότητα γεμάτη με μυελό των οστών. Μέσα κύλινδροι των οστών όπως εστίες έχουν στρογγυλεμένο σχήμα και μια κάψουλα κατασκευασμένη του οστικού ιστού, με οστεοκύτταρα και καλά ανεπτυγμένες στρώμα οστεοβλαστικές. κοιλότητα του μυελού των οστών περιέχει δικτυωτό ύφασμα με μυελοειδή και ερυθροειδή κύτταρα, οι αναλογίες των οποίων δεν διαφέρουν από ότι στο φυσιολογικό μυελό των οστών. Η νεφρικού μοσχεύματος ήταν ένα τυπικό μυελικού σώμα που σχηματίζεται από γηγενείς μεταμόσχευση μυελού των οστών, όπου κάψουλα οστού καλύπτει μόνο την μυελική κοιλότητα από την νεφρική κάψα. Αιμοποιητικών ιστών περιλαμβάνονται μυελοειδή, μεγακαρυοκυτταρική και ερυθροειδή στοιχεία. Στρώμα του μυελικού σωλήνα ήταν ιγμόρεια καλά αναπτυγμένη και περιείχε το τυπικό σύστημα λίπους κυττάρων. Ταυτόχρονα, στον τομέα της μεταμόσχευσης κάποιου αποικιών οστού χωρίς σημάδια αιματοποίησης ευρέθη κάτω από την κάψα του νεφρού. Μελέτη των πολλαπλασιαστικών και διαφοροποίησης δραστικότητα των μεμονωμένων κλώνων συνεχίστηκαν επί στελέχη μονοκλωνικών μυελό των οστών κονίκλου, τα κύτταρα επαναιωρούνται σε μέσο καλλιέργειας και σε ένα ξεχωριστό σφουγγάρι ivalonovoy ζυγίζουν 1-2 mg μπαίνει κάτω από την κάψουλα του νεφρού του δότη του μυελού των οστών κουνελιού. Αυτά τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε αυτομεταμόσχευση 21 μονοκλωνικό στέλεχος. Τα αποτελέσματα λήφθηκαν υπόψη σε 2-3 μήνες. διαπίστωσε Οι συγγραφείς ότι το 14% των μεταμοσχευμένων μονοκλωνικών μυελού των στελεχών των οστών σχηματίζεται σώμα αποτελείται από κοιλότητα του οστού και του μυελού των οστών που γεμίζουν με αιμοποιητικά κύτταρα. Σε 33% των περιπτώσεων μεταμοσχευμένων στελεχών σχηματίζονται συμπαγή οστά με διαφορετικές κοιλότητες μέγεθος ostootsitami bricked στην οστεοβλαστική και ανεπτυγμένες στρώμα. Σε ορισμένες περιπτώσεις, σφουγγάρια μεταμοσχευμένα κλώνοι αναπτύχθηκαν δικτύωμα χωρίς οστά ή αιμοποιητικών κυττάρων. Μερικές φορές δικτυωτού σχηματισμού στρώματος συνέβη με ένα καλά αναπτυγμένο δίκτυο ημιτονοειδών, αλλά δεν κατοικείται τα αιμοποιητικά κύτταρα. Έτσι, τα αποτελέσματα που λήφθηκαν ήταν παρόμοια με εκείνα που λαμβάνονται με μεταμόσχευση των κλώνων επί πηκτώματος κολλαγόνου. Ωστόσο, εάν η μεταμόσχευση κλώνους που καλλιεργούνται επί του υποστρώματος είχε ως αποτέλεσμα το σχηματισμό του ιστού του μυελού είναι 5% του οστού - 15% και το ύφασμα δικτυωτή - στο 80% των περιπτώσεων, το μονοκλωνικό μεταμόσχευση στελέχη σχηματισμό κυττάρων μυελού των οστών παρατηρήθηκε σε 14% των περιπτώσεων των οστών - σε 53% και σε δικτυωτό - σε 53% των περιπτώσεων. Σύμφωνα με τους συγγραφείς, αυτό δείχνει ότι οι προϋποθέσεις για την εφαρμογή των πολλαπλασιαστικών και διαφοροποίησης δυναμικό των ινοβλαστών στρωματικών όταν μεταμοσχεύονται επί πορωδών ικριωμάτων ήταν πιο βέλτιστο παρά με μεταμοσχεύσεις τους στο οστό και καλύπτει το υπόστρωμα κολλαγόνου. Δεν αποκλείεται ότι η χρήση των πιο προηγμένων μεθόδων καλλιέργειας και της μεταμόσχευσης των σχολίων κλώνων μπορεί να βελτιώσει τις συνθήκες για την εφαρμογή των κλώνων δυνατότητες διαφοροποίησης της και να αλλάξετε αυτές τις σχέσεις. Ένα ή τον άλλο τρόπο, αλλά η κύρια αξία της έρευνας έγκειται στο γεγονός ότι ορισμένες από τους κλώνους στρωματικά κύτταρα ικανά να σχηματίζουν οστό ιστού, εξασφαλίζοντας παράλληλα στρωματικά αιματοποιητικών μικροπεριβάλλον αμέσως για τρεις λάχανα του αίματος μυελού των οστών: ερυθροειδών, μυελοειδών και μεγακαρυωτικών, δημιουργώντας ένα αρκετά μεγάλο αναλημμάτων ιστού αιμοποιητικών και κάποια οστική μάζα.

Περαιτέρω, οι συγγραφείς ασχολήθηκε με το θέμα της ικανότητας για αυτούς τους τύπους της κυτταρικής διαφοροποίησης των μεμονωμένων κλωνογονικών στρωματικών προγονικών κυττάρων σε ένα κλειστό σύστημα των θαλάμων διάχυσης. Επιπλέον, ήταν απαραίτητο να προσδιοριστεί κατά πόσον οι μεμονωμένοι κλώνοι των πολυδύναμων έκθεμα ή οθόνη για τη διαφοροποίηση δυνατοτήτων αυτών απαιτεί την συνεργατική αλληλεπίδραση πολλών κλώνων με σταθερή πινακίδα κυτταροδιαφοροποίησης, διαφορετική αναλογία των οποίων καθορίζει την προτιμησιακή σχηματισμό οστού, χόνδρου ή δικτυωτή. Με το συνδυασμό δύο μεθοδολογικές προσεγγίσεις - μονοκλωνικό απομονώνει οστών στρωματικά μυελού προγονικά κύτταρα και μεταμόσχευση τους σε θαλάμους διάχυσης, Chailakhyan R. Et al (2001) λαμβανόμενα αποτελέσματα που αφήνεται να προσεγγίσει την κατανόηση της δομικής οργάνωσης του στρώματος του μυελού των οστών. Μεταμόσχευση μονοκλωνικό στελέχη στρωματικά προγονικά κύτταρα σε κύτταρα τύπου O αποτέλεσμα το σχηματισμό τόσο ιστού οστού και του χόνδρου, αποδεικνύοντας την ικανότητα των απογόνων ενός στρωματικών κυττάρων σχηματισμού αποικίας που σχηματίζουν ταυτόχρονα οστού και χόνδρου. Η υπόθεση ότι το οστό και ο χόνδρος ιστός προέρχεται από το κοινό στρωματικό προγονικό κύτταρο έχει επανειλημμένα εκφραστεί επανειλημμένα. Ωστόσο, αυτή η υπόθεση δεν είχε σωστή πειραματική επιβεβαίωση. Σχηματισμού οστού και χόνδρου σε θαλάμους διάχυσης ήταν αναγκαίο να αποδειχθεί η ύπαρξη των βλαστικών κυττάρων περιλαμβάνουν οστών πρόδρομα στρωματικά κύτταρα του μυελού κοινές για αυτούς τους δύο τύπους ιστών.

Στη συνέχεια, 29 κλωνικές στελέχη δεύτερη και τρίτη διόδους, πρωτογενείς καλλιέργειες που προέρχονται από το μυελό των οστών του κουνελιού τοποθετήθηκαν σε θαλάμους διάχυσης και εμφυτεύονται ενδοπεριτοναϊκώς ομόλογη ζώων. Μελέτες έχουν δείξει ότι το 45% των μονοκλωνικών στελεχών του μυελού των οστών έχει οστεογονικές ιδιότητες. Κατ 'εξαίρεση δικτυωτό ύφασμα που περιέχεται θαλάμους 9, αλλά με το οστό και ιστό χόνδρου είναι ακόμη παρούσα στους θαλάμους 13, που αντιπροσωπεύουν το 76% όλων των στελεχών. Σε θαλάμους τύπου Ο, όπου ήταν δυνατή η διαφοροποίηση τόσο για τον οστό όσο και για τον χόνδρο ιστό, μελετήθηκαν 16 στελέχη. Σε τέσσερις θαλάμους (25%), σχηματίστηκε τόσο οστό όσο και ιστός χόνδρου. Θα πρέπει και πάλι να σημειωθεί ότι οι μελέτες Chailakhyan R. Et al (2001) μεμονωμένα προγονικά κύτταρα υποβλήθηκαν σε κυτταρικό στέλεχος αποτελείται από 31 έως 34 διπλασιασμούς, και οι απόγονοι τους ήταν 0,9-2,0 × 10 ⁹ κύτταρα. Αριθμός της μίτωσης, η οποία εκτίθεται πρόδρομα κύτταρα πολύκλωνο στελέχη δεν διέφερε από εκείνο των στελεχών μονοκλωνικού κυττάρου. Έτσι, ο ρυθμός της ανάπτυξης πολυκλωνικών στελεχών, ειδικά στην πρώτη φάση του σχηματισμού τους, σε μεγάλο βαθμό εξαρτάται από τον αριθμό των αποικιών που χρησιμοποιούνται για την κίνηση των στελεχών. Διπλοειδή στελέχη ανθρώπινων εμβρυϊκών ινοβλαστών (WI-38) για 12-15 reklonirovanii ου επίπεδα διπλασιασμού σχηματίζεται επίσης αποικίες διαφορετικής διαμέτρου και στο περιεχόμενό τους των κυττάρων. Μεγάλες αποικίες που περιείχαν περισσότερα από 103 κύτταρα ήταν μόνο 5-10%. Με την αύξηση του αριθμού των διαιρέσεων, το ποσοστό των μεγάλων αποικιών μειώθηκε. Τα μονο- και πολυκλωνικά στελέχη ινοβλαστών του στρώματος του μυελού των οστών διατήρησε ένα διπλοειδές χρωμόσωμα που μετά από 20 ή περισσότερες διπλασιασμούς, και την τάση της ανάπτυξης ήταν συγκρίσιμη με τη δυναμική της διπλοειδή στελέχη εμβρυϊκούς ινοβλάστες. Ανάλυση των δυνητικών διαφοροποίηση συγκεκριμένων μυελού των οστών στρωματικά προγονικά κύτταρα, διενεργήθηκε από μονοκλωνικά στελέχη μεταμόσχευση σε θαλάμους διάχυσης, έδειξε ότι οι μισοί από αυτούς οστεογόνου. Οι μεγάλες αποικίες αντιπροσώπευαν το 10% του συνολικού αριθμού τους. Συνεπώς, ο αριθμός των οστεογονικών κυττάρων σχηματισμού αποικίας αντιστοιχούσε σε περίπου 5% του συνολικού πληθυσμού τους. Στη συνολική μάζα των οστεογονικών προγονικών κυττάρων που ταυτοποιήθηκαν από τους συγγραφείς, υπήρχαν κύτταρα ικανά να σχηματίζουν ταυτόχρονα οστό και χόνδροϊο ιστό. Για πρώτη φορά διαπίστωσε ότι για αυτούς τους δύο τύπους ιστών στον ενήλικα οργανισμό είναι το κοινό πρόδρομο κύτταρο: 25% των δοκιμαζόμενων κλώνων δημιουργήθηκαν από παρόμοια κύτταρα, και οι αριθμοί τους στο γενικό πληθυσμό προγονικών κυττάρων δεν ήταν μικρότερη από 2,5%.

Έτσι, η ετεροτοπική μεταμόσχευση μεμονωμένων κλώνων ινοβλαστών μυελού των οστών έχει ανοίξει νέες πλευρές της δομικής οργάνωσης του πληθυσμού μεσεγχυματικών προγονικών κυττάρων. Βρέθηκαν στρωματικά προγονικά κύτταρα ικανά να μεταφέρουν ειδικών μικροπεριβάλλον αμέσως για κάθε αιμοποιητικά βλαστικά οποία αριθμός μεταξύ των κλώνων ερευνήθηκαν μεγαλύτερα σε διαφορετικά μοντέλα είναι από 5 έως 15% (0,5-1,5% του συνολικού αριθμού των προγονικών κυττάρων που ανιχνεύονται). Μαζί με τους κλώνους, μεταφέροντας πλήρης μικροπεριβάλλον του μυελού των οστών, υπάρχουν προγονικά κύτταρα, ντετερμινιστικό μόνο με το σχηματισμό οστών, τα οποία σχηματίζονται όταν μεταφέρεται σε ένα ανοικτό σύστημα, το οστό που δεν υποστηρίζει την ανάπτυξη της αιμοποίησης. Ο αριθμός τους από τον συνολικό αριθμό προγονικών κυττάρων είναι 1,5-3%. Μερικά από αυτά τα κύτταρα μπορούν να σχηματίσουν ιστό οστών με περιορισμένη περίοδο αυτοεξυπηρέτησης. Κατά συνέπεια, ο πληθυσμός των στρωματικών προγονικών κυττάρων είναι ετερογενής στο δυναμικό διαφοροποίησης. Μεταξύ αυτών υπάρχει ένα κύτταρο κατηγορία, υποστηρίζοντας το ρόλο των στρωματικών βλαστοκυττάρων ικανά διαφοροποίησης σε όλες τις τρεις διαστάσεις είναι συνυφασμένες με στρωματικό ιστό του μυελού των οστών, που σχηματίζουν οστό, χόνδρο και δικτυωτή ιστού. Αυτά τα δεδομένα μας επιτρέπουν να ελπίζουμε ότι με τη βοήθεια των διαφόρων δεικτών κυττάρου θα είναι δυνατόν να προσδιοριστεί η συμβολή κάθε τύπο των στρωματικών κυττάρων στο μικροπεριβάλλον του ειδικού οργανισμού και υποστηρίζουν αιματοποίηση σε Dexter καλλιέργειες.

Χαρακτηριστικά των μεσεγχυματικών βλαστικών κυττάρων

Τα τελευταία χρόνια, διαπίστωσε ότι σε σταθερές καλλιέργειες μυελού των οστών μεσεγχυματικών πολυδύναμα προγονικά κύτταρα παρουσίασαν περιορισμένο πληθυσμό μικρών χωρίς κοκκία κύτταρα κύτταρα (RS-1), που χαρακτηρίζεται από χαμηλή ικανότητα αποικισμού και απουσία Ki-67 έκφραση αντιγόνου ειδικό για πολλαπλασιαζόμενα κύτταρα. Αντιγονικά παράμετροι dormantnyh RS-1 κύτταρα είναι διαφορετικό από το φάσμα των δεσμευτεί αντιγόνων ταχέως πολλαπλασιαζόμενα στρωματικά προγονικά κύτταρα. Διαπιστώθηκε ότι ένα υψηλό ρυθμό πολλαπλασιασμού των δεσμευμένων προγονικών κυττάρων παρατηρήθηκε μόνο με την παρουσία των RS-1 κύτταρα. Με τη σειρά του, RS-1 κύτταρα αυξάνει το ρυθμό της ανάπτυξης υπό την επίδραση των παραγόντων που εκκρίνονται από τα πιο ώριμα προερχόμενα πολυδύναμα μεσεγχυματικά προγονικά κύτταρα. Φαίνεται ότι RS-1 κύτταρα είναι ένα υποσύνολο των μη δεσμευμένων MSCs ικανή ανακύκλωσης. In vitro ανθεκτικά σε 5-φθοριοουρακίλη στρωματικά προγονικά κύτταρα του μυελού των οστών η οποία χαρακτηρίζεται από χαμηλή περιεκτικότητα σε RNA και υψηλά επίπεδα έκφρασης του γονιδίου αποκαρβοξυλάσης της ορνιθίνης - δείκτη μη-πολλαπλασιαζόμενα κύτταρα.

Εντατική εκτροφή στρωματικά προγονικά κύτταρα αρχίζει μετά από στερέωση τους πάνω στο υπόστρωμα. Όταν αυτή εκφράζεται προφίλ δείκτης ελάχιστα διαφοροποιημένων κυττάρων: SH2 (ΤΟΡ-υποδοχέα (3), SH3 (πρωτεΐνη σηματοδότησης τομέα), κολλαγόνο τύπου Ι και III, φιμπρονεκτίνη, VCAM-1 υποδοχέα προσκόλλησης (CD106) και ICAM (CD54), η καντερίνη-11 , CD44, CD71 (υποδοχέας τρανσφερίνης), CD90, CD120a και CD124, αλλά χωρίς έκφραση της χαρακτηριστικής δεικτών των αιμοποιητικών βλαστικών κυττάρων (CD34, CD14, CD45). κλωνική ανάπτυξη επιτρέπει επανειλημμένα ανακαλλιεργήθηκαν μεσεγχυματικά βλαστικά κύτταρα για να παράγουν μία καλλιέργεια πολλών γενετικώς ομοιογενούς στρωματικά προγονικά πολυδύναμα κυττάρων. 2-3 το πέρασμα από τον αριθμό τους φτάνει 50-300 εκ. Στην κουλτούρα επαρκούς πυκνότητας μετά τη διακοπή του πολλαπλασιασμού των στρωματικών προγονικών κυττάρων, σε αντίθεση με αιμοποιητικά ινοβλάστες ιστό διαφοροποιούνται σε λιποκύτταρα, μυοκύτταρα, κύτταρα χόνδρου, και οστικό ιστό. Ο συνδυασμός των ρυθμιστικών σημάτων τριών διαφοροποίηση η οποία περιλαμβάνει 1-μεθυλ-izobutilksantin (επαγωγέας του σχηματισμού ενδοκυτταρικού cAMP), δεξαμεθαζόνη (έναν αναστολέα της φωσφολιπάσης α και C) και ινδομεθακίνη (ένα αναστολέα κυκλοοξυγενάσης, δράση μείωσης της θρομβοξάνης και) μετατρέπει σε λιποκύτταρα και 95% μεσεγχυματικών προγονικών κυττάρων. σχηματισμό λιποκυττάρων από ανώριμα στρωματικά κύτταρα επιβεβαίωσε έκφραση του γονιδίου της λιποπρωτεϊνικής λιπάσης, ιστοχημική ταυτοποίηση των απολιποπρωτεϊνών και peroxysomal υποδοχείς. Κύτταρα του ίδιου κλώνου επηρεάζονται από ΤΟΡ-β σε μέσο ελεύθερο ορού δημιουργεί ένα ομοιογενή πληθυσμό χονδροκυττάρων. Η καλλιέργεια πολλαπλών στρώσεων κυττάρων του χόνδρου εξωκυττάριας μήτρας χαρακτηρίζεται αναπτυχθεί αποτελείται από πρωτεογλυκάνης και κολλαγόνου τύπου II. Το θρεπτικό μέσο με 10% σήματα διαφοροποίηση επίδραση ορό εμβρύου συγκρότημα που αποτελείται από β-γλυκεροφωσφορικού (donator ανόργανο φωσφορικό), ασκορβικό οξύ και δεξαμεθαζόνη, στην ίδια καλλιέργεια στρωματικών προγονικών προγονικών κυττάρων οδηγεί στο σχηματισμό των κυτταρικών συσσωματωμάτων. Σε τέτοια κύτταρα, υπάρχει μία προοδευτική αύξηση της δραστηριότητας των επιπέδων αλκαλικής φωσφατάσης και οστεοποντίνη, υποδεικνύοντας τον σχηματισμό ανοργανοποίησης οστού τα οποία κύτταρα επιβεβαίωσε μια προοδευτική αύξηση του ενδοκυτταρικού ασβεστίου.

Σύμφωνα με ορισμένους, η ικανότητα των μεσεγχυματικών βλαστικών κυττάρων να διαιρούνται επ 'αόριστον και αναπαραγωγή των διαφόρων τύπων μεσεγχυματική γράμμωση κύτταρα συνδυάζονται με ένα υψηλό βαθμό πλαστικότητας. Όταν χορηγούνται μέσα στις κοιλίες, ή λευκή ουσία μεσεγχυματικά βλαστικά κύτταρα μεταναστεύουν μέσα στο παρέγχυμα του νευρικού ιστού και διαφοροποιούνται σε νευρωνικούς ή νευρογλοιακά προέρχονται κυτταρική γραμμή. Επιπλέον, υπάρχουν πληροφορίες για MSC transdifferentiation σε αιμοποιητικά βλαστικά κύτταρα, τόσο in vitro, και ίη νίνο. Μια πιο σε βάθος ανάλυση σε μερικές μελέτες προσδιορίζεται εξαιρετικά υψηλή ολκιμότητα των MSCs, η οποία εκδηλώνεται στην ικανότητά τους να διαφοροποιούνται σε αστροκύτταρα, ολιγοδενδροκύτταρα, νευρώνες, καρδιομυοκύτταρα, λεία μυϊκά κύτταρα και κύτταρα σκελετικού μυός. Σε μια σειρά από μελέτες transdifferentsirovochnogo δυναμικού των MSCs in vitro και in vivo διαπίστωσε ότι πολυδύναμα πρόδρομα μεσεγχυματικά κύτταρα προέλευσης μυελού των οστών διαφοροποιούνται τερματικά σε κυτταρικές γραμμές που σχηματίζουν οστό, χόνδρο, μυ, των νεύρων και στο λιπώδη ιστό, καθώς επίσης και τους τένοντες και στο στρώμα που υποστηρίζει αιματοποίηση .

Ωστόσο, σε άλλες μελέτες, δεν υπάρχουν ενδείξεις γονιδιώματος πλειοδυναμίας περιορισμού των μεσεγχυματικών βλαστικών κυττάρων και δεν θα μπορούσε να ανιχνευθεί στρωματικών προγονικών κυτταρικών πληθυσμών, αλλά να ελέγξει τα πιθανά κύτταρα πολυδύναμα στρωματικά διερευνήθηκε περισσότερο από 200 κλώνοι MSC απομονώνεται από μία πρωτεύουσα καλλιέργεια. Η συντριπτική πλειοψηφία των κλώνων ίη vitro διατήρησαν την ικανότητα να διαφοροποιούνται σε οστεογόνες, χονδρογονική και αδιπογονική κατευθύνσεις. Όταν αποκλείεται η πιθανότητα της μετανάστευσης των κυττάρων δεκτών με μεταμόσχευση μεσεγχυματικών βλαστικών κυττάρων κάτω από την κάψα του νεφρού ή σε θαλάμους διάχυσης φάνηκε ότι τα στρωματικά προγονικά κύτταρα in situ διατηρούν ετερογενή φαινότυπο, η οποία υποδεικνύει είτε την απουσία ενός μοσχεύματος ζώνη παράγοντες περιορισμού ή την απουσία του και μόνο πολυδύναμων MSCs. Ταυτόχρονα, επέτρεψε την ύπαρξη ενός σπάνιου τύπου σωματικών πολυδύναμα βλαστικά κύτταρα, τα οποία είναι κοινές πρόδρομες ουσίες των ενήλικων βλαστικών κυττάρων.

Στις πολυ-, αλλά δεν είναι αλήθεια πολυδύναμα μεσεγχυματικά βλαστικά κύτταρα αποτελούν ένα πολύ μικρό κλάσμα των κυττάρων μυελού των οστών και είναι ικανά, σε ορισμένες περιπτώσεις, όταν καλλιεργούνται ίη vitro για να πολλαπλασιάζονται χωρίς να έρχεται σε διαφοροποίηση, όπως αποδεικνύεται από επαγόμενη δέσμευση γράμμωσης τους των κυττάρων στο οστό, χόνδρο, λίπος, μυϊκό ιστό και σε tenotsity και στρωματικά στοιχεία που υποστηρίζουν αιματοποίηση. Τυπικά, η συνεχής έκθεση σε μέσο καλλιέργειας με ορό εμβρύου μόσχου προκαλεί MSCs εξόδου σε στρωματικά των δεσμευμένων προγονικών κυττάρων, οι απόγονοι των οποίων υφίσταται αυθόρμητη τελική διαφοροποίηση. In vitro δυνατόν να επιτευχθεί σχηματισμός κατεύθυνσης των οστεοβλαστών με την προσθήκη στο μέσο εγκλιματισμού δεξαμεθαζόνη, β-γλυκεροφωσφορικό και ασκορβικό οξύ, ενώ ο συνδυασμός της διαφοροποίησης σηματοδοτεί δεξαμεθαζόνης και ινσουλίνη επάγει το σχηματισμό των λιποκυττάρων.

Διαπιστώθηκε ότι πριν από την είσοδο στο στάδιο της τελικής διαφοροποίησης μυελού των οστών MSCs να δημιουργηθούν ορισμένες συνθήκες καλλιέργειας αρχικά διαφοροποιούνται σε παρόμοια με ινοβλάστη μεσεγχυματικά βλαστικά κύτταρα. Παράγωγα αυτών των κυττάρων in vivo εμπλέκονται στο σχηματισμό οστού, χόνδρου, τένοντα, λιπώδους και μυϊκού ιστού καθώς και την υποστήριξη στρωματικών αιμοποίηση. Πολλοί συγγραφείς κατανοούν ο όρος «πολυδύναμα μεσεγχυματικά προγονικά κύτταρα», όπως πράγματι MSCs, και οι δεσμευμένες στρωματικά προγονικά κύτταρα και μεσεγχυματικών ιστών του μυελού των οστών. Κλωνική ανάλυση των μεσεγχυματικών πολυδύναμων προγονικών κυττάρων του μυελού των οστών προέλευσης έδειξε ότι λίγο περισσότερο από το ένα τρίτο των κλώνων διαφοροποιούνται σε οστεο-, hondro- και λιποκύτταρα, ενώ άλλοι κλώνοι κύτταρα έχουν οστεογόνο δυναμικό και μια μορφή μόνο hondro- και οστεοκύτταρα. Αυτός ο κλώνος πολυδύναμων μεσεγχυματικών προδρόμων κυττάρων ως IUD-9, υπό κατάλληλες συνθήκες μικροπεριβάλλοντος διαφοροποιήθηκαν σε κύτταρα με φαινότυπο και λειτουργικά χαρακτηριστικά όχι μόνο των οστεοβλαστών, χονδροκυττάρων και adic potsitov αλλά στρωματικά κύτταρα που υποστηρίζουν αιματοποίηση. Απομονώνεται από κύτταρα μυελού εμβρυϊκού οστού αρουραίου κλωνοποιήσουν RCJ3.1 διαφοροποιημένα μεσεγχυματικά κύτταρα των διαφορετικών φαινοτύπων. Με τη συνδυασμένη δράση του ασκορβικού οξέος, b-γλυκεροφωσφορικό, και δεξαμεθαζόνης από κυτταρικά στοιχεία αυτού του κλώνου σχηματίζεται πρώτα πολυπύρηνα μυοκύτταρα και στη συνέχεια, διαδοχικά, λιποκύτταρα, χονδροκύτταρα και νησίδες ανοργανοποιημένου οστού. Ο πληθυσμός των κοκκωδών κυττάρων από το περιόστεο της έμβρυα αρουραίων αντιστοιχεί σε μη δεσμευμένα πολυδύναμα μεσεγχυματικά προγονικά κύτταρα, όπως χαρακτηρίζεται από ένα χαμηλό ρυθμό πολλαπλασιασμού, δεν εκφράζει δείκτες διαφοροποίησης και διαφοροποιούνται σε συνθήκες καλλιέργειας για τον σχηματισμό hondro-, οστεο- και λιποκύτταρα και κύτταρα λείου μυός.

Έτσι, θα πρέπει να αναγνωριστεί ότι το ζήτημα της plyuri- ή πολυδυναμικότητα γονιδίωμα των μεσεγχυματικών βλαστικών κυττάρων είναι ακόμη ανοικτή, η οποία επηρεάζει, κατά συνέπεια, την παρουσίαση των δυνατοτήτων διαφοροποίησης των στρωματικών προγονικών κυττάρων, η οποία είναι επίσης δεν έχει εγκατασταθεί πλήρως.

Πειραματικά αποδεδειγμένη και σημαντικό χαρακτηριστικό των μεσεγχυματικών βλαστικών κυττάρων είναι η ικανότητά τους να εγκαταλείψουν την θέση ιστού και κυκλοφορούν στη γενική κυκλοφορία. Για να ενεργοποιηθεί το γενετικό πρόγραμμα διαφοροποίησης, τέτοια κυκλοφορούντα βλαστοκύτταρα πρέπει να πέσουν στο κατάλληλο μικροπεριβάλλον. Έχει αποδειχθεί ότι όταν χορηγούνται συστηματικά στην κυκλοφορία του αίματος MSCs ζώα δέκτες ανώριμα κύτταρα εμφυτεύονται σε διάφορα όργανα και ιστούς, στη συνέχεια διαφοροποιούνται σε κύτταρα του αίματος, μυοκύτταρα, λιποκύτταρα, χονδροκύτταρα, ινοβλάστες και. Κατά συνέπεια, στις τοπικές περιοχές του ιστού λαμβάνει χώρα Signal-ρυθμιστική αλληλεπίδραση των δεσμευμένων και μη στρωματικά προγονικά κύτταρα, καθώς επίσης και μεταξύ αυτών και των γύρω ώριμα κύτταρα. Υποτίθεται ότι η επαγωγή διαφοροποίησης εκτελείται παρακρινείς ρυθμιστικούς παράγοντες μεσεγχυματικής προέλευσης και nemezenhimalnogo (παράγοντες ανάπτυξης, εικοσανοειδή, μόρια εξωκυττάριας ουσίας) τα οποία παρέχουν τις χωρικές και χρονικές σχέσεις στο μικροπεριβάλλον των πολυδύναμων μεσεγχυματικών προγονικών κυττάρων. Ως εκ τούτου, τοπική βλάβη του μεσεγχυματικού ιστού θα πρέπει να οδηγήσει στον σχηματισμό ενός μικροπεριβάλλοντος ζωνών πολυδύναμα μεσεγχυματικά πρόδρομα κύτταρα διαφέρουν ποιοτικά από τις πολύπλοκες ρυθμιστικά σήματα άθικτο ιστούς στους οποίους φυσιολογικές διαδικασίες συμβαίνουν αντί επανορθωτική αναγέννησης. Αυτή η διάκριση είναι ζωτικής σημασίας όσον αφορά την εμπειρία σε φαινοτύπου των κυττάρων σε φυσιολογικά και προκαλείται ζημιά στο μικροπεριβάλλον.

Σύμφωνα με τις ιδέες, εδώ βρίσκονται οι μηχανισμοί της θεμελιώδους διαφοράς δύο γνωστών διαδικασιών - φυσιολογικής αναγέννησης και φλεγμονώδους πολλαπλασιασμού. Το πρώτο από αυτά ολοκληρώνεται με αναγωγή των εξειδικευμένων σύνθεσης κυτταρικού ιστού και τη λειτουργία του, ενώ το αποτέλεσμα μιας πολλαπλασιαστικής διεργασίας είναι ο σχηματισμός ώριμων κυττάρων συνδετικού ιστού και η απώλεια της λειτουργίας κατεστραμμένη περιοχή του ιστού. Έτσι, για να αναπτύξουν τη βέλτιστη προγράμματα εφαρμογής πολυδύναμα μεσεγχυματικά προγονικά κύτταρα σε αναγεννητική ιατρική και πλαστικά απαιτεί προσεκτική μελέτη των ιδιαιτεροτήτων των παραγόντων επιρροής μικροπεριβάλλον για την διαφοροποίηση των MSCs.

Η εξάρτηση του διαμερίσματος δομής των βλαστικών κυττάρων από το κύτταρο παρα- και αυτοκρινείς ρυθμιστές του οποίου η έκφραση διαμορφώνεται από εξωτερικά σήματα, έχει κανείς πέρα από κάθε αμφιβολία. Ανάμεσα στις πιο σημαντικές λειτουργίες του ρυθμιστικών παραγόντων είναι MSCs ελέγχου ασύμμετρη διαίρεση και την έκφραση των γονιδίων προσδιορισμό δέσμευσης γράμμωσης βήμα και ο αριθμός των κυτταρικών διαιρέσεων. Τα εξωτερικά σήματα, από τα οποία εξαρτάται η περαιτέρω ανάπτυξη του MSC, παρέχονται από το μικροπεριβάλλον τους. Σε ανώριμους MSCs να πολλαπλασιάζονται αρκετά μεγάλο χρονικό διάστημα, διατηρώντας παράλληλα την ικανότητα να διαφοροποιούνται σε λιποκύτταρα γραμμή, μυοϊνοβλάστες, αιματογενή στρωματικό ιστό, κύτταρα χόνδρου, και των οστών. Έχει βρεθεί ότι ένα περιορισμένο πληθυσμό των κυκλοφορούντων SB34-αρνητικά στοιχεία στρωματικών κυττάρων από τη γενική κυκλοφορία επιστρέφεται στο στρώμα ιστού του μυελού των οστών, μετασχηματίζεται σε μια γραμμή όπου CD34-θετικά αιματοποιητικών βλαστικών κυττάρων. Αυτές οι παρατηρήσεις υποδηλώνουν ότι τα προγονικά κύτταρα ανακυκλοφορίας μεσεγχυματικών στο ρεύμα του αίματος του ιστού παρέχει υποστήριξη για το υπόλοιπο της στρωματικών βλαστοκυττάρων σε διαφορετικά όργανα με την κινητοποίηση κοινή πισίνα των στρωματικών κυττάρων του μυελού των οστών ανώριμα. Διαφοροποίηση των MSCs σε κύτταρα με πολλαπλούς φαινοτύπους μεσεγχυματικά και η συμμετοχή τους στην επισκευή ή αναγέννηση οστού, χόνδρου, τένοντα και στο λιπώδη ιστό in νίνο αποδεικνύεται από θετή μοντέλα μεταφορά σε πειραματόζωα. Σύμφωνα με άλλους συγγραφείς, μακρινό μετανάστευση των MSCs αγγειακής κλίνης συνδυάζεται με ένα τοπικό μετατόπισης ή korotkodistantnym πολυδύναμα πρόδρομα μεσεγχυματικά κύτταρα εντός του ιστού στην επιδιόρθωση του χόνδρου, μυός αναγέννηση, και άλλες αντιδράσεις αναγωγής.

Τοπική αποθεματικά βλαστικών στρωματικό θεμέλια ιστού παίζουν πηγή ρόλο των κυττάρων σε ένα φυσιολογικές διαδικασίες αναγέννησης ιστών και αναπληρώνονται από απόμακρα MSCs μεταφορών ως δαπάνες στρωματικών ιστού του στελέχους πόρων. Ωστόσο, σε ανάγκη της κινητοποίησης έκτακτης ανάγκης των κυτταρικών επανορθωτική ικανότητα, όπως πολλαπλό τραύμα, στις επανορθωτικές διαδικασίες των αναγέννησης συμμετέχει MSCs ολόκληρο τρένο, και η περιφέρεια μέσω του αίματος που προσλαμβάνονται μεσεγχυματικά πρόδρομα κύτταρα του μυελού των οστών.

Μεταμόσχευση μεσεγχυματικών βλαστικών κυττάρων

Υπάρχουν ορισμένες παραλλαγές μεταξύ των διαδικασιών φυσιολογικής αναγέννησης των ιστών και του σχηματισμού τους κατά τη διάρκεια της ενδομήτρινης ανάπτυξης. Η εμβρυογένεση των ανθρώπων και θηλαστικών, ο σχηματισμός των διαφόρων τύπων των εξειδικευμένων κυττάρων που προέρχονται από εκτο-, μεσο και ενδοδερμικής φύτρο στρώματα πισίνα, αλλά με την υποχρεωτική συμμετοχή του μεσέγχυμα. Το χαλαρό κυτταρικό δίκτυο του εμβρυϊκού μεσεγχυματικού ιστού εκτελεί πολλές ρυθμιστικές, μεταβολικές, σκελετικές και μορφογενετικές λειτουργίες. Bookmark προσωρινός σώματα πραγματοποιείται μόνο μετά την μεσέγχυμα συμπύκνωσης σε βάρος της αύξησης κλωνογονικών προγονικών κυττάρων που παράγουν πρωτογενή μορφογενετικών σήματα οργανογένεση. Στρωματικά προέρχονται εμβρυϊκά μεσέγχυμα δημιουργήσει ικρίωμα προσωρινή εναέρια όργανα και αποτελούν τη βάση των μελλοντικών energoplasticheskogo εξασφαλίζουν λόγω της ανάπτυξης του πρωτογενούς αγγειακού και λεμφαγγείων. Με άλλα λόγια, τα στρωματικά στοιχεία της μικροκυκλοφοριακής μονάδας των εμβρυϊκών οργάνων εμφανίζονται πριν από το σχηματισμό των δομικών λειτουργικών μονάδων τους. Επιπλέον, η ενεργός μετανάστευση των μεσεγχυματικών κυττάρων κατά τη διάρκεια της οργανογένεσης παρέχει χωρικό προσανατολισμό αναπτυσσόμενα όργανα λόγω σήμανση των ορίων τους κατ 'όγκο Περιορισμός ομοιοτικών Hox-tepov. Από την στρωματική συμβαίνει σκελετό και συναρμολόγηση των δομικών και λειτουργικών μονάδων του παρεγχυματικά όργανα, η οποία συχνά περιλαμβάνει morphogenetically και λειτουργικά πολύ διαφορετικά κύτταρα. Κατά συνέπεια, σε εμβρυογένεση μεσέγχυμα είναι πρωταρχική λειτουργία και υλοποιούνται με τη δημιουργία ρυθμιστικά σήματα ενεργοποιήσεως των περιφερειακών πολλαπλασιασμό και διαφοροποίηση των επιθηλιακών κυττάρων των προγονικών κυττάρων. Τα εμβρυϊκά κύτταρα μεσέγχυμα παράγουν αυξητικούς παράγοντες όπως τα πόδια, ΗΟΡ-b, CSF, για τα οποία υπάρχουν οι αντίστοιχοι υποδοχείς στα παρεγχυματικά προγονικών κυττάρων. Οι ώριμες διαφοροποιημένους ιστούς του δικτύου στρωματικών κυττάρων ενήλικο οργανισμό παράγει επίσης σήματα για να διατηρηθεί η βιωσιμότητα και τον πολλαπλασιασμό των προγονικών κυττάρων nemezenhimalnogo προέλευσης. Ωστόσο, οι στρωματικά φάσματος ρυθμιστικά σήματα σε μεταγεννητική οντογένεση άλλες (SCF, HGF, IL-6, IL-1, IL-8, IL-11, IL-12, IL-14, IL-15, GM-CSF, Flt-3, LIF, κ.λπ.) και αποσκοπεί στην παροχή φυσιολογικής αναγέννησης ή επισκευής των ζωνών που έχουν υποστεί βλάβη. Επιπλέον, τα φασματικά χαρακτηριστικά των στρωματικών ρυθμιστικών παραγόντων σε κάθε είδος ιστού και ακόμη και στο ίδιο όργανο είναι διαφορετικά. Ειδικότερα, αιματοποίηση και λεμφοποίησης στον πολλαπλασιασμό και τη διαφοροποίηση των αιμοποιητικών και ανοσοϊκανά κύτταρα λαμβάνει χώρα μόνο σε ορισμένα όργανα, εντός του οποίου δρα στρωματικά μικροπεριβάλλον παροχή συνθηκών για την ωρίμανση των αιμοποιητικών και λεμφοειδών κυττάρων. Εναπόκειται σε ρυθμιστικούς παράγοντες μικροπεριβάλλον εξαρτάται από την ικανότητα των αιμοποιητικών και λεμφοειδών κυττάρων να ανασυστήσουν πληθυσμιακά το σώμα για να πολλαπλασιαστούν και να ωριμάσουν σε μικροδομής κόγχες του.

Μεταξύ των συστατικών της εξωκυτταρικής μήτρας, οι οποίες παράγουν πολυδύναμα πρόδρομα μεσεγχυματικά κύτταρα, θα πρέπει να σημειωθεί φιμπρονεκτίνη, λαμινίνη, κολλαγόνο και πρωτεογλυκάνες, καθώς και CD44 (υαλουρονάνη και του υποδοχέα οστεοποντίνη) που δέχεται το κύριο ρόλο στην οργάνωση της διακυτταρικής αλληλεπίδραση και το σχηματισμό εξωκυττάριας μήτρας στο μυελό των οστών και των οστών . Είναι αποδεδειγμένο ότι μεσεγχυματικά του μυελού των οστών, πολυδύναμα κύτταρα δημιουργούν redshestvenniki μικροπεριβάλλον στρωματικών, παρέχοντας τα επαγωγικά και ρυθμιστικά σήματα όχι μόνο το MSC, αλλά επίσης αιματοποιητικών προδρόμων και βλαστικών κυττάρων του μυελού των οστών nemezenhimalnye. Είναι γνωστό ότι MSCs που εμπλέκονται στην αιματοποίηση μετράται με την ικανότητά τους να διαφοροποιούνται σε στρωματικά κύτταρα που υποστηρίζουν αιματοποίηση, όπου το ενεργό σήμα MSK καθοδήγηση που λαμβάνεται απευθείας από αιμοποιητικά βλαστικά κύτταρα. Αυτός είναι ο λόγος για τον οποίο η καλλιέργεια του δικτύου στρωματικών προγονικών κυττάρων είναι η βάση για τη σίτιση όλων των κλώνων των αιμοποιητικών κυττάρων.

Σε μια ώριμη ένταση οργανισμό της αιμοκάθαρσης και λεμφοποίησης σε κατάσταση δυναμικής ισορροπίας με το «δαπάνες» των ώριμων κυττάρων του αίματος και τα κύτταρα του ανοσοποιητικού συστήματος στην περιφέρεια. Από στρωματικά κύτταρα του μυελού των οστών και των λεμφικών οργάνων σπάνια ενημέρωση, σημαντικές δομές στρωματικά αναδιάρθρωσης δεν συμβαίνουν σε αυτές. Φέρτε το σύστημα της δυναμικής ισορροπίας είναι δυνατή με τη βοήθεια της μηχανικής βλάβης σε οποιαδήποτε όργανα Hemo ή λεμφοποίησης, η οποία οδηγεί στο ίδιο είδος των διαδοχικών αλλαγών που επηρεάζουν όχι μόνο και όχι τόσο των αιμοποιητικών ή λεμφοειδών κυττάρων, όπως δομές στρωματικά κατεστραμμένα οργάνου. Κατά τη διαδικασία της επανορθωτική αναγέννησης κατά κύριο λόγο σχηματίζονται πλαίσιο στρωματικά, η οποία στη συνέχεια πληθυσμιακή ανασύσταση αιματοποιητικών ή κυττάρων του ανοσοποιητικού συστήματος. Αυτή η μακρά γνωστό το γεγονός καθιστά μετατραυματικού αναγέννηση βολικό μοντέλο για τη μελέτη της στρωματικά μικροπεριβάλλον των αιμοποιητικά όργανα. Ειδικότερα, για τη διερεύνηση των αποκαταστάσεωε αναγέννηση του μυελού των οστών χρησιμοποιείται μηχανική άδειασμα μυελική κοιλότητα των μακρών οστών - απόξεση, επιτρέποντας να γρήγορα και αποτελεσματικά να φέρει τον ιστό αιμοποιητικά από μια κατάσταση δυναμικής ισορροπίας. Κατά τη μελέτη της διαδικασίας της επιδιορθωτικό αναγέννησης των αιμοποιητικών και του μυελού των οστών στρωματικά συστατικά μετά από μηχανική εκκένωση της μυελική κοιλότητα των ινδικών χοιριδίων κνήμης διαπίστωσε ότι μεταξύ των δεικτών αναγέννηση των αιμοποιητικών και στρωματικά κύτταρα (ο αριθμός των αιμοποιητικών κυττάρων, η συγκέντρωση και η ποσότητα των στρωματικών προγονικών κυττάρων) δεν υπάρχει άμεση συσχέτιση. Επιπλέον, διαπιστώθηκε ότι η αύξηση του πληθυσμού των στρωματικών προγονικών κυττάρων λαμβάνει χώρα σε προγενέστερη ημερομηνία μετά απόξεση, και οι ίδιοι στρωματικά ινοβλάστες είναι fosfatazopolozhitelnymi, η οποία είναι χαρακτηριστική της οστεογόνου ιστού. Διαπιστώθηκε επίσης ότι οι απόξεση 3-5 μακρά οστά οδηγεί στην αύξηση του κυτταρικού πληθυσμού στον μυελό των οστών και μη λειτουργούν οστού ακόμη και στο σπλήνα, το οποίο σε ινδικά χοιρίδια είναι μόνο λεμφοποιητικό σώμα.

Μορφολογικές διεργασίες εικόνα επιδιορθωτικό στο μυελό των οστών kyuretirovannyh κνημιαίου ινδικά χοιρίδια αντιστοιχεί γενικά με βιβλιογραφικά δεδομένα ελήφθησαν σε πειράματα σε ζώα άλλων ειδών, η δυναμική των αλλαγών που λαμβάνουν χώρα μετά την απομάκρυνση του αιμοποιητικού ιστού είναι η ίδια για όλα τα είδη και η διαφορά αφορά μόνο τις παραμέτρους του χρόνου . Μορφολογικά διαδικασία φάση για την αποκατάσταση της αιμοποίησης στο μυελική κοιλότητα αδειάζει σε διαδοχικές διεργασίες οργάνωση σχηματισμού θρόμβου αίματος οστού χοντρό ινών, επαναρρόφηση του, ημιτονοειδών και δικτυωτής στρώμα σχηματισμού, η οποία περαιτέρω πληθυσμιακή ανασύσταση αιμοποιητικά στοιχεία. Ο αριθμός των αιμοποιητικών προγονικών κυττάρων σε αυξήσεις διαδικασία αναγέννησης των ιστών του μυελού των οστών σε παράλληλη αύξηση της περιεκτικότητας των αιμοποιητικών βλαστικών κυττάρων.

Gerasimov Υυ et al (2001) συνέκριναν τις αλλαγές στον αριθμό των αιμοποιητικών κυττάρων και την ποσότητα των προδρόμων στρωματικών κυττάρων κατά τις επιμέρους φάσεις της διαδικασίας αναγέννησης. Διαπιστώθηκε ότι οι ποσοτικές αλλαγές στα κύτταρα του μυελού των οστών στο οστό kyuretirovannoy ταιριάζει δυναμική των μορφολογικών χαρακτηριστικών αναγέννησης. Μείωση κατά τη διάρκεια των τριών πρώτων ημερών του περιεχομένου κυττάρων σε αναγέννηση συγγραφείς αποδίδουν την απώλεια των αιμοποιητικών κυττάρων λόγω των δυσμενών επιδράσεων του μικροπεριβάλλοντος, η οποία δημιουργεί δικτυωτό ιστό αναπτύσσεται στα υπόλοιπα μυελό των οστών στην επίφυση και στη δεύτερη για να σχηματίσουν εστίες οστεοειδούς και την αγγειακή βλάβη με απόξεση. 7-12 th ημέρας για την αύξηση των κυττάρων yaderosoderzhaschih συμπίπτει με την εμφάνιση του ατόμου εστιών σε μυελοειδή αιματοποιητικά στρωματικά κύτταρα ζώνες πολλαπλασιασμού. Την 20η ημέρα, υπάρχουν σημαντικά τμήματα της αναγεννημένης μυελού των οστών και καλά ανεπτυγμένες ιγμόρεια, η οποία συνοδεύεται από μια σημαντική αύξηση του συνολικού αριθμού των κυττάρων. Ωστόσο, ο αριθμός των αιμοποιητικών κυττάρων κατά την περίοδο αυτή ήταν 68% των επιπέδων ελέγχου. Αυτό είναι συνεπές με προηγουμένως δημοσιευμένα δεδομένα που δείχνουν ότι ο αριθμός των κυττάρων του αίματος που σχηματίζουν μετά απόξεση φτάνει πρότυπα μόνο 35-40 ημέρες μετά την εγχείρηση.

Στις αρχές της δεκαετίας του μετατραυματικού περίοδο πρωταρχική πηγή για αιματοποιητικής ανασύστασης σερβίρουν τοπική διατηρημένα κυτταρικών στοιχείων με απόξεση. Μετέπειτα, η κύρια πηγή αναγέννησης αιματοποιητικού ιστού μυελού των οστών είναι τα βλαστοκύτταρα, επαναπληθωρίζοντας τις ελεύθερες στρωματικές ζώνες. Όσον αφορά ορισμένες κατηγορίες στρωματικά κύτταρα (ενδοθηλιακά, δικτυωτό και οστεογενή), οι πηγές για την εκπαίδευσή τους στην αναδιάρθρωση της μυελικής κοιλότητας, παραμένουν ασαφείς. Τα αποτελέσματα του Yu.V. Gerasimova et αϊ (2001) δείχνουν ότι στο μυελό των οστών που παραμένει μετά την συμπύκνωση απόξεση κυττάρων ινοβλαστών σχηματισμού αποικιών σημαντικά υψηλότερο από ό, τι στο φυσιολογικό μυελό των οστών. Οι συγγραφείς πιστεύουν ότι με απόξεση είναι πιο έντονη επιλεκτική έκλουση των αιμοποιητικών κυττάρων σε σύγκριση με κύτταρα που εμπλέκονται στο σχηματισμό στρώματος και περισσότερο σταθερά συνδεδεμένο με τη βασική ουσία του από αιμοποιητικά κύτταρα σχηματισμού αποικίας στρωματικά.

Η δυναμική των αλλαγών στον αριθμό των κυττάρων που σχηματίζουν αποικίες ινοβλάστες συσχετίζεται με την ένταση των διαδικασιών οστεογένεση μετέπειτα δοκιδωτό επαναρρόφηση οστού και σχηματισμός δικτυωτού στρώματος που εποικούν αιμοποιητικά κύτταρα. Τα περισσότερα από τα στρωματικά προγονικά κύτταρα σχηματίζουν έναν χονδρο-ινώδη οστικό ιστό και ένα δικτυωτό στρώμα στους υποδεικνυόμενους χρόνους αναγέννησης. Για κατάγματα του μηριαίου οστού σε συνθήκες παρατεταμένης οστεοσύνθεσης την 5η ημέρα στην ζώνη αναγέννησης αυξάνει τη συγκέντρωση των κυττάρων και τον αριθμό των ινοβλαστών σχηματισμού αποικιών, και το σχηματισμό οστού σε εντατική αριθμός τους αυξήθηκε κατά 6 φορές. Είναι γνωστό ότι τα κύτταρα μυελού των οστών που σχηματίζουν αποικίες ινοβλαστών έχουν οστεογονικές ιδιότητες. Ο αριθμός των προγεννητικών στρωματικών κυττάρων αυξάνεται πριν από τον αποικισμό της περιοχής του φλοιού μυελού των οστών με αιματοποιητικά κύτταρα. Αυτό είναι σε καλή συμφωνία με την απόδειξη ότι τα στρωματικά κύτταρα παρέχουν το σχηματισμό ενός αιματοποιητικού μικροπεριβάλλοντος. Προφανώς, η δημιουργία των αιμοποιητικών μικροπεριβάλλοντος αντιστοιχεί σε ένα ορισμένο επίπεδο της αναγέννησης των στρωματικό ιστό, και αυξάνει τον αριθμό των αιμοποιητικών κυττάρων μετά από στρωματικά επέκτασης προγεφύρωμα κατάλληλο για την αιμοποίηση.

Το μεγαλύτερο ενδιαφέρον είναι οι συντάκτες των δεδομένων που αμέσως μετά την απόξεση αυξάνει τον αριθμό των προδρόμων κυττάρων στρωματικών σε απομακρυσμένα μέρη του σκελετού. Ξεκινώντας από την έκτη ώρα, και από την εικοστή ημέρα αποκλεισμούς του αντίπλευρου κνήμης παρατηρείται σε περισσότερες από δύο-φορές αύξηση στις συγκεντρώσεις και με τον αριθμό των κυττάρων που σχηματίζουν αποικίες των ινοβλαστών. Ο μηχανισμός αυτού του φαινομένου είναι πιθανώς συνδέεται με το γεγονός ότι ένας τραυματισμός μαζική μυελού των οστών με αποτέλεσμα το σχηματισμό ενός μεγάλου αριθμού των θρόμβων αίματος, ενώ ταυτόχρονα καταστρέφει ένα σημαντικό αριθμό των αιμοπεταλίων και την απελευθέρωση εντός του αυξητικού παράγοντα που προέρχεται από αιμοπετάλια αίματος (RBSK), το οποίο είναι γνωστό ότι προκαλεί πολλαπλασιασμό των κυττάρων που σχηματίζουν αποικίες ινοβλάστες που υπάρχουν στο σώμα είναι η πολλαπλασιαστική πισίνα. Σε πειράματα σε κουνέλια τοπική χορήγηση MSCs προάγει αποκατάσταση χειρουργικά κατεστραμμένου χόνδρου του γόνατος, το οποίο μπορεί να σχετίζεται με το σχηματισμό των χονδροκυττάρων που λαμβάνονται από MSCs εισαχθεί. Ωστόσο αποκαταστάσεωε αναγέννηση των ελαττωμάτων οστών σε εργαστηριακούς αρουραίους αυξάνεται σημαντικά όταν χρησιμοποιούν μεσεγχυματικά βλαστικά κύτταρα που περικλείεται σε ένα κεραμικό πλαίσιο. Ως εκ τούτου, μπορούμε να υποθέσουμε ότι εάν δεν RBOK, τότε κάθε άλλο παράγοντα, που προέρχονται από τα κατεστραμμένα κύτταρα στρωματικά, έχει μια μακρινή διεγερτικό αποτέλεσμα επί του πολλαπλασιασμού των μεσεγχυματικών προγονικών κυττάρων σε ανέπαφα περιοχές του μυελού των οστών και διεγείρει τη μετανάστευση τους στον χώρο του ιστού του μυελού των οστών ελάττωμα. Με τη σειρά του, αυτό σε αντίθεση με βιβλιογραφικά δεδομένα των προηγούμενων ετών, που δείχνει ότι στρωματικά κύτταρα είναι υπεύθυνα για το μικροπεριβάλλον του, σε αντίθεση με αιμοποιητικά κύτταρα δεν είναι σε θέση να μεταναστεύσουν και να προέρχονται από τοπικές πηγές.

Παρ 'όλα αυτά, τα αποτελέσματα της μελέτης Gerasimov Υυ et al (2001) προτείνουν ότι η εφαρμογή των μηχανικό τραύμα προκαλεί όχι μόνο μια απότομη αναδιάρθρωση των στρωματικών ιστών στα οστά kyuretirovannoy, αλλά επίσης και σημαντικές αλλαγές στο στρώμα απομακρυσμένες οστά ανέπαφη, δηλαδή, υπάρχει μια συστημική απόκριση στρωματικό ιστό για τοπικό τραύμα. Και όταν εφαρμόζεται πολλαπλών τραυμάτων - πολλαπλές απόξεση - αυτή η αντίδραση ενισχύεται και παρατηρείται όχι μόνο στον λειτουργούν οστού και μακρινά τμήματα του σκελετού, αλλά επίσης και στα λεμφοειδή όργανα, ιδίως στη σπλήνα. Ο μηχανισμός μιας τέτοιας απόκρισης του συστήματος του στρωματικό ιστό του μυελού των οστών και τη σπλήνα και το τοπικό πολλαπλών τραυμάτων τραύμα παραμένει άγνωστη. Θεωρείται δεδομένο ότι η διαδικασία αυτή σχετίζεται με τη δράση της χυμικής παράγοντα που απελευθερώνεται μεσεγχυματικών στρώμα κοιλότητα του μυελού των οστών μυελώδη. Δυνατότητα καθιστώντας στρωματικών κυττάρων του μυελού των οστών και τη σπλήνα organonespetsificheskogo χυμικό παράγοντα υπεύθυνο για τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, ινοβλαστών σχηματισμού αποικιών δείχνουν τα δεδομένα σχετικά με τους αποικία διέγερσης δραστηριότητα σε καλλιέργειες μονοστοιβάδας των μυελού των οστών.

Από αυτή την άποψη, αξίζει να σημειωθεί ότι όταν χορηγείται συστηματικά πολυδύναμα μεσεγχυματικά πρόδρομα κύτταρα ανακατάληψης των παραγώγων τους, όχι μόνο ο μυελός των οστών, αλλά επίσης και άλλους ιστούς, το οποίο χρησιμοποιείται, ιδίως για γονιδιακή θεραπεία. Έχει αποδειχθεί ότι μετά από ενδοφλέβια χορήγηση μεγάλων ποσοτήτων MSCs με το γονιδίωμα των ποντικών άγριου τύπου με κύτταρα μεταλλαγμένο κολλαγόνο γονίδιο Ι δότη αντικαταστήσει μέχρι και 30% των κυττάρων σε οστό και χόνδρο ιστού του δέκτη, και τα επιμολυσμένα μεσεγχυματικά κύτταρα στελέχους ποντικού που εκκρίνουν IL-3 του ανθρώπου, για 9 μήνες αποτελεσματικά υποστηρίζοντας αιμοποίηση σε περίπτωση ταυτόχρονης χορήγησης τους με ανθρώπινα αιμοποιητικά βλαστικά κύτταρα σε ανοσοανεπαρκείς ποντικούς.

[3], [4], [5], [6], [7], [8], [9], [10]

Γενετική τροποποίηση των μεσεγχυματικών βλαστικών κυττάρων

Πρόσθετες πειραματική επιτυχία της γενετικής τροποποίησης πρέπει να σημειωθεί MSCs επιμόλυνση γονιδίου του παράγοντα IX στο ανθρώπινο MSCs που ακολουθείται από μεταφορά των κυττάρων επιμόλυνσης που ανοσοανεπαρκείς ποντικούς, η οποία οδηγεί στην εμφάνιση στο αίμα αντιαιμοφιλικό παράγοντα Β επί 8 εβδομάδες μετά τη μεταμόσχευση. Σε αυτό το πείραμα, πραγματοποιήθηκε μετα-μεταφραστική τροποποίηση του παράγοντα IX με γ-γλουταμυλο καρβοξυλάση σε επιμολυσμένα κύτταρα. Η μεταγωγή των MSCs με ρετροϊικό φορέα που κωδικοποιεί τον ανθρώπινο παράγοντα IX, ήταν λιγότερο επιτυχής - επακόλουθη εισαγωγή αυτών των κυττάρων με το σκυλί αιμορροφιλία σε ένα θεραπευτικό επίπεδο του παράγοντα IX, το οποίο υποστηρίζει την κανονική αιμόσταση ένταση πήξη, μόνο για 12 ημέρες.

Μεταμόσχευση μεσεγχυματικών βλαστικών κυττάρων στο εγκεφαλικό παρέγχυμα των ζώων έχουν δείξει ότι δότη μετασχηματισμένα ανώριμα κύτταρα σε νευρωνικού πληθυσμού και νευρογλοία. Εμφύτευση νευρωνική παράγωγα υγιή δότη μεσεγχυματικού ιστού καθιστά θεωρητικά δυνατή τη διόρθωση γενετικών ανωμαλιών του μεταβολισμού του εγκεφάλου σε ασθενείς με νόσο του Gaucher και άλλες διαταραχές του μεταβολισμού των λιπιδίων, υδατανθράκων ή γαγγλιοσίδες.

Συνεχίζοντας πειραματικές συνθήκες αναζήτηση δια-βλαστικών κυττάρων στο μυελό των οστών πρόδρομα στρωματικά κύτταρα στο νευρικό και ηπατικό ιστό. Η προσοχή των ερευνητών επικεντρώνεται σε συνδυασμούς επαγωγέων διαφοροποίησης και ειδικών μέσων προετοιμασίας. Ειδικότερα, για την απομόνωση της πρωτογενούς καλλιέργειας με 10% ορό εμβρύου μόσχου, στρωματικά κύτταρα του μυελού των οστών πλύθηκαν και επαναιωρήθηκαν σε μέσο καλλιέργειας DMEM / F12 (1/1) σπείρονται σε μια πυκνότητα 200.000 / cm2. Μετά από 24 ώρες, τα μη προσκολλημένα κύτταρα απομακρύνονται και συνδέονται με τα πλαστικά κύτταρα ινοβλαστών καλλιεργούνται για μια εβδομάδα. Για τη διαφοροποίηση των στρωματικών κυττάρων του μυελού των οστών νευροβλάστες χρησιμοποιηθεί ρυθμισμένο μέσο που λαμβάνεται με καλλιέργεια τριών ημερών καλλιέργεια εμβρυϊκών ινοβλαστών πρωτογενούς ποντικού, καθώς επίσης και μεταξύ DMEM / F12 (1/1) με 2% ορό εμβρύου μόσχου και συμπληρωμένο με 20 ng / ml ή 10-6 Μ LiF ρετινοϊκό οξύ (neyroinduktory οι οποίες εφαρμόζονται στο νευρωνικό διαφοροποίηση των βλαστικών κυττάρων ποντικού εμβρυϊκά και άνθρωπο). Η διαφοροποίηση των στρωματικών κυττάρων του μυελού των οστών εντός προγονικών κυττάρων σε ηπατοκύτταρα προκλήθηκε κλιματιζόμενο περιβάλλον που δημιουργείται ως αποτέλεσμα της τριήμερης καλλιέργεια ενός πρωτογενή καλλιέργεια κυττάρων εμβρυϊκών ήπατος ποντικού σε DMEM / F12 (1/1) μέσο συμπληρωμένο με 10% ορό εμβρύου μόσχου.

Εδώ θα πρέπει να σημειωθεί εκ νέου ότι τα κύτταρα που σχηματίζουν αποικίες του στρώματος μυελού των οστών είναι ετερόμορφα και μπορούν να χωριστούν σε δύο τύπους. Ο πρώτος τύπος περιλαμβάνει κύτταρα που μοιάζουν με ινοβλάστες που σχηματίζουν κύτταρα φωτόποδας με μεγάλους πυρήνες και ένα ή δύο πυρήνες. Ο δεύτερος τύπος αντιπροσωπεύεται από μικρά κελιά σχήματος ατράκτου. Σε αμφότερους τους τύπους της κυτταρικής καλλιέργειας στο ρυθμισμένο μέσο που λαμβάνεται σε ένα τροφοδοτικό στρώμα εμβρυϊκών ινοβλαστών ποντικού πρωτογενούς, και σχετικά με την Ζ-4-η ημέρα των κυττάρων καλλιέργειας φαίνεται Παρόμοια με νευροβλάστες. Σε αυτό το στάδιο έχουν συχνά μια μορφή σχήματος ατράκτου με μία ή δύο μακριές διεργασίες που καταλήγουν σε filopodia. Τα πυραμιδικά ή stetelate κύτταρα με μικρούς δενδρίτες είναι λιγότερο συνηθισμένα. Δενδρίτες ένα νευροβλάστες έχουν τυπικό διαστολής (αναπτύξεως των νεφρών) και διακλάδωση σε άπω τμήμα της, το άλλο - με διακριτή κώνους ανάπτυξης filopodia, μέσω της οποίας λαμβάνει χώρα ανάπτυξη δενδριτών. Παρόμοια μορφολογικά χαρακτηριστικά (αυξητικοί κώνοι των νεφρών και filopodia α) εγγενή νευροβλάστωμα, διαφοροποιούνται σε νευρώνες, περιγράφονται λεπτομερώς στα έγγραφα από νευρογένεση. Σε αυτή τη βάση, ορισμένοι συγγραφείς καταλήγουν στο συμπέρασμα ότι τα κύτταρα που ανιχνεύουν στην καλλιέργεια είναι νευροβλάστες. Ειδικότερα, Schegelskaya Ε et al (2002), μετά από μια πρωτογενή καλλιέργεια στρωματικών κυττάρων καλλιεργήθηκαν για δύο εβδομάδες σε ένα αντικαταστάσιμο σε κάθε Ζ-και-4η ημέρα ρυθμισμένο μέσο διαπίστωσε ότι ένα τμήμα των πολλαπλασιαζόμενων κυττάρων, διατηρώντας την αδιαφοροποίητη κατάσταση. Εξωτερικά, τέτοια κύτταρα έμοιαζαν με ινοβλάστες και ταυτοποιήθηκαν σε καλλιέργεια μαζί με διαφοροποιημένους νευροβλάστες. Τα περισσότερα από τα κύτταρα (περίπου 80%) ήταν σε διαφορετικά στάδια διαφοροποίησης σε κύτταρα του νευρικού ιστού, κυρίως σε νευρώνες. Τα δενδριτικά διαδικασίες αυτών των κυττάρων σε στενή επαφή μεταξύ τους, έτσι ώστε σταδιακά κύτταρα σχηματίζονται στα τμήματα υποστρώματος νευρωνικό δίκτυο, με τη μορφή μακρών κλώνων πολυκύτταρους. Οι δενδριτικές διαδικασίες των νευροβλαστών αυξήθηκαν πολύ περισσότερο, μερικές από αυτές 8-10 φορές υψηλότερες από το μήκος του σώματος του ίδιου του νευρώνα. Σταδιακά αυξήθηκε η αναλογία πυραμιδοειδών και στελετικών κυττάρων. Οι δενδρίτες των κυλινδρικού κυττάρων διακλαδίζονται. Σύμφωνα με τους συγγραφείς, αργότερα διαφοροποίηση των πυραμιδικών και αστεροειδή κύτταρα σε σύγκριση με ψιλόλιγνος αντιστοιχεί στην αλληλουχία των κανονικών στάδια της νευρογένεσης σε ζώα. Ως αποτέλεσμα, οι συγγραφείς συμπεραίνουν ότι τα βλαστικά κύτταρα του στρωματικών κυττάρων μυελού των οστών που εκτίθενται επάγεται νευρογένεση στην οποία μέθοδο in vitro παραγόμενο νευροβλάστες και από τους τρεις κύριους τύπους νευρώνων. Πρόδρομοι των νευρικών κυττάρων βρέθηκαν επίσης στην καλλιέργεια στρωματικών κυττάρων μυελού των οστών για 3-4 ημέρες σε μέσο με ορό εμβρύου 2% και 20 ng / ml LIF. Αλλά σε αυτή την περίπτωση τα βλαστοκύτταρα διαιρέθηκαν πολύ αργά, η διαφοροποίηση των νευροβλαστών παρατηρήθηκε μόνο στο 30% των περιπτώσεων και δεν σχημάτιζαν νευρικά δίκτυα. Χρησιμοποιώντας ως νευρικών κυττάρων επαγωγείς διαφοροποίησης ρετινοϊκό οξύ, τους συγγραφείς που λαμβάνονται σε καλλιέργεια σε 25-30% των νευρικών κυττάρων, με υπεροχή των νευρογλοιακών κυττάρων - αστροκύτταρα και ολιγοδενδροκύτταρα. Οι νευρώνες αντιπροσώπευαν μόνο το ένα τρίτο όλων των νευρικών κυττάρων, παρόλο που αντιπροσωπεύονταν και από τους τρεις τύπους: συγχωνευμένα, πυραμιδικά και stellate κύτταρα. Την 6η ημέρα της στρωματικών κυττάρων καλλιέργεια σε ρετινοϊκό οξύ μέσο των νευρικών κυττάρων έγινε πιο διαφοροποιημένα, ενώ τα επιμέρους νευράξονες των πυραμιδικών νευρώνων βρέθηκαν ότι στην κανονική neuroontogenesis εμφανίζονται αργότερα σχηματισμό των δενδριτικών διεργασιών. Σύμφωνα με τους συγγραφείς, παρά τη χαμηλή απόδοση των νευρικών κυττάρων, η μέθοδος της επαγωγής ρετινοϊκού οξέος έχει πλεονεκτήματα: αστροκύτταρα και ολιγοδενδροκύτταρα και μυελινωτικά λειτουργούν λειτουργίες τροφοδοσίας κατά τη διάρκεια της ανάπτυξης των νευραξόνων και δενδριτών και είναι απαραίτητες για το σχηματισμό κανονικής νευρικού ιστού. Ως εκ τούτου, για την αποκατάσταση των θέσεων που έχουν υποστεί βλάβη in vivo, είναι καλύτερο να χρησιμοποιηθεί ένα εναιώρημα νευρώνων εμπλουτισμένο με γλοιακά κύτταρα.

Στη δεύτερη σειρά πειραμάτων, οι συγγραφείς προσπάθησαν να προκαλέσουν διαφοροποίηση των στρωματικών κυττάρων μυελού των οστών σε ηπατικά κύτταρα. Μετά από τριήμερη καλλιέργεια του μυελού των οστών στρωματικά βλαστικά κύτταρα στο ρυθμισμένο μέσο που λαμβάνεται με επώαση εμβρυϊκά ηπατοκύτταρα ποντικού, έχουν μεγάλες, σφαιρικά σε σχήμα κύτταρα έχουν βρεθεί, συχνά δύο-πυρηνικών, κυτταροπλασματικά έγκλειστα με διαφορετικά μεγέθη. Αυτά τα κύτταρα ήταν σε διαφορετικά στάδια της διαφοροποίησης, και διέφεραν σε μέγεθος, τον αριθμό των πυρήνων και εγκλείσματα κυτταρόπλασμα. Στα περισσότερα από αυτά τα κύτταρα ανιχνεύθηκε γλυκογόνου, σύμφωνα με την οποία έχουμε να αναγνωριστεί ως πρόδρομος ηπατοκυττάρων κύτταρα. Δεδομένου ότι η καλλιέργεια καθόλου κύτταρα δεν ανιχνεύθηκαν Παρόμοια με νευροβλαστών, που ακολουθείται από ένα συμπέρασμα ότι στο ρυθμισμένο μέσο που λαμβάνεται με καλλιέργεια εμβρυϊκών ηπατοκυττάρων, δεν υπάρχουν παράγοντες διαφοροποίησης των νευρικών κυττάρων και, αντιστρόφως, υπάρχουν παράγοντες που επάγουν διαφοροποίηση των στρωματικών κυττάρων του μυελού των οστών σε προγονικά κύτταρα ηπατοκυττάρων . Οι συγγραφείς προτείνουν την παρουσία των πολυδύναμων κυττάρων από το στρώμα του μυελού των οστών, όπως αυτοί διαφοροποιούνται ίη vitro σε κύτταρα του ηπατικού ή νευρικού ιστού ανάλογα με τις συγκεκριμένες ρυθμισμένα μέσα, και επαγωγείς.

Σε μερικά έργα, η διαφοροποίηση των κυττάρων στρώματος μυελού των οστών στα καρδιομυοκύτταρα, τα κύτταρα των χόνδρινων, των οστικών και του νευρικού ιστού είναι πράγματι σωστή. Υπάρχουν πληροφορίες ότι μεταξύ των κυττάρων του μυελού των οστών υπάρχουν πληθυσμοί βλαστικών κυττάρων που μπορούν να διαφοροποιηθούν σε ηπατοκύτταρα. Υπό το φως αυτών των αποτελεσμάτων ανωτέρω πειραματισμό σε ποντικούς μπορεί ακόμα να θεωρηθεί ως μια άλλη επιβεβαίωση της παρουσίας στα πολυδύναμα μεσεγχυματικά βλαστικά κύτταρα του μυελού των οστών που έχουν την ικανότητα να διαφοροποιηθούν σε κύτταρα διαφόρων ιστών του ενήλικου οργανισμού.

Μεταμόσχευση μεσεγχυματικών βλαστικών κυττάρων

Σε κλινικές μεταμόσχευση ανθρώπινων μεσεγχυματικών βλαστικών κυττάρων μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την επέκταση των αιμοποιητικών αρχέγονων κυττάρων και στις αρχές των απογόνων τους prekommitirovannyh. Ειδικότερα, η εισαγωγή του αυτόλογων αιμοποιητικών αρχέγονων κυττάρων και ασθενείς με καρκίνο μετά από χημειοθεραπεία MSCs από υψηλής επιταχύνει την αποκατάσταση στα ουδετερόφιλα και τα αιμοπετάλια στο περιφερικό αίμα. Αυτόλογη και αλλογενή μεταμόσχευση μεσεγχυματικών βλαστικών κυττάρων που χρησιμοποιούνται για τη θεραπεία του πολλαπλού μυελώματος, απλαστική αναιμία, θρομβοκυτταροπενία αυθόρμητη - ασθένειες που σχετίζονται με την πρωτογενή ελάττωμα αιματοποιητικό στρωματικό ιστό. Η αποτελεσματικότητα της κυτταρικής θεραπείας σε παθολογίες αιματολογική σε πολλές περιπτώσεις παραπάνω, ενώ η εισαγωγή του στρωματικών και αιμοποιητικών βλαστικών κυττάρων, η οποία εκδηλώνεται μια μείωση της μετεγχειρητικής περιόδου ανάκαμψης, το αίμα, μείωση του αριθμού των θανάτων που οφείλονται σε μη-επιλεκτική καταστροφή των περιφερειακών και κυκλοφορούντων καρκινικών κυττάρων στα οποία η μήτρα και το δικό προγονικών αιμοποιητικών κυττάρων του ασθενούς του. MSCs υποσχόμενες εφαρμογές και άλλα πολυδύναμα μεσεγχυματικά πρόδρομα κύτταρα στην κλινική πρακτική λόγω της σχετικής ευκολίας τους απόκτησης αναρρόφησης μυελού των οστών, την επέκταση σε καλλιέργεια και επιμόλυνση του θεραπευτικού γονιδίου. Έτσι, για να αντισταθμίσει για τις τοπικές ατέλειες ιστού μπορεί να χρησιμοποιήσει ένα τοπικό εμφύτευση πολυδύναμων μεσεγχυματικών προδρόμων κυττάρων και στη συστηματική δυσλειτουργία των ιστών μεσεγχυματικής προέλευσης δεν αποκλείεται η εισαγωγή τους στη γενική κυκλοφορία.

Πιο προσεκτικοί στην επιχειρηματολογία τους οι συγγραφείς των έργων στην οποία οι προοπτικές των MSCs για την τοπική, συστημική μεταμόσχευση και γονιδιακής θεραπείας αναλύονται από την άποψη της βιολογίας κυττάρων στρωματικών. Η μεταγεννητική μυελού των οστών είναι παραδοσιακά θεωρηθεί ως οργανισμός αποτελείται από δύο κύρια συστήματα διακριτών κυτταρικών γραμμών - πράγματι αιματοποιητικό ιστό και συνδέεται υποστηρίζοντας στρώμα του. Ως εκ τούτου, το μυελό των οστών μεσεγχυματικά βλαστικά κύτταρα αρχικά θεωρηθεί μόνο ως πηγή βάσης στρωματικών για την παραγωγή των ρυθμιστικών παραγόντων αιμοποιητικών μικροπεριβάλλοντος. Στη συνέχεια, η προσοχή των ερευνητών μεταπήδησε στη μελέτη του ρόλου του MSC ως πηγή βλαστοί των σκελετικών ιστών. Τα τελευταία δεδομένα υποδεικνύουν μια απροσδόκητη δυνατότητα διαφοροποίησης των στρωματικών κυττάρων μυελού των οστών με το σχηματισμό νευρικού ή μυϊκού ιστού. Με άλλα λόγια, τα μεσεγχυματικά βλαστικά κύτταρα εμφανίζουν transgermalnuyu πλαστικότητα - την ικανότητα να διαφοροποιούνται σε κύτταρο τύπων που φαινοτυπικά μη γνήσιων κυττάρων ιστού. Ωστόσο, ορισμένες πτυχές της βιολογίας των στρωματικών κυττάρων του μυελού των οστών παραμένουν ασαφείς και ανεπίλυτο γενικά βιολογικά σχέδιο, και σε κάποια λεπτομέρεια, συμπεριλαμβανομένης της ταυτοποίησης, τη φύση, την προέλευση και την ανάπτυξη και τη λειτουργία σε στρωματικά κύτταρα του μυελού των νίνο οστών καθώς και το επιτρεπόμενο δυναμικό διαφοροποίησης ex vivo και η δυνατότητα θεραπευτική χρήση ίη νίνο. Τα δεδομένα σχετικά με τις υφιστάμενες δυνατότητες των MSCs, καθώς και τα αποτελέσματα των μελετών των άλλων αναγεννητικής δυναμικό των βλαστικών κυττάρων, σε έντονη αντίθεση με την καθιερωμένη δόγμα στη βιολογία.

Όταν καλλιεργούνται υπό συνθήκες χαμηλής πυκνότητας, τα στρωματικά κύτταρα μυελού των οστών σχηματίζουν ξεχωριστές αποικίες, καθένα από τα οποία είναι παράγωγο ενός μοναδικού προδρόμου κυττάρου. Το ποσοστό των προδρόμων στρωματικών κυττάρων σε κύτταρα μυελού των οστών εμπύρηνα ορίζονται από την ικανότητά τους να σχηματίζουν αποικίες εξαρτάται σε μεγάλο βαθμό από τις συνθήκες καλλιέργειας και τα είδη των MSCs που ανήκουν. Για παράδειγμα, στο τρωκτικό για να ληφθεί το μέγιστο ποσό των στρωματικών προγονικών κυττάρων είναι απολύτως απαραίτητο παρουσία ακτινοβολημένων τροφοδότη καλλιέργειας κυττάρων μυελού των οστών και του ορού, ενώ η απόδοση των ανθρώπινων μεσεγχυματικών βλαστικών κυττάρων που σχηματίζουν αποικίες είναι ανεξάρτητη από τον τροφοδότη, ή από το μέσο καλλιέργειας. Ο αριθμός των γνωστών μιτογόνων παραγόντων που διεγείρουν τον πολλαπλασιασμό των στρωματικών προγονικών κυττάρων είναι περιορισμένος. Αυτά περιλαμβάνουν PDGF, EGF, FGF, ΤΟΡ-β, και επίσης IGF1. Υπό βέλτιστες συνθήκες, καλλιέργεια MSCs πολυκλωνικό γραμμές διατηρούνται in vitro για περισσότερα από 50 κυτταρικές διαιρέσεις, πράγμα που καθιστά δυνατή τη λήψη τα δισεκατομμύρια των στρωματικών κυττάρων μυελού των οστών από 1 ml του αναρρόφημα αυτό.

Ωστόσο, ο πληθυσμός των στρωματικών κυττάρων του μυελού των οστών είναι ετερογενής, ότι εκδηλώνεται ως μεταβλητότητα στα μεγέθη των αποικιών, διαφορετικό ρυθμό του σχηματισμού τους και μια ποικιλία της μορφολογίας των κυττάρων, η οποία περιλαμβάνει μια σειρά που μοιάζουν με ινοβλάστες ατράκτου προς μεγάλες επίπεδες κύτταρα. Με την ανάπτυξη τέτοιων καλλιεργειών μετά από 20 ημέρες, παρατηρείται επίσης φαινοτυπική ετερογένεια. Μέρος της αποικίας χαρακτηρίζεται από υψηλή έκφραση της αλκαλικής φωσφατάσης, άλλοι δεν το εκφράζουν, και η τρίτη αποικίες τύπου είναι fosfatazopozitivnymi στην κεντρική περιοχή και fosfatazonegativnymi στην περιφέρεια. Οι ξεχωριστές αποικίες σχηματίζουν οζίδια του οστικού ιστού (η αρχή της ανοργανοποίησης της μήτρας σημειώνεται όταν χρωματίζεται με κόκκινο αλισαρίνο ή με ασβέστιο από το Van-Koss). Σε άλλες αποικίες, λαμβάνει χώρα συσσώρευση λίπους, που προσδιορίζεται με χρώση G με ερυθρό έλαιο. Λιγότερο συχνά οι αποικίες των μεσεγχυματικών βλαστοκυττάρων σχηματίζουν χόνδρους που είναι χρωματισμένοι με κυανό αλκυάν).

Μετά έκτοπη μεταμόσχευση σε πειραματόζωα πολυκλωνικά γραμμές MGK σχηματίσουν εκτοπικό στρώμα οστού με setchatoobraznoy συνδέονται με μυελοποίηση και λιποκύτταρα, καθώς και, αλλά σπάνια, με ιστό χόνδρου. Σε μονοκλωνικό γραμμές μεταμόσχευση στρωματικών κυττάρων του μυελού των οστών, σε ορισμένες περιπτώσεις υπάρχει χιμαιρισμού, όπου η de ηονο που σχηματίζεται ιστού του οστού αποτελείται από τα κύτταρα των οστών, λιποκύτταρα περιλαμβάνει στρώματος και δότη προέλευσης, ενώ οι κυτταρικές σειρές του αιματοποιητικού και του αγγειακού συστήματος που προέρχονται από τον αποδέκτη.

Τα αποτελέσματα αυτών των μελετών επιβεβαιώνουν τη φύση του στελέχους των προδρόμων του μυελού των οστών στρωματικά κύτταρα από τα οποία ελήφθη κλωνική γραμμή. Επίσης, ταυτόχρονα δείχνουν ότι δεν είναι όλα κλωνοποίηση σε κύτταρα καλλιέργειας πράγματι πολυδύναμα βλαστοκύτταρα. Μερικοί ερευνητές πιστεύουν, και μοιραζόμαστε την άποψή τους, ότι οι πιο ακριβείς πληροφορίες σχετικά με τις πραγματικές δυνατότητες διαφοροποίησης των ξεχωριστών κλώνων μπορούν να ληφθούν μόνο in vivo μετά τη μεταμόσχευση, και όχι με τον καθορισμό του φαινοτύπου των παραγώγων τους in vitro. Έκφραση σε οστεο- δείκτες καλλιέργεια φαινοτυπική hondro- ή αδιπογένεσης (καθορίζεται από mRNA ή μέσω ιστοχημικές τεχνικές), και ακόμη και η παραγωγή των ανοργανοποιημένο μήτρα δεν αντανακλούν το βαθμό της πλειοδυναμίας μοναδικού κλώνου in vivo. Ως εκ τούτου, η ταυτοποίηση των βλαστικών κυττάρων στην ομάδα στρωματικά κύτταρα θα είναι διαθέσιμα μόνο εκ των υστέρων, υπό κατάλληλες συνθήκες μεταμόσχευσης βιολογικό δείγμα. Ειδικότερα, χονδρογένεση πολύ σπάνια παρατηρήθηκαν στα ανοικτά συστήματα μεταμόσχευσης, ενώ ο σχηματισμός του χόνδρου δεν είναι ασυνήθιστο σε κλειστά συστήματα, όπως θαλάμους διάχυσης ή σε mikromassnyh καλλιέργειες στρωματικών κυττάρων in vitro, όπου επιτυγχάνονται τοπικά χαμηλή τάση οξυγόνου, συμβάλλουν στον σχηματισμό του χόνδρου. Ως εκ τούτου, ακόμη και τεχνική μεταμόσχευσης, καθώς και μη-ειδικές in vitro συνθήκες καλλιέργειας επηρεάζουν σημαντικά το εύρος της διαφοροποίησης των MSCs.

Η πειραματική μεταμόσχευση με τήρηση συγκεκριμένων πειραματικών συνθηκών είναι το χρυσό πρότυπο για τον προσδιορισμό της δυνατότητας διαφοροποίησης των στρωματικών κυττάρων του μυελού των οστών και το βασικό στοιχείο της σωστής ταυτοποίησής τους. Ιστορικά, μελέτες μεταμόσχευσης μυελού των οστών μυελού των οστών συνδυάζονται με ένα κοινό πρόβλημα μεταμόσχευσης μυελού των οστών. Διαπιστώθηκε ότι η αιμοποιητική μικροπεριβάλλον δημιουργείται από μεταφύτευση γραμμές στρωματικών κυττάρων μυελού και παρέχει έκτοπη ανάπτυξη των αιμοποιητικών ιστών στην περιοχή της μεταμόσχευσης. Η προέλευση του μικροπεριβάλλοντος του ιστού δότη και αιμοποιητικά - από τον ξενιστή μπορεί να θεωρηθεί ως μια πραγματική «ανεστραμμένο» μεταμόσχευση μυελού των οστών έκτοπου οστού. Η τοπική μεταμόσχευση στρωματικών κυττάρων μυελού των οστών προάγει την αποτελεσματική διόρθωση των ελαττωμάτων του οστού, πιο έντονη απ 'ότι στην αυθόρμητη επανορθωτική αναγέννηση. Σε αρκετές προκλινικές μελέτες σε ζωικά μοντέλα πειστικά απέδειξε την δυνατότητα των μεταμοσχεύσεων των στρωματικών κυττάρων του μυελού των οστών στην ορθοπεδική, αν και για τη βελτιστοποίηση αυτών των μεθόδων, ακόμη και στις απλούστερες περιπτώσεις, απαιτούν την πιο προσεκτική εργασία και την ανάλυση. Συγκεκριμένα, οι βέλτιστες συνθήκες για την επέκταση ex νίνο οστεογόνο στρωματικά κύτταρα δεν έχουν ακόμη οριστεί, καμία δομή καυσαερίων και η σύνθεση είναι ιδανικό φορέα και ο αριθμός των κυττάρων που απαιτούνται για την αναγέννηση του όγκου οστού.

Εκτός από την εφαρμογή πολλαπλασιάστηκαν ex νίνο στρωματικά κύτταρα του μυελού των οστών για την αναγέννηση του ιστού μεσεγχυματικής προέλευσης ανορθόδοξης ολκιμότητα MSC ανοίγει την πιθανή χρήση για την αναγέννηση των νευρικών κυττάρων, ή την παράδοση των προϊόντων γονιδίων στο ΚΝΣ. Κατ 'αρχήν, αυτό απλοποιεί την κυτταρική θεραπεία στην ήττα του νευρικού συστήματος, δεδομένου ότι δεν υπάρχει ανάγκη λήψης αυτόλογων νευρικών βλαστοκυττάρων από ανθρώπους. Αναφέρεται στις δυνατότητες χρήσης κυττάρων μυελού των οστών για την παραγωγή καρδιομυοκυττάρων και μυογενών προδρόμων κυττάρων ως πραγματικά στρωματική και εξωγενή προέλευση.

Πραγματοποιούνται πειράματα για τη συστηματική μεταμόσχευση στρωματικών κυττάρων μυελού των οστών για τη θεραπεία κοινών σκελετικών ασθενειών. Δεν υπάρχει αμφιβολία ότι τα στρωματικά κύτταρα του μυελού των οστών είναι ένας πληθυσμός υπεύθυνοι για γενετικές διαταραχές σε νοσήματα του σκελετού, η οποία είναι καλά απεικονίζεται από τη μεταβίβαση φορέα χρησιμοποιώντας την γενετική πληροφορία των κυττάρων, η οποία οδηγεί στο σχηματισμό των παθολογικών ιστών οστών σε πειραματόζωα. Ωστόσο, η ικανότητα των στρωματικών κυττάρων να εμφυτεύονται, να αναπτύσσονται, να πολλαπλασιάζονται και να διαφοροποιούνται στα οστά του σκελετού μετά την εισαγωγή τους στο γενικό αίμα δεν έχει ακόμη αποδειχθεί.

Αυτό οφείλεται εν μέρει στο γεγονός ότι η τυπική διαδικασία των στρώμα μυελού των οστών δεν είναι μεταμοσχεύονται με αιματοποιητικό ιστό, έτσι αυστηρά κριτήρια για την αξιολόγηση επιτυχή εμφύτευση των συστημική χορήγηση στρωματικά κύτταρα δεν έχουν ακόμη αναπτυχθεί. Δεν πρέπει να λησμονείται ότι η παρουσία των γονιδίων δεικτών σε εκχυλίσματα ιστού ή απελευθέρωση στην καλλιέργεια των κυττάρων προερχόμενων από δότη δεν μαρτυρεί εμφύτευση των κυττάρων, αλλά μόνο για την επιβίωση τους. Ακόμη και ενδο-αρτηριακή ένεση στρωματικών κυττάρων του μυελού των οστών στο σκέλος ποντικού μπορεί να οδηγήσει σε σχεδόν μηδέν εμφύτευση αποτέλεσμα, παρά το γεγονός ότι τα κύτταρα προερχόμενα από δότη που βρέθηκαν σε μεγάλους αριθμούς εντός του δικτύου του μυελού των οστών μικροαγγειακή. Δυστυχώς, αυτά τα κύτταρα συνήθως περιγράφονται ως "μεταμοσχευμένα" μόνο με βάση τα αποτελέσματα του προσδιορισμού γονιδίων δότη-δείκτη υπό συνθήκες ex νίνο καλλιέργειας. Επιπλέον, είναι απαραίτητο να παρασχεθούν πειστικά στοιχεία μακροπρόθεσμης ενσωμάτωσης στους ιστούς διαφοροποιημένων και λειτουργικά ενεργών κυττάρων δότη. Σε πολλές δημοσιευμένες εργασίες, η οποία αναφέρει την εμφύτευση των στρωματικών κυττάρων του μυελού των οστών του σκελετού, που είναι εντυπωσιακό είναι η απουσία σαφών στοιχείων αυτού του είδους. Παρ 'όλα αυτά, πρέπει να σημειωθεί ότι σε μερικά σωστά πειράματα σε ζώα, όμως, έχει καθιερωθεί μια περιορισμένη αλλά πραγματική ενσωμάτωση των στρωματικών προγονικών κυττάρων μετά τη συστηματική τους χορήγηση.

Αυτά τα δεδομένα είναι σύμφωνα με τα αποτελέσματα της μελέτης της πιθανότητας παροχής μυογενών προδρόμων κυττάρων μυελού των οστών στους μυς μέσω του αγγειακού συστήματος. Ωστόσο, δεν πρέπει να ξεχνάμε ότι τόσο η σκελετική και μυϊκή ιστός σχηματίζεται κατά τη διάρκεια της ανάπτυξης και της ανάπτυξης με βάση την εξωαγγειακή κύτταρα μετατοπίσεις που χρησιμοποιούν διαδικασίες μετανάστευσης που δεν περιλαμβάνουν την κυκλοφορία του αίματος. Εάν στην πραγματικότητα δεν υπάρχει ένας ανεξάρτητος κυκλοφορικού διαδρομή για τα κύτταρα παράδοσης-predshestvonnrshov σε φάση στερεού ιστού, είναι δυνατόν να εμποδίζει την ύπαρξη φυσιολογικώς κυκλοφορούντων μεσεγχυματικών προγονικών κυττάρων; Ποια είναι η προέλευση αυτών των κυττάρων τόσο στον αναπτυσσόμενο όσο και στον μεταγεννητικό οργανισμό και πώς διεισδύουν στον αγγειακό τοίχο; Η λύση αυτών των ζητημάτων είναι απολύτως απαραίτητη και απαιτεί την πιο εμπεριστατωμένη προκλινική ανάλυση. Ακόμη και μετά την εύρεση των απαντήσεων σε αυτές τις ερωτήσεις, οι προβληματικές κινητικές πτυχές που σχετίζονται με την ανάπτυξη του σκελετού και την αναδιαμόρφωση του συνδετικού ιστού παραμένουν ανεπίλυτες. Ταυτόχρονα, η θεραπεία των διαταραχών οστεογένεσης αντικαθιστώντας ολόκληρο τον πληθυσμό μεταλλαγμένων σκελετικών προγονικών κυττάρων με υγιή στρωματικά κύτταρα φαίνεται να είναι μια πραγματική κλινική προοπτική. Στην περίπτωση αυτή, η τοπική παραμόρφωση ή θραύση εξαιτίας παθολογικών οστεογένεση ζώνης και των οστών καταστροφικές μεταβολές μπορούν να διορθωθούν με τη χρησιμοποίηση ίη vitro καλλιεργημένα στρωματικά αρχέγονα κύτταρα. Επομένως, η κατεύθυνση της μελλοντικής έρευνας θα πρέπει να επικεντρώνεται στα προβλήματα μετασχηματισμού ή γενετικής διόρθωσης των αυτόλογων μεταλλαγμένων οστεογονικών προγονικών κυττάρων ex vivo.

Η γενετική μηχανική των κυττάρων, προσωρινά ή μόνιμα, έγινε η βάση της κυτταρικής και της μοριακής βιολογίας, την πηγή πολλών επιστημονικά ευρήματα σχετικά με τον ρόλο των μεμονωμένων πρωτεϊνών σε κυτταρικό μεταβολισμό in vitro ουσίες και in vivo. Η χρήση μοριακών τεχνικών για τη διόρθωση κληρονομικές ασθένειες και ασθένειες του ανθρώπου είναι πολύ ελπιδοφόρα για πρακτικούς φάρμακο, δεδομένου ότι οι ιδιότητες του οστού στρωματικών βλαστικών μυελού κύτταρα αφήνονται να αναπτυχθούν μοναδικές κυκλώματα μεταμόσχευση για διόρθωση γενετικών ασθενειών του σκελετού. Στην περίπτωση αυτή, τα μεσεγχυματικά προγονικά κύτταρα μπορούν να ληφθούν αρκετά εύκολα από το μέλλον αποδέκτη, που είναι επιδεκτικές σε γενετικό χειρισμό και είναι σε θέση να αναπαράγονται σε μεγάλους αριθμούς σε σύντομο χρονικό διάστημα. Χρήση των μεσεγχυματικών βλαστικών κυττάρων αποφεύγει τους περιορισμούς και τους κινδύνους που συνδέονται με την παράδοση των πληροφοριών υλικού γενετικών απευθείας στον ασθενή μέσω κατασκευάσματα φορέα vrtrusnye. Η στρατηγική αυτή είναι εφαρμόσιμη στις pi εμβρυϊκά βλαστικά κύτταρα, αλλά μεταγεννητική αυτόλογα στρωματικά κύτταρα μυελού των οστών - ένα προτιμώμενο υλικό επειδή η χορήγηση τους αποκλείει πιθανές ανοσολογικές επιπλοκές μετά τη μεταμόσχευση. Προκειμένου να επιτευχθεί βραχυπρόθεσμο αποτέλεσμα, για παράδειγμα προκειμένου να επιταχύνει την αναγέννηση των οστών, η βέλτιστη μέθοδος είναι η γενετική τροποποίηση των μεσεγχυματικών βλαστικών κυττάρων χρησιμοποιώντας elektroporatsrsh, χημική σύντηξη, λιπομόλυνση, πλασμίδια και αδενοϊικά κατασκευάσματα. Ειδικότερα, ιική επιμόλυνση σε στρωματικά κύτταρα του μυελού των οστών ΒΜΡ-2 ήταν αποτελεσματική στην επιτάχυνση της αναγέννησης των οστών σε πειραματικούς πολλαπλών τραυμάτων. Η δημιουργία δομών αδενοϊικού φορέα προτιμάται λόγω της απουσίας τοξικότητας. Ωστόσο, η γενετική τροποποίηση των στρωματικών κυττάρων μυελού των οστών σε αυτή την περίπτωση χαρακτηρίζεται από εξαιρετικά χαμηλή σταθερότητα. Επιπλέον, η κανονική μετασχηματισμένα στρωματικά κύτταρα του μυελού των οστών απαιτούν τη χρήση των φορέων φορέα της γενετικής πληροφορίας 10 φορές περισσότερο μολυσματικός από άλλους τύπους κυττάρων, το οποίο αυξάνει σημαντικά το ποσοστό του θανάτου των επιμολυσμένων κυττάρων.

Για θεραπεία υπολειπόμενο ασθενειών που προκαλούνται από χαμηλές ή μηδενικές βιολογική δραστικότητα ορισμένων γονιδίων αναγκαίων παρατεταμένη ή μόνιμη τροποποίηση μεσεγχυματικών βλαστικών κυττάρων, η οποία απαιτεί τη χρήση των αδενο-σχετιζόμενου ιούς, ρετροϊούς, λεντιϊούς και αδενο-ρετροϊικών χίμαιρα. Οι θέσεις μεταφοράς αυτών των ιών είναι ικανές να μεταφέρουν μεγάλες μεταμοσχεύσεις DNA (μέχρι 8 kb). Η επιστημονική βιβλιογραφία έχει ήδη εμφανιστεί πληροφορίες σχετικά με τη βιολογική δραστικότητα των εξωγενών στρωματικών κυττάρων του μυελού των οστών διαμολυσμένα με ρετροϊικό κατασκευάσματα που κωδικοποιούν τη σύνθεση των ρυθμιστικών μορίων, και δείκτες - IL-3, CD2, παράγοντα VIII, και τα ένζυμα που εμπλέκονται στη σύνθεση της L-DOPA. Αλλά σε αυτά τα έργα οι συγγραφείς επισημαίνουν ορισμένους περιορισμούς που πρέπει να ξεπεραστούν πριν αρχίσει η πρακτική εφαρμογή αυτής της τεχνολογίας. Το πρώτο πρόβλημα είναι η βελτιστοποίηση της διαδικασίας τροποποίησης ex νίνο MCK. Είναι γνωστό ότι ένας παρατεταμένος (3-4 εβδομάδων) πολλαπλασιασμός των στρωματικών κυττάρων μυελού των οστών in vitro μειώνει τη διαμόλυσή τους. Ταυτόχρονα, απαιτούνται αρκετοί κύκλοι μετάγγισης για την επίτευξη υψηλού επιπέδου γενετικής τροποποίησης των MSC. Το δεύτερο πρόβλημα σχετίζεται με τη διάρκεια έκφρασης του θεραπευτικού γονιδίου, η οποία δεν υπερβαίνει ακόμη τους τέσσερις μήνες. Μία φυσική μείωση στην αποτελεσματική γονιδιακή έκφραση οφείλεται στην αδρανοποίηση προαγωγών και στον θάνατο τροποποιημένων κυττάρων. Σε γενικές γραμμές μεταφοράς προοπτικές της γενετικής πληροφορίας με τη χρήση μεσεγχυματικών βλαστικών κυττάρων αποτελέσματα των προκαταρκτικών μελετών υποδεικνύουν την ανάγκη για περαιτέρω βελτιστοποίηση των μεθόδων διαμόλυνσης ex νίνο, επιλέγοντας μια κατάλληλη προαγωγού που ρυθμίζουν την βιολογική δραστικότητα προς τη σωστή κατεύθυνση, και να ενισχύσει την ικανότητα των τροποποιημένων στρωματικών κυττάρων του μυελού των οστών να αυτο-ανανέωση ίη νίνο μετά την μεταμόσχευση. Θα πρέπει να σημειωθεί ότι η χρήση των ρετροϊικών κατασκευασμάτων για την τροποποίηση των στρωματικών κυττάρων του μυελού των οστών προς την επιθυμητή κατεύθυνση δεν απαιτεί πάντα υποχρεωτική εμφύτευση τους. Επιμολυσμένα μεσεγχυματικού βλαστικού κυττάρου μπορεί να εκτελέσει μια διορθωτική λειτουργία στο φόντο των σταθερών και διαμονής χωρίς να απαιτείται δραστική φυσική σύσταση και τη λειτουργία στο συνδετικό ιστό. Σε αυτή την περίπτωση, θα πρέπει να θεωρηθεί ως μια βιολογική μίνι-αντλία, που παράγουν το βιολογικό παράγοντα, η έλλειψη των οποίων καθορίζει την εκδήλωση μιας γενετικής ασθένειας.

Χρήση των μετασχηματισμένων οστών στρωματικά κύτταρα μυελού για τη θεραπεία της δεσπόζουσας γενετική ασθένεια που χαρακτηρίζεται από την έκφραση του γονιδίου ή ανώμαλη παθολογική βιολογική δραστικότητα, είναι πολύ πιο προβληματική επειδή σε αυτή την περίπτωση, είναι αναγκαίο για να εμποδίσει την μεταφορά ή την πώληση της γενετικής πληροφορίας παραμορφωμένη. Μία από τις μεθόδους της γενετικής μηχανικής - ομόλογος ανασυνδυασμός των εμβρυϊκών βλαστικών κυττάρων για τη δημιουργία διαγονιδιακών ζώων. Ωστόσο, το εξαιρετικά χαμηλό επίπεδο ομόλογου ανασυνδυασμού, σε συνδυασμό με τα προβλήματα της αναγνώρισης, το διαχωρισμό και την επέκταση των εν λόγω προϊόντων ανασυνδυασμού είναι απίθανο να προωθήσει την ευρεία χρήση της τεχνικής αυτής στο εγγύς μέλλον, ακόμη και αν η ανάπτυξη των νέων τεχνολογικών μεθόδων. Η δεύτερη προσέγγιση για την γονιδιακή θεραπεία βασίζεται στην κυρίαρχη παθολογία αυτόματη διόρθωση του κατεστραμμένου DNA όπως γενετικές μεταλλάξεις μπορούν να διορθωθούν με την εισαγωγή του εξωγενούς DNA με την επιθυμητή αλληλουχία (σύντομη DNA ολιγονουκλεοτίδια, ή χιμαιρικά ολιγονουκλεοτίδια RNA / DNA) τα οποία συνδέονται με ομόλογα στο κατεστραμμένο γονιδίωμα. Η τρίτη ενσωμάτωση παρέχει παθολογικές κλειδαριά μετάδοση πληροφοριών η οποία επιτυγχάνεται μέσω της χρήσης των ειδικά σχεδιασμένη ολιγονουκλεοτιδίων τα οποία δεσμεύονται σε ένα συγκεκριμένο γονίδιο για να σχηματίσει τριαδικό ελικοειδή δομή, η οποία αποκλείει τη δυνατότητα της μεταγραφής.

Αν και η διόρθωση των γενετικών ασθενειών σε επίπεδο γονιδιώματος είναι η βέλτιστη και προτιμώμενη θεραπευτική μέθοδος, το mRNA είναι επίσης ένα υποσχόμενο φορέα (ίσως ακόμη πιο προσιτή) δια την διακοπή της επικρατόν αρνητικό γονίδιο. Προκειμένου να αναστέλλουν μετάφραση ή / και την αύξηση της αποδόμησης του mRNA έχουν από μακρού χρησιμοποιηθεί με μόρια πρωτεΐνης αλληλουχίες αντιπληροφοριακό ολιγονουκλεοτίδιο ή πρόσδεση του mRNA βιοσυνθετικού μηχανισμού του κυττάρου πλήρους μπλοκαρίσματος. Επιπλέον, διπλόκλωνο RNA επάγει ταχεία αποικοδόμηση του mRNA, ο μηχανισμός του οποίου παραμένει ασαφής. Ωστόσο, είναι απίθανο ότι η απλή απομάκρυνση του mRNA που μεταγράφεται από ένα μεταλλαγμένο αλληλόμορφο με κοντό ή απλές μεταλλάξεις θα προάγουν την έκφραση του mRNA του κανονικού αλληλίου. Μια εναλλακτική λύση είναι η χρήση ribozinov hammerhead και φουρκέτας, έχουν την ικανότητα να δεσμεύονται σε εξαιρετικά ειδικές θέσεις του mRNA με επακόλουθη επαγωγή της διάσπασης και την αδρανοποίηση τους κατά τη διάρκεια της μετάφρασης. Επί του παρόντος, μελετάται η δυνατότητα χρήσης αυτής της μεθόδου στη θεραπεία της παθολογικής οστεογένεσης. Ανεξάρτητα από το τι ακριβώς είναι ο στόχος - γενωμική ή κυτταροπλασματικές στοιχείων επιτυχία της νέας τεχνολογίας γονιδιακής θεραπείας θα καθορίζεται από την αποτελεσματικότητα της ενσωμάτωσης των αντιδραστηρίων σε στρωματικά κύτταρα του μυελού των οστών ex vivo, η βέλτιστη επιλογή ενός συγκεκριμένου φορέα και σταθερή ικανότητα των μεσεγχυματικών βλαστικών κυττάρων που εκφράζουν τα επιθυμητά παραγόντων ίη νίνο.

Έτσι, η ανακάλυψη των μεσεγχυματικών βλαστικών κυττάρων με απροσδόκητες ιδιότητες τους δημιουργεί ένα νέο εννοιολογικό πλαίσιο των κυτταρικών γραμμών. Αλλά για να κατανοήσουν το βιολογικό ρόλο των στρωματικών βλαστοκυττάρων, της φύσης τους, η ικανότητα να μεταδιαφοροποίηση ή αποδιαφοροποίηση, φυσιολογική σημασία τους στη διαδικασία της εμβρυϊκής ανάπτυξης, μεταγεννητική ανάπτυξη, την ωρίμανση και τη γήρανση, καθώς και σε ανθρώπινες ασθένειες απαιτούν περαιτέρω διεπιστημονική έρευνα.